庞丹
- 作品数：15 被引量：9H指数：2
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- comE基因缺陷影响肺炎链球菌体内诱导基因的表达
- 2010年
- 【目的】筛选受comE调控的肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)体内诱导基因。【方法】通过插入失活构建基因comE缺陷的S.pn菌株,与野生菌株分别腹腔注射BALB/c小鼠,经过体内诱导后取小鼠血,分离细菌提取RNA,用RT-PCR法检测13个体内诱导基因mRNA水平差异。【结果】将RT-PCR结果通过Quantity-one灰度分析,进行配对t检验,显示8个体内诱导基因在缺陷菌株和野生菌株中mRNA表达水平具有统计学差异(P<0.05),其中spd-0300、spd-0414、spd-0622、spd-1663、spd-1719、spd-0235、spd-0873受转化上调,spd-1672受转化下调。【结论】筛选出受转化调控的体内诱导基因spd-0300、spd-0414、spd-0622、spd-1663、spd-1719、spd-0235、spd-0873、spd-1672,它们可能参与生长调节、温度感应、糖脂代谢等环节,表明细菌转化可通过调节某些体内诱导基因的表达来增强细菌的毒力。
- 刘鑫尹楠林张雪梅杨晓亮庞丹王虹尹一兵胥文春
- 关键词：肺炎链球菌COME毒力
- 肺炎链球菌减毒活菌疫苗
- 本发明涉及一种用于预防肺炎链球菌感染的肺炎链球菌减毒活菌疫苗，该疫苗为含有肺炎链球菌SPD_1672基因功能缺陷的D39△1672肺炎链球菌菌株的组合物，能够有效预防肺炎链球菌感染，安全性强、保护效果好、易大规模生产、具...
- 尹一兵张雪梅吴凯峰姚润庞丹
- 文献传递
- 运用自身环化方法鉴定和分析体内诱导基因生物学功能
- 目的运用酶切自连法鉴定肺炎链球菌在小鼠体内被诱导表达的X基因片断和初步分析其生物学功能。方法利用酶切自连法,使整合到染色体上重组自杀质粒脱落下来并重新环化:首先提取FACS分选出的小鼠体内具有荧光的细菌菌株的染色体DNA...
- 庞丹张雪梅尹一兵
- 文献传递
- 运用自身环化方法鉴定和分析体内诱导基因生物学功能
- 庞丹张雪梅尹一兵
- 肺炎链球菌的一种荚膜表面聚合连接酶的鉴定
- 肺炎链球菌的荚膜多糖生成后需连接到细胞壁形成荚膜,其机制尚不清楚。本课题组前期利用DFI技术筛出一个体内诱导基因spd1672,该基因编码的假想蛋白经过NCBI预测可能具有LipidA-O抗原连接酶的功能,本研究针对该蛋...
- 庞丹王虹杨晓亮刘鑫张雪梅尹一兵
- 关键词：肺炎链球菌荚膜多糖
- 文献传递
- comE基因的表达水平与肺炎链球菌的转化率相关性研究
- 2009年
- 目的:探讨肺炎链球菌感受态形成关键基因comE的表达对肺炎链球菌转化的影响.方法:构建肺炎链球菌基因comE的缺陷菌株,将野生菌株与缺陷菌株分别进行自然转化和感受态刺激因子(CSP)诱导转化,记录不同时间段的转化率,并采用FQ-PCR技术检测其comE的mRNA表达水平.结果:comE基因缺陷菌株的自然转化和CSP诱导转化率都为0,且检测不到comE的mRNA表达.R6野生菌株的自然转化率在细菌密度A550 nm为0.3左右时最高,comEmRNA的表达水平与其转化率的相关系数为0.244.D39在不同浓度CSP的诱导下都能发生转化,但CSP浓度为100μg/L时的转化率高于10,1000μg/L两个诱导浓度.100μg/L CSP诱导10 min时comEmRNA的表达量较基础水平显著增高(P<0.05).10,1000μg/L CSP诱导时,其不同时间comEmRNA的表达量与其转化率相关性差.100μg/L CSP诱导时,其转化率与0,20 min时comEmRNA表达量的相关系数分别为0.9966和0.9984;与10 min时comEmRNA表达量的相关系数为0.7950.结论:不管是自然转化还是CSP诱导转化,comE的表达都是必需的,但其表达水平与细菌的自然转化率无显著相关性.CSP诱导转化的最佳浓度为100μg/L,此时的转化率与comEmRNA的基础表达量显著相关,而在10,1000μg/L的CSP诱导时不存在这种相关性.
- 朱兴华吴凯峰尹楠林庞丹胥文春王虹尹一兵张雪梅
- 关键词：链球菌肺炎COME实时荧光定量聚合酶链反应
- 肺炎链球菌假想蛋白SPD-0873溶菌酶活性的分析和鉴定
- 目的:探索肺炎链球菌假想蛋白SPD-0873的溶菌酶活性。方法:通过生物信息学分析假想蛋白SPD-0873的结构功能域;体外表达纯化SPD-0873蛋白;按照经典溶菌酶活性试验,利用底物PNP-(GlcNAc),对SPD...
- 杨晓亮崔亚利王虹刘鑫庞丹班艳娜尹一兵张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌溶菌酶
- 文献传递
- 一种减毒肺炎链球菌溶血素突变体的构建与表达被引量：2
- 2010年
- 目的使用重叠PCR方法构建构建△Al46Ply突变体，原核可溶性表达△Al46Ply蛋白，并明确其毒力变化情况；分析肺炎链球菌溶血素（pneumolysin，Ply）在不同血清型肺炎链球菌（streptococcus pneumoniae，SPN）中的表达情况。方法以SPND39型基因组DNA为模板设计合成构建突变体pry基因所需引物；利用重叠PCR方法扩增合成△Al46ply突变体。通过溶血实验分析其溶血活性，利用中和试验验证△A146Ply诱导产生的特异性抗体中和野生Ply毒素溶血能力，并利用Western印迹检测5株不同血清型肺炎链球菌流行菌株中Ply蛋白表达情况。结果突变体基因测序结果显示，Plyl46位密码子GCT3个碱基被缺失，△Al46ply突变体构建成功，并实现了△Al46Ply的可溶性表达，得到纯度〉90％的重组蛋白。△A146Ply蛋白浓度为100000ng／ml亦未表现出溶血活性。△Al46Ply蛋白诱导产生的特异性抗体能够中和野生Ply毒素的溶血活性。Western印迹结果显示，△Al46Ply诱导产生的多克隆抗体可与国内临床常见4株肺炎链球菌有交叉反应。结论△Al46Ply蛋白是一种安全的肺炎链球菌疫苗候选分子，可刺激机体产生具有中和作用的特异性抗体。
- 吴凯峰张薇薇崔亚利张雪梅胥文春庞丹刘鑫王虹
- 关键词：肺炎链球菌溶血素重叠PCR突变体
- 肺炎链球菌体内诱导基因spd1672影响细菌荚膜形成的机制研究
- 荚膜多糖是肺炎链球菌的主要毒力因子，它具有抗吞噬作用，可使其免受宿主免疫攻击。荚膜丢失的肺炎链球菌很容易被吞噬细胞清除，毒力下降。本课题组前期工作从肺炎链球菌中筛选到一些体内诱导基因，其中的基因spd1672经过生物信息...
- 庞丹
- 关键词：肺炎链球菌荚膜多糖连接酶毒力因子动物模型
- 文献传递
- spd-0872和spd-0873双基因缺陷对肺炎链球菌毒力的影响
- 杨晓亮庞丹尹一兵
