- 氯化锂激活Wnt／β-catenin信号通路致小鼠造血干／祖细胞衰老及其机制被引量：6
- 2016年
- 目的探讨氯化锂(Li Cl)激活Wnt/β-catenin信号通路致小鼠Sca-1+造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)衰老及其机制。方法免疫磁珠法分离纯化小鼠Sca-1+HSC/HPC。纯化后细胞分为:正常对照组,常规培养;Li Cl组,正常对照组基础上,加入Li Cl(终浓度10mmol/L);D-半乳糖致衰组,正常对照组基础上,加入D-半乳糖(终浓度166mmol/L),各组培养48h。造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养检测Sca-1+HSC/HPC多向分化潜能,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测Sca-1+HSC/HPC增殖能力,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老,免疫细胞化学染色和Western blotting检测细胞内β-catenin、糖原合成激酶3β(GSK-3β)、P53、P21蛋白表达,ELISA检测细胞胞质内8羟基脱氧鸟苷(8-OH-d G)含量。结果与正常对照组相比,Li Cl组与D-半乳糖致衰组Sca-1+HSC/HPC增殖能力下降,形成CFU-Mix数量下降,SA-β-Gal染色阳性细胞百分率增加,β-catenin、P53、P21蛋白表达上调,GSK-3β蛋白表达下调,细胞内8-OH-d G水平升高。结论 Li Cl可通过激活Wnt/β-catenin信号通路,使细胞DNA氧化损伤,上调P53/P21途径,这可能是导致小鼠造血干/祖细胞衰老的机制之一。
- 夏婕妤李静张岩岩贾道勇张梦思陈粼波景鹏伟陈雄斌王璐王亚平
- 关键词：氯化锂衰老WNT/Β-CATENIN信号通路小鼠
- 1.当归多糖调控Wnt/β-catenin信号通路与延缓造血干/祖细胞衰老机理的研究 2.当归多糖对衰老模型大鼠骨髄造血功能的影响及机理研究
- 目的干细胞衰老是生物体衰老的最新学说和老年性疾病的关键原因,寻找调控干细胞衰老的途径对延缓机体衰老和防治老年性疾病至关重要。造血干/祖细胞（HSC/HPCs）衰老与多种老年性疾病密切相关。我们已证明,当归多糖（ASP）是...
- 张岩岩
- 关键词：当归多糖衰老衰老模型骨髓造血功能
- 文献传递
- 人参皂苷Rg1缓解D-半乳糖致衰老大鼠脾损伤被引量：5
- 2015年
- 目的探讨人参皂苷Rg1对D-半乳糖致衰老大鼠脾组织结构与功能的影响及其机制。方法 SD大鼠随机分为正常对照组、衰老模型组(D-半乳糖120 mg/kg,qd×42 d)、Rg1干预组(建模,第15天起Rg1 20 mg/kg,qd×28 d)、Rg1对照组(0.9%氯化钠注射液+Rg1)。取脾脏测定脾指数,石蜡切片观察脾脏显微形态,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测脾细胞衰老,CCK-8检测脾细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力,ELISA检测IL-2、IL-6和晚期糖基化终产物(AGEs)含量,流式细胞术检测细胞活性氧(ROS),酶法检测丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量,Western blot检测细胞衰老相关蛋白P53、P21及Rb的表达。结果与衰老模型组比较,Rg1干预组大鼠脾指数、脾脏白髓面积比及脾细胞增殖能力提高(P<0.05);脾细胞分泌IL-2、IL-6水平和SOD活性明显增强(P<0.01);脾细胞的SA-β-Gal阳性率、ROS和MDA含量下降(P<0.01);AGEs下降(P<0.05);P53、P21及RB蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论人参皂苷Rg1能缓解D-半乳糖致衰大鼠脾损伤,其机制可能与抑制氧化损伤和下调P53-P21-RB信号通路有关。
- 张晶邵月张力恒冉瑞图孙嘉政张岩岩贾道勇张梦思王亚平
- 关键词：人参皂苷RG1衰老模型脾脏
- 当归多糖诱导人白血病干细胞衰老与调控端粒系统机制的研究被引量：9
- 2014年
