宋琳琳
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 供职机构：河南科技学院更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 可转化人工染色体（TAC）文库载体DNA制备的研究
- 大片段基因组文库是进行基因组研究、基因分离及其快速利用的一项重要的基础性工作，特别是对于大基因组生物来说更是如此。可转化人工染色体(Transformation-competent artificial chromoso...
- 宋琳琳
- 关键词：酶切脱磷电转化
- 文献传递
- 可转化人工染色体文库的构建与鉴定被引量：1
- 2006年
- 随着人类和植物基因组计划的实施,能容纳大片段的人工染色体载体发展迅速。而用YAC、BAC和PAC等基因组文库进行目的基因的筛选,在获得候选克隆后,通常要进行亚克隆,然后对每个亚克隆逐一进行基因功能互补试验,不仅工作量大,而且有遗漏目的基因的危险。TAC载体含P1质粒和Ri质粒的复制子,可直接转化植物,大大加速了工作进程。概括性的叙述了TAC载体的发展,TAC文库构建的程序及文库鉴定的问题。
- 宋琳琳赵茂林
- 关键词：可转化人工染色体文库构建基因
- 多枝赖草基因组可转化人工染色体(TAC)文库的构建和鉴定被引量：6
- 2008年
- 为了克隆和转化多枝赖草(Leymus multicaulis)的耐黄矮病、耐蚜虫、耐干旱、耐盐碱等抗逆性基因,利用脉冲电泳分离纯化2Mb以上核DNA,酶切后回收10～200kb DNA片段按大小分5组与TAC载体连接后电转化导入细菌DH10B,在卡那霉素和蔗糖选择压下均有阳性克隆.用两种TAC载体pYLTAC17和pYLTAC747H/sacB分别构建了文库Ⅰ和Ⅱ,约16.5和23.6万个克隆,估计覆盖3～5倍多枝赖草基因组大小.文库以混合克隆形式保存在12×2块深孔96孔板中,每孔1.2mL菌液中含300～600个克隆,40多万个克隆转存到3块384孔板,留24个孔存叶绿体和线粒体DNA探针菌液,可用于后续文库鉴定.此外,从文库Ⅰ和Ⅱ分别挑取2501和2890个单克隆存于14块384孔板中.17块384孔板都用GeneTACTMG3复制了2份,点高密度杂交膜6张,以多枝赖草谷胱甘肽还原酶基因5′RACE-GR和3'RACE-GR为探针初步筛选到19个阳性克隆.两文库为多枝赖草抗性基因的克隆、物理图谱的构建、功能验证等基因组有关研究奠定了基础。
- 徐粤宇周玉雷宋琳琳张艳赵茂林
- 关键词：基因组文库
