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海参溶菌酶的基因结构与表达分析: 海参i型溶菌酶与c型鸡蛋清溶菌酶相比较,它们的共同之处是都能水解革兰氏阳性细菌(G+),即催化这类细菌细胞壁中主要成分肽聚糖的N-乙酰胞壁酸(N-acetylmuramic acid, NAM)和N-乙酰葡萄糖胺(N-a...; 常艺海; 关键词：可溶性蛋白分离纯化抑菌活性

一种重组海参溶菌酶C端多肽、其制备方法和应用: 本发明涉及对来源于海刺参(Stichopus japonicus)溶菌酶(SjLys)基因(GenBank注册号为EF036468)进行C端多肽的重组表达。首先构建出重组表达质粒pET-32a-SjLys-C，再转化至大...; 丛丽娜常艺海

重组海参溶菌酶基因工程菌的构建及原核表达被引量：5: 2012年; 根据GenBank中海刺参溶菌酶的cDNA序列(Accession no.EF036468),利用RT-PCR技术扩增出海刺参溶菌酶的基因片段(SL),将其克隆到原核表达载体pET-32a(+),得到重组质粒pET-32a(+)-SL,再转化至E.coil Rosetta(DE3)pLysS。利用IPTG诱导表达,重组蛋白经SDS-PAGE分析,得到一条分子质量约为31ku的特异条带。经过Western blotting分析鉴定,结果显示重组海参溶菌酶成功在大肠杆菌中表达,并且有部分可溶性蛋白,占总菌体蛋白约10%。这些结果为进一步研究海参溶菌酶的作用机理奠定基础。; 常艺海丛丽娜卢冬; 关键词：溶菌酶原核表达克隆海参

一种重组海参溶菌酶N端多肽、其制备方法和应用: 本发明涉及对来源于海刺参(Stichopus japonicus)溶菌酶(SjLys)基因(GenBank注册号为EF036468)进行N端多肽的重组表达。首先构建出重组表达质粒pET-32a-SjLys-N，再转化至大...; 丛丽娜常艺海; 文献传递

一种重组海参溶菌酶C端多肽、其制备方法和应用: 本发明涉及对来源于海刺参(Stichopus japonicus)溶菌酶(SjLys)基因(GenBank注册号为EF036468)进行C端多肽的重组表达。首先构建出重组表达质粒pET-32a-SjLys-C，再转化至大...; 丛丽娜常艺海; 文献传递

重组海参溶菌酶N端可溶性表达与抑菌分析: 2013年; 通过对海参(Stichopus japonicus)溶菌酶(SjLys)cDNA(Genbank accession no:EF036468)片段的分析,结果发现N端基因区域所对应的蛋白质序列中含有糖苷酶活性。因此利用RT-PCR技术以其为模板,扩增出长度为174 bp的溶菌酶N端(SjLys-N)基因,将其亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a(+)-SjLys-N,再转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)pLysS,成功地构建了重组SjLys-N的基因工程菌。该工程菌在改造的LB培养基和最适的发酵条件下经IPTG诱导后,表达约23 kD的重组SjLys-N蛋白。此外,它还能以可溶性的形式表达,占总菌体蛋白约46%。经过Western blotting分析,重组SjLys-N在23 kD左右能够与penta-his抗体发生特异性免疫反应,结果表明重组SjLys-N得到正确的表达。最后对纯化后的重组SjLys-N进行了抑菌特性的分析,结果发现它对溶壁微球菌和副溶血弧菌有较高的抑菌活性。上述结果将为进一步研究海参溶菌酶的基因结构与功能之间的关系提高参考。; 常艺海丛丽娜栾桂花刘志文杨杰钱斯日古楞; 关键词：可溶性表达抑菌活性

基因工程菌发酵生产海参溶菌酶和溶菌肽的研究与应用: 本研究采用基因工程重组技术,从海参组织中克隆并鉴定溶菌酶基因,并将该基因的功能片段分离成两部分,即N端和C端基因。再利用能高效表达的、大肠杆菌偏受的简易密码子的表达载体和转化细胞,构建了三株能高效表达海参溶菌酶(SjLy...; 丛丽娜常艺海刘志文钱斯日古楞; 关键词：水产养殖基因工程菌发酵生产; 文献传递

一种重组海参溶菌酶N端多肽、其制备方法和应用: 本发明涉及对来源于海刺参(Stichopus japonicus)溶菌酶(SjLys)基因(GenBank注册号为EF036468)进行N端多肽的重组表达。首先构建出重组表达质粒pET-32a-SjLys-N，再转化至大...; 丛丽娜常艺海

日本对虾c型溶菌酶的高效重组表达及产物分析被引量：7: 2012年; 从日本对虾(Marsupenaeus japonicus)血液中提取总RNA,根据GenBank已登录的该cDNA序列(AB080238),通过RT-PCR技术扩增出日本对虾溶菌酶(MjLys)成熟肽基因。该基因完整的开放阅读框为477 bp,编码158个氨基酸(aa),前18 aa为信号肽,成熟肽由140 aa组成,分子量为16.4 kD,理论等电点(pI)为8.80。经分析表明,该基因含有一个完整的c型溶菌酶结构域(1-130 aa),包括c型溶菌酶特有的两个活性中心Glu33和Asp50,以及8个保守结构Cys残基。将MjLys成熟肽基因亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌细胞BL21(DE3)pLysS中诱导发酵,实现了重组MjLys蛋白的高效表达,并测定了该重组蛋白对几种细菌的抑菌活性。结果表明,重组日本对虾溶菌酶对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌和溶壁微球菌均有显著的溶菌活性。; 杨杰丛丽娜夏涛常艺海栾桂花; 关键词：甲壳纲动物日本对虾

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常艺海