- 目的探讨当归多糖(ASP)调控人CD34+CD38-骨髓白血病干细胞(LSC)衰老的端粒与端粒酶机制。方法免疫磁性分选人骨髓CD34+CD38-LSC;CCK-8检测ASP对CD34+CD38-LSC增殖抑制能力;衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老情况;混合集落培养(CFU-Mix)检测细胞增殖能力;荧光定量RT-PCR检测端粒酶基因TERT变化;TRAP-PCR检测细胞端粒酶活性;Southern blotting检测细胞端粒长度变化。结果免疫磁性分选后人骨髓CD34+CD38-LSC纯度达(91.15±2.41)%,相差显微镜观察显示细胞形态饱满,透明度高,折光性强。ASP体外诱导CD34+CD38-LSC 48 h,能有效抑制其增殖且呈浓度依赖性(P<0.05),集落形成能力下降(P<0.01)。40μg/mL ASP作用CD34+CD38-LSC 48 h,SA-β-Gal染色阳性细胞率明显升高(P<0.01);CD34+CD38-LSC端粒酶基因TERT表达水平下降(P<0.05);端粒酶活性下降(P<0.05);端粒长度缩短(P<0.05)。结论 ASP在体外可能通过调控细胞端粒系统诱导人骨髓CD34+CD38-LSC衰老。
- 李成鹏刘俊贾道勇张梦思徐春燕张岩岩景鹏伟王璐王顺和王亚平
- 关键词：当归多糖白血病干细胞端粒端粒酶衰老
- 当归多糖对衰老模型小鼠造血干细胞Wnt／β-catenin信号通路的影响被引量：21
- 2015年
- 目的探讨当归多糖（ASP）对衰老小鼠造血干细胞（HSCs）Wnt／β-catenin信号通路的影响。方法6～8周雄性C57BL／6J小鼠30只，随机分为对照组、模型组和ASP组，每组10只。小鼠scD-半乳糖（D-Gal，120mg／kg），每天1次，连续42d，复制衰老小鼠模型；ASP（200mg／kg）组ip给药，连续35d。给药结束后第2天，免疫磁珠分离HSCs，衰老β半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色观察衰老HSCs百分率：造血祖细胞混合集落（CFU—Mix）培养检测HSCs形成集落能力：流式细胞术和激光共聚焦检测HSCs中活性氧（ROS）水平；Westemblotting检测HSCs胞质β-catenin、胞核β-catenin、GSK-3B、Phospho．GSK-3p和TCF-4蛋白表达。结果与对照组比较，模型组HSCs的SA-β-Gal染色阳性百分率和ROS水平显著增加；胞质β-catenin、胞核βcatenin、Phospho-GSK-3β和TCF-4蛋白表达上调；CFU—Mix形成能力降低；GSK-3β蛋白表达下调。与模型组比较，ASP能显著降低衰老HSCs的SA—β—Ga1染色阳性百分率和ROS水平；下调胞质13-catenin、胞核β-catenin、Phospho—GSK-36和TCF-4蛋白表达；提高CFU—Mix形成能力；上调GSK-3β蛋白表达。结论ASP能延缓或拮抗D-Gal致小鼠HSCs衰老，其机制可能与ASP抑制Wnt／β-catenin信号通路过度激活有关。
- 张岩岩李静贾道勇张梦思夏婕妤景鹏伟宋小英王璐王亚平顾恒伟
- 关键词：当归多糖造血干细胞衰老WNT/Β-CATENIN信号通路D-半乳糖
- 当归多糖与阿糖胞苷联合注射对人白血病模型小鼠骨髓单核细胞的影响被引量：3
- 2014年
- 目的探讨当归多糖(ASP)与阿糖胞苷(Ara-C)联合注射对移植性人白血病模型小鼠骨髓单个核细胞(BMMCs)的影响,并探讨其调控白血病细胞衰老的可能机制。方法每只小鼠尾静脉移植2×107个K562细胞,建立移植性人白血病NOD/SCID小鼠模型,模型建立后随机分为模型组、ASP组、Ara-C组和ASP+Ara-C组,移植K562细胞第31天开始分别ip ASP(200 mg/kg)、Ara-C(2.5 mg/kg)和ASP(200 mg/kg)+Ara-C(2.5 mg/kg)治疗,共14 d,模型组注射等量生理盐水。药物注射完成第2天眼球取血检测外周血白细胞总数与分类计数,取股骨测定每只股骨BMMCs细胞数;CCK8测定BMMCs增殖能力,流式细胞术分析BMMCs增殖周期,混合集落(CFU-Mix)培养检测BMMCs形成集落能力;衰老β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察衰老细胞百分率;Western blotting检测衰老相关蛋白P16、Rb、CDK4及Cyclin D1表达。结果与模型组比较,无论是ASP、Ara-C单独注射或ASP+Ara-C联合用药均能有效降低白血病模型小鼠外周血白细胞总数,降低中性粒细胞百分率,提高淋巴细胞百分率;降低股骨BMMCs细胞数,明显抑制BMMCs增殖,降低CFU-Mix产率,提高G1期细胞比例,减少S期细胞比例;显著提高SA-β-Gal染色阳性细胞百分率;上调P16、Rb表达,下调CDK4、Cyclin D1表达,且联合用药组效果更为明显。结论 ASP与Ara-C可能通过调节衰老相关蛋白P16、Rb、CDK4及Cyclin D1表达,进而促进移植小鼠白血病细胞衰老,为临床治疗白血病提供了新思路。
