孙伟明
- 作品数：17 被引量：29H指数：3
- 供职机构：河北农业大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63 afsA基因功能的初步鉴定
- 2014年
- A-因子是灰色链霉菌次级代谢和形态分化的自调节因子,研究发现,afsA家族基因编码链霉菌A-因子及其类似物合成过程中的一种关键酶。前期本研究将玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63抗生素合成基因簇定位于其线性质粒pSR47上,生物信息学分析发现pSR47含有afsA家族基因。为了明确afsA在玫瑰黄链霉菌中的作用,本研究通过构建afsA基因敲除载体,应用接合转移方法将其转入玫瑰黄链霉菌,筛选获得发生同源重组的afsA缺失突变株。试验发现缺失突变株只产生少量气生菌丝及孢子,并且丧失对指示菌的拮抗作用,这说明afsA基因参与控制玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63的形态分化及抗生素产生。
- 吕向坤孙伟明郭巍赵丹刘大群徐大庆
- 关键词：玫瑰黄链霉菌AFSA
- 物理法去除蔬菜农药残留技术的研究与应用
- 齐志彩孙伟明陈冰月谷素芳高颖莉吕俊庆毕秋辉商蕾
- 课题研究采用流动的自来水冲洗，对于较低残留量的样品(0.68mg/kg)，去除效果较好，最高也能达100%；用温水浸泡，50℃温水比30℃温水去除效果好。在相同处理方式下，随着处理时间的延长，残留去除率增加。但值得注意的...
- 关键词：
- 关键词：蔬菜农药残留
- 棉铃虫围食膜肠粘蛋白HaIIM72真核表达及几丁质结合活性检测
- 2013年
- 在前期工作中,本实验室已成功克隆得到棉铃虫粘蛋白基因haiim72。为了研究粘蛋白HaIIM72的生化特性,本试验将haiim72基因克隆到质粒pFastBacTM,转化大肠杆菌DH10Bac,构建重组杆状病毒bacmid-hai-im72,转染昆虫细胞系BTI-TN-5B1-4(HighFive)从而在昆虫细胞系中进行表达。结果表明:成功表达了分子量约260kDa的棉铃虫围食膜肠粘蛋白HaIIM72。几丁质结合活性试验表明,肠粘蛋白HaIIM72具有几丁质结合活性,能够被较强的变性剂洗脱,属于第三类围食膜蛋白。
- 张晓刚郭巍徐大庆赵丹孙伟明单鸣
- 关键词：棉铃虫围食膜真核表达
- 一株对花生果腐病具有防效的金龟子绿僵菌及其发酵工艺
- 本发明涉及微生物防治领域，特别涉及金龟子绿僵菌菌株、液固双相发酵工艺及发酵菌剂在防治花生果腐病中的应用。包含保藏编号为CGMCC No.8385的金龟子绿僵菌菌剂1～10万亿孢子/亩穴施于花生，田间防病试验表明对花生果腐...
- 郭巍李瑞军陆秀君于浩海孙伟明赵丹徐大庆康占海王伟
- 文献传递
- 对粉纹夜蛾高毒力cry9Ea基因的克隆及表达被引量：5
- 2010年
- 【目的】从本实验室分离的Bt4菌株中克隆cry9Ea基因,并研究其表达和杀虫活性。【方法】以PCR-RFLP方法鉴定Bt4菌株含有cry9基因,然后以菌株Bt4的质粒为模板,利用全长引物F9EA/R9EA进行PCR扩增全长基因。【结果】将目的片段插入到表达载体pET21b,得到大肠杆菌重组表达质粒pETcry9Ea。转化E.coli BL21(DE3),诱导后表达130kDa的蛋白,再将cry9Ea7基因连接到穿梭载体pSXY422b,电激转化HD73-(cry-),得到工程菌BioHD9Ea7,提取Cry9Ea7晶体蛋白,并进行生物活性测定。生物活性测定结果显示Cry9Ea7蛋白对粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)初孵幼虫具有高毒力,LC50为0.044μg/mL,而对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)初孵幼虫未显示活性。【结论】克隆和表达了一个对粉纹夜蛾高毒力的基因cry9Ea7,并成功构建了工程菌BioHD9Ea7。
- 孙永祥刘廷辉郭巍王立光孙伟明
- 关键词：苏云金杆菌基因克隆基因表达杀虫活性
- 邢台市流感病原学监测及流感病毒混合感染的初步研究
- 孙伟明闫英民董江华庞俊华宋红芳陈凤阳苏铭
- 流行性感冒(Influenza)简称流感，是一种由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，被列为中国丙类法定传染病。利用MDCK细胞培养技术对流感病毒进行分离鉴定，是流感诊断的“金标准”，也是一种现代化先进技术。课题创新点在于：...
