孔路科
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：兰州大学基础医学院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 质粒介导的AmpC β-内酰胺酶共有抗原表位的预测及原核表达
- 目的：应用生物信息学方法预测质粒介导的AmpC β-内酰胺酶(pAmpcs)共有抗原表位，并实现pAmpCs共有抗原表位-Trx融合蛋白的原核表达、纯化和鉴定。
方法：运用多序列比较工具找出各型质粒介导的Amp...
- 孔路科
- 关键词：质粒介导Β-内酰胺酶抗原表位原核表达生物信息学
- 文献传递
- survivin蛋白的原核高效、可溶性表达及其抗体在恶性肿瘤早期诊断中的应用被引量：1
- 2008年
- 目的实现重组survivin在大肠杆菌中的高效、可溶性表达,检测健康人和肿瘤患者血清中anti-survivin并探讨其在肿瘤早期诊断中的应用价值。方法重组PET32a-survivin质粒转化BL21感受态细胞,IPTG诱导表达8h后对表达产物行溶菌酶处理、冻融及超声处理,SDS-PAGE及Westernblot鉴定后用镍离子金属螯合层析柱纯化。建立基于重组融合蛋白的survivin特异性抗体的检测方法,对300份健康血清、144份肿瘤血清anti-survivin进行了检测,并将anti-sur-vivin与肝癌、肠癌、胰腺癌、卵巢癌患者中AFP、CEA、CA199、CA125等肿瘤标志物进行了联合分析。结果重组survivin融合蛋白在BL21中获得了高效、可溶性表达,表达量约占菌体总蛋白的30%。建立了检测survivin抗体的间接ELISA方法,anti-survivin在不同的肿瘤血清中均有表达,阳性率各不相同。结论成功的实现了survivin蛋白在大肠杆菌中的高效、可溶性表达;结果提示在肿瘤的辅助诊断中,anti-survivin与现有的肿瘤标志物CA199、CEA、CA-199和CA-125联合检测,可以互相补充其不足,提高肿瘤的诊断率。
- 吴素香马骢郭建巍黎卫平孔路科魏杰
- 关键词：生存素酶联免疫吸附实验重组融合蛋白
- 质粒介导的AmpC β-内酰胺酶共有抗原表位的预测及原核表达
- 2008年
- 目的:应用生物信息学方法预测质粒介导的AmpC β-内酰胺酶(pAmpCs)共有抗原表位,并实现pAmpCs共有抗原表位-Trx融合蛋白的原核表达、纯化和鉴定。方法运用多序列比较工具找出各型质粒介导的AmpC β-内酰胺酶的共有相对保守区域,并利用分子生物学软件Biosun预测各亚型pAmpCs的可及性、抗原性、抗原表位、柔性、亲水性等参数,通过综合分析后找出其共有的抗原表位区域pAmpCs1。根据大肠杆菌的密码子偏好性,把氨基酸序列pAmpCs1转变为核苷酸序列pampcs1,采用重叠延伸PCR合成pampcs1片断,并构建原核表达载体pET32a(+)/pampcs1。通过测序验证,对含有该重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳分析后,用Ni-NTA亲和层析法纯化pAmpCs1-Trx融合蛋白,利用Western blot方法鉴定融合蛋白的抗原性。结果:根据预测结果找到了一段各型pAmpCs共有的抗原表位区域pAmpCs1,成功构建了原核表达载体pET32a(+)/pampcs1,经IPTG诱导后得到了分子量约为23kDa的融合蛋白,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,通过Western blot鉴定该蛋白能被抗AmpC β-lactamases多抗识别。结论:成功构建了pAmpCs1-Trx融合蛋白原核表达载体,并获得了高纯度的pAmpCs1-Trx融合蛋白,初步证明它的抗原性,为制备特异性抗体及建立快速检测方法打下了良好的基础。
- 孔路科郭建巍马骢杨林西魏杰吴素香
- 关键词：生物信息学抗原表位
- 创伤弧菌溶血素基因的高效表达与鉴定
- 2008年
- 目的:构建创伤弧菌溶血素基因(vvc)的融合表达载体,并实现创伤弧菌溶血素在大肠杆菌中的高效表达.方法:用一对创伤弧菌溶血素基因特异性引物从创伤弧菌基因组DNA中钓取vvc基因,T-A克隆后测定核苷酸序列,构建pET-32 a(+)-vvc融合表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物行SDS-PAGE并进行W est-ern B lot鉴定.结果:构建了pET-32 a(+)-vvc融合表达载体,DNA测序证明,获得的vvc基因长度为1311 bp,与Gen-Bank中报道的创伤弧菌溶血素基因序列完全一致.SDS-PAGE分析表明,vvc融合蛋白Mr为71×103,其表达量约占菌体总蛋白的32%.Western blot结果显示,目的蛋白可与创伤弧菌免疫后的小鼠血清特异性结合.结论:成功地实现了VVC基因在大肠杆菌中的高效表达,为进一步研究vvc蛋白的生物学功能奠定基础.
- 魏杰郭建巍马骢朱玉真孔路科吴素香
- 关键词：溶血素类基因表达