- 徐春燕贾道勇景鹏伟张岩岩张梦思刘俊李静朱家红姜蓉王璐王亚平
- 关键词：当归多糖阿糖胞苷人白血病骨髓单个核细胞
- 当归多糖与阿糖胞苷联合注射对人白血病模型小鼠脾脏结构与功能的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨当归多糖(ASP)与阿糖胞苷(Ara-C)联合注射对移植性人白血病模型小鼠脾脏结构与功能的影响及其相关机制。方法:每只小鼠尾静脉移植2×107个K562细胞建立移植性人白血病NOD/SCID小鼠模型,模型建立后随机分为模型组和当归多糖组、阿糖胞苷组、当归多糖+阿糖胞苷组。从移植K562细胞第31d开始腹腔分别注射当归多糖(200 mg/kg、阿糖胞苷(2.5mg/kg)和当归多糖(200 mg/kg)+阿糖胞苷(2.5 mg/kg),共14d,模型组注射等时等量的生理盐水。药物注射完成第2d,取眼球血检测外周血白细胞总数与分类计数,取股骨测定每只股骨有核细胞(BMMCs)数,取脾脏测定脾指数并将新鲜小块脾制作成10μm冷冻切片,HE和TUNEL染色观察脾脏病理形态学与细胞凋亡情况。取0.04 g脾脏制备10%的组织匀浆,提取各组上清液并检测抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD),氧化产物谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的蛋白浓度与炎症因子IL-1β、IL-6水平。结果:与模型组比较,无论是当归多糖、阿糖胞苷单独注射或当归多糖和阿糖胞苷联合用药均能有效降低外周血白细胞总数,降低中性粒细胞百分率,提高淋巴细胞百分率;降低股骨BMMCs数;减少脾指数;白血病细胞对脾浸润减少且凋亡率增加;脾脏抗氧化能力下降得以抑制,表现为GSH-Px与SOD活性升高,氧化产物GSH与MDA降低;炎症因子IL-1β、IL-6水平降低,且联合用药组效果更为明显。结论:当归多糖与阿糖胞苷能减少白血病细胞在脾脏内聚集,促进白血病细胞衰老凋亡,降低白血病细胞对脾结构与功能损伤,减轻脾脏炎症反应,提高脾组织抗氧化能力。
- 张梦思徐春燕朱家红贾道勇刘俊张岩岩姜蓉王璐王亚平
- 关键词：当归多糖阿糖胞苷K562细胞株
- 人参皂苷Rg1对衰老大鼠胸腺结构与功能的影响被引量：15
- 2015年
- 目的探讨人参皂苷Rg1对衰老大鼠胸腺结构与功能的影响及机制。方法 SD大鼠随机分为4组,每组10只。衰老模型组,皮下注射D-半乳糖120 mg/kg,1次/d,42 d;Rg1衰老模型组,注射D-半乳糖剂量与时间同衰老模型组,第15天起腹腔注射Rg1 20 mg/kg,1次/d,28 d正常对照组,皮下注射生理盐水1次/d,42 d;Rg1正常对照组,注射生理盐水1次/d,14 d,第15天起腹腔注射Rg1(同Rg1衰老模型组)。模型复制或药物注射完成后第2天,取胸腺测定胸腺指数,石蜡切片观察胸腺形态学;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测胸腺细胞衰老,CCK-8检测胸腺细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力,ELISA检测胸腺细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α、GM-CSF、白细胞介素(IL)-2与IL-6的能力,流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)、胸腺细胞凋亡,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA),酶学检测超氧化物歧化酶(SOD),DTNB法测定谷胱甘肽(GSH)、氧化谷胱甘肽(GSSG)含量,Western印迹检测细胞衰老相关蛋白p21、p53、Rb的变化。结果 Rg1衰老模型组大鼠胸腺指数升高、胸腺皮质面积比例增加、胸腺细胞的增殖能力提高,凋亡率减少、SA-β-Gal阳性胸腺细胞百分率下降、TNF-α、GM-CSF、IL-2、IL-6的分泌能力明显提高、SOD活性明显提升;ROS和MDA含量下降;p53、p21、Rb蛋白表达有显著下调。结论 D-半乳糖复制的衰老模型大鼠胸腺结构与功能损伤明显,人参皂苷Rg1对其致衰损伤有明确的保护作用,其机制可能与抑制氧化损伤和下调p16-Rb、p53/p21信号通路有关。