- 关键词：
- 关键词：流行性感冒
- 一株新的拮抗细菌SL19及其抑菌活性物质被引量：9
- 2011年
- 生防菌SL19对多种植物病原菌有抑菌活性。通过形态观察、生理生化实验和基于16S rDNA同源性序列分析构建系统发育树,鉴定该菌为Bacillus velezensis。利用对峙实验测定了该菌的抑菌谱,发现该菌对大丽轮枝菌、尖孢镰刀菌、灰葡萄孢菌、立枯丝核菌、疮痂链霉菌等多种植物病原微生物有明显的抑菌作用。利用硫酸铵盐析法分离纯化活性物质,并对其理化性质进行初步探索显示:抑菌活性物质经60°C、80°C处理20 min后的抑菌活性不变;经100°C处理20 min,活性降低为原来的75.3%;经120°C处理20 min后抑菌活性完全丧失。对胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K、氯仿、紫外光均不敏感,SDS-PAGE检测发现该抑菌活性物质中含有分子量约为50 kD的蛋白质,初步推测该菌分泌的抑菌活性物质主要是蛋白质类物质。实验表明,该抗菌蛋白能够抑制大丽轮枝菌菌丝的生长及孢子的萌发,为该菌用于生物防治提供了理论基础。
- 刘莲娜孙伟明郭巍冯丽娜徐大庆刘大群
- 关键词：BACILLUS生物防治
- 甜菜夜蛾围食膜几丁质结合蛋白SeCBP66在不同体系中的表达
- 2012年
- 分析甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)围食膜几丁质结合蛋白SeCBP66氨基酸序列,利用PCR技术扩增获得缺失信号肽编码区围食膜几丁质结合蛋白的基因△(s)-secbp66。将△(s)-secbp66克隆到表达载体pET28a和pPIC9K,分别转化大肠杆菌BL21和毕赤酵母GS115进行原核及真核表达;将△(s)-secbp66克隆到质粒pFastBacTM,转化大肠杆菌DH10Bac构建重组Bacmid,转染昆虫细胞系Sf9及BTI-TN-5B1-4(HighFive)从而在昆虫细胞系中进行表达。结果表明:SeCBP66在原核细胞中未见表达,在酵母细胞中表达产物呈弥散状,而在昆虫细胞系中则能稳定的表达116kDa的特异蛋白。
- 刘彬李瑞军郭巍孙伟明赵丹单鸣徐大庆
- 关键词：甜菜夜蛾原核表达系统毕赤酵母表达系统昆虫细胞系
- 苏云金杆菌Cry8Ea2蛋白的分离纯化及生物活性测定被引量：1
- 2012年
- Cry8Ea2蛋白是一种新型苏云金杆菌杀虫晶体蛋白。通过穿梭载体pSXY422b将cry8Ea2导入Bt无晶体突变菌株中,获得工程菌HD8Ea2。Cry8Ea2蛋白在工程菌中获得表达。通过分子筛层析,成功获得纯化的130 kDa活性毒素蛋白。用改进的生物活性测定方法进行Cry8Ea2蛋白对华北大黑鳃金龟和暗黑鳃金龟一龄幼虫的杀虫活性测定,LC50分别为0.267 9μg/mL和0.071 9μg/mL。研究首次发现Cry8Ea2蛋白对华北大黑鳃金龟具有较高毒力,拓展了该蛋白的杀虫谱,为转基因工程提供了新资源。
- 王伟郭巍徐大庆孙伟明刘大群李瑞军
- 关键词：苏云金杆菌穿梭载体蛋白纯化生物活性测定
- 苏云金杆菌cry7Ab8基因的克隆表达及其杀虫活性被引量：3
- 2011年
- 克隆对鞘翅目害虫有毒力的B t新菌株GW S7的cry7Ab8基因,并对该基因进行表达和杀虫活性的研究。利用全长PCR方法克隆cry7Ab8基因,将cry7Ab8基因插入到表达载体pET28b,获得重组质粒pETcry7Ab8,转化E.coliBL21(DE3),诱导后表达130 kDa的蛋白。将cry7Ab8基因连接到大肠杆菌-苏云金杆菌的穿梭载体pSXY422b,获得重组穿梭质粒pScry7Ab8,电激转化到苏云金杆菌无晶体突变株HD73-(cry-),获得工程菌B ioHD7Ab8,表达蛋白后进行生物活性测定。生物活性测定结果显示Cry7Ab8蛋白对马铃薯瓢虫二龄幼虫有较强的杀虫活性,LC50为548μg/mL。
- 冯静静郭巍刘廷辉孙永祥孙伟明徐大庆
- 关键词：苏云金杆菌基因克隆基因表达杀虫活性