- 冉瑞图孙嘉政张晶邵月张力恒李成鹏贾道勇张岩岩张梦思王亚平
- 关键词：人参皂苷RG1胸腺
- 人参皂苷Rg1对衰老模型大鼠骨髓造血功能的影响及其机理被引量：7
- 2015年
- 目的:探讨人参皂苷Rg1对衰老模型大鼠骨髓造血功能的影响及其机理。方法:SD大鼠随机分为4组,每组10只。衰老模型组,皮下注射D-半乳糖120mg/kg qd×42;Rg1衰老模型组,注射D-半乳糖剂量与时间同衰老模型组,第15d起腹腔注射Rg1 20mg/kg qd×28;正常对照组,皮下注射生理盐水qd×42;Rg1正常对照组,注射生理盐水qd×14,第15d起腹腔注射Rg1(同Rg1衰老模型组)。模型复制或药物注射完成后第2d,采外周血检测血白细胞总数与分类计数和晚期糖基化终产物(AGEs),骨髓单个核细胞(BMNCs)计数,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测BMNCs衰老百分率,多向造血祖细胞集落(CFU-Mix)培养检测BMMCs形成集落能力;Western blotting检测BMMCs衰老相关蛋白P21和P53的变化;提取腹腔巨噬细胞进行培养,比色法检测巨噬细胞吞噬功能。结果:与衰老模型组比较,Rg1衰老模型组外周血白细胞数量增多,淋巴细胞比例升高,粒细胞比例降低,CD8+T细胞所占比例降低,CD4+T细胞所占比例升高,外周血AGEs水平降低,每根股骨的BMMCs细胞数增多,SA-β-Gal染色阳性的BMMCs明显降低,BMMCs形成CFU-Mix能力提高,P21和P53的表达下调,腹腔巨噬细胞吞噬中性红指数上升。结论:D-半乳糖复制的衰老模型大鼠骨髓造血功能损伤明显,人参皂苷Rg1对其致衰损伤有明确的保护作用,可能机理与调控p53/p21信号通路有关。
- 邵月张力恒冉瑞图孙嘉政张晶张梦思贾道勇张岩岩王亚平
- 关键词：人参皂苷RG1衰老模型骨髓造血细胞
- 当归多糖对D-半乳糖致衰老小鼠肝损伤的保护作用及其初步机制研究被引量：6
- 2016年
- 目的 研究当归多糖（ASP）对D-半乳糖致衰老小鼠肝脏损伤的保护作用及其初步机制.方法 雄性C57BL/6J小鼠随机分为3组,每组10只.D-半乳糖模型组：小鼠皮下注射D-半乳糖（120mg/kg）,1次/d,持续42d;ASP＋ D-半乳糖模型组：从D-半乳糖模型复制的第8天起,皮下注射ASP （120 mg/kg）,1次/d,持续35 d;正常对照组：小鼠皮下注射等量与等时等渗盐水.药物注射完成第2 d,取眼球血制备血清,检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBil）含量,制备肝脏组织匀浆检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）,晚期糖苷化产物（AGEs）含量.制备肝组织石蜡切片,HE染色观察肝脏病理形态学变化,糖原染色观察肝脏内糖原变化,透射电镜观察肝细胞超微结构.用One-way ANOVA法进行方差分析. 结果 D-半乳糖模型组小鼠肝脏病损严重,肝细胞出现退行性变化.ASP治疗35 d后,ASP＋D-半乳糖模型组与模型组比较,ALT为（21.49±4.81） U/L比（28.29±0.51） U/L,AST为（84.03±9.17） U/L比（97.93±3.56） U/L,TBil为（0.61±0.14）μmol/L比（1.19±0.18）μmol/L;SOD为（170.69±13.41） U/mg比（136.31±21.59） U/mg,MDA为（5.12±1.01）nmol/mg比（8.71±2.04）nmol/mg,GSH-Px为（47.01±8.85） U/ml比（33.22±5.44） U/m1,AEGs的含量下降,肝脏内糖原数量回升,肝脏病损和肝细胞损伤减轻. 结论 ASP能拮抗D-半乳糖所致衰老小鼠肝脏损伤,其机制可能与抑制氧化应激有关.
- 夏婕妤樊艳玲贾道勇张梦思张岩岩李静景鹏伟王璐王亚平
- 关键词：肝损伤氧化应激D-半乳糖
