张春燕
- 作品数：32 被引量：41H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 酶联免疫吸附试验临床检测信号临界区(灰区)患者血清HBsAg携带状况的研究
- 2009年
- 目的探讨乙肝HBsAg酶联免疫吸附试验（ELISA）检测信号灰区与血清免疫逃逸变异HBsAg之间的关系。方法采用市售ELISA对一组临床患者做常规检测,根据检测结果选留ELISA信号处灰区（即P/C 1.2~5.0之间）的实验标本。采用G6-ELISA（本室研制,有极强免疫逃逸变异HBsAg检测能力）与市售（基本不具备免疫逃逸变异HBsAg检测能力）对选留标本进行检测,以差减ELISA确认其免疫逃逸变异HBsAg阳性数量,并采用雅培-化学发光及PCR对检测结果的特异性进行复核。结果自10 231例受检者中筛选HBsAg ELISA信号灰区标本244例。以G6-ELISA与市售ELISA检测结果并做差减分析显示免疫逃逸变异HBsAg阳性率为11.07%（27/244）,亚临界,临界及超临界各组阳性率分别为9.30%（8/86）,10.34%（15/145）及30.77%（4/13）,后者组阳性率显著高于前两组（P〈0.01）。考核结果显示,经ELISA差减分析确认的免疫逃逸变异HBsAg阳性血清雅培-化学发光检测阳性率为94.44%（17/18）,HBV DNA阳性率为33.33%（6/18）,其中两份单项G6-ELISA检测最低阳性信号标本的HBsAg特异性亦为雅培-化学发光检测所证实。结论临床HBsAg检测样本中存在少量A（或P/C）值在ELISA信号灰区的异质化标本;免疫逃逸变异HBV感染是造成这一现象的主要原因之一。
- 张春燕龚劲松刘静华彭静黄永国张小燕李方和
- 关键词：乙型肝炎病毒基因变异乙型肝炎表面抗原酶联免疫吸附试验
- 抗HBs mAb的研制及其对野生与免疫逃逸变异HBsAg的交叉反应特征被引量：9
- 2008年
- 目的：抗HBs G6mAb制备及其对重组野生与免疫逃逸变异HBsAg结合能力与特点的评价。方法：常规制备并纯化抗HBs mAb,以纯化抗HBs mAb IgG包被,采用ELISA对17种野生及“a”决定簇替代性变异全基因重组表达HBsAg进行检测,并与几种市售HBsAg检测试剂进行比较。结果：该杂交瘤细胞生长与分泌特性稳定,其培养上清与腹水效价分别为2048及4096×10^3;对野生HBsAg检测（ELISA）敏感性不低于0.125μg/L。该抗体可与15种变异抗原中12种发生反应（P/N≥2.5）,反应信号强度分别为低反应组（2份,与野生株A值比较,下同）平均7.55%;中反应组（1例）为59.40%;高反应组（9种）分别为野生株的92.1%-109.4%,低反应或无反应表达产物的免疫逃逸变异部位集中在HBV“a”决定簇I环的起始部即120-124序列之间。部分表达产物采用市售试剂作同步检测,平均显色强度高于或明显高于几种国内应用最为普遍的HBsAg ELISA（P〈0.05）。结论：抗HBs G6 mAb对多数免疫逃逸变异HBsAg有很强的结合能力,所针对的变异类型亦表现出某种特殊的规律。
- 李方和张小燕严兵张波黄永国张春燕龚劲松陈妍刘静华
- 关键词：基因变异HBSAG免疫逃逸
- 实验动物终末处置的新方法——锐性弹切脊髓高位离断术被引量：1
- 2010年
- 急性生命剥夺（宰杀）是一项与动物福利相关且经常发生的重要事件。对实验动物处死的方法必须尽可能做到不给其带来过多痛苦;不干扰或基本不干扰动物临终前的生理状态;不损坏科学实验研究的靶器官（或组织）;不对实验者造成过大的心理冲击。常用方法有脊髓牵拉断裂法、
- 李佩珊张春燕李时君陈妍李方和
- 关键词：实验动物脊髓离断术动物福利生理状态
- G145R变异重组HBsAg ELISA检测质控参照品制备的初步研究被引量：3
- 2007年
- 目的:实验性制备G145R变异重组乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)质控参照品。方法:收集含G145R变异rHBsAg的细胞培养上清,采用50%饱和硫酸铵盐析,根据其在D12-ELISA中的检测信号,以卫生部颁布的HBsAgELISA质控血清精确标定盐析物中靶物质的含量,适量稀释分装,置-20℃冻存。采用不同方法对制备物的特异性与稳定性进行考核,并将其试用于对几种市售试剂盒检测变异能力的评价。结果:制备物中靶物质含量在0.50～32.00ng/mLwcHBsAg之间,在D12-ELISA检测中其信号的线性关系与质控血清有很好的一致性;反复冻融对其稳定性无显著影响;采用不同市售ELISA试剂检测时其反应信号强度各不相同。结论:本研究制备的G145R变异rHBsAgELISA质控参照品具有较高的稳定性、特异性与实用性;其研制为乙肝病毒免疫逃逸现象在基础、临床、诊断试剂研发,以及流行病学调查等方面研究的开展提供了重要的物质基础。
- 张波陈妍龚劲松张春燕黄永国张小燕田拥军杨东亮李方和
- 关键词：酶联免疫吸附测定
- ELISA差减分析--一种简便实用的免疫逃逸变异HBsAg检测新方法被引量：1
- 2010年
- 目的:立足现有实验技术与试剂,建立一项血清免疫逃逸变异HBsAg检测的新方法。方法:以市售ELISA试剂筛选其检测信号在灰区范围的HBV感染者;采用2种不同免疫逃逸变异HBsAg检测能力的ELISA试剂对选留血清进行检测,以"ELISA差减分析"方式确认免疫逃逸变异HBsAg阳性者;以中和实验及雅培化学发光试剂验证检测结果的特异性;并对部分免疫逃逸变异HBsAg阳性者以PCR及直接测序做HBV DNA分析。结果:自10231例受检者中筛选HBsAgELISA检测信号灰区标本244例;复核检测显示G6ELISA、市售ELISA两者对野生HBsAg检测敏感性分别为0.0625ng/ml,与0.125ng/ml;检测阳性率分别为16.80%(G6ELISA)及5.73%(市售ELISA)。ELISA差减分析确定免疫逃逸变异HBsAg阳性者27例,阳性率为11.07%。对部分免疫逃逸变异HBsAg阳性血清做进一步考核,抗HBs中和强度为(84.07%±6.32%),中和率100%(13/13);雅培化学发光试剂复核阳性率为94.4%(17/18,阳性者中包括两份单项G6-ELISA检测最低阳性信号标本);HBV DNA阳性率36.9%(7/19),略低于同期HBsAg低信号阳性者(6/14,42.9%,P<0.05);直接测序发现其中"a"区变异3例,分别为P142L、T126A及M133T/K160T;S蛋白亲水区非"a"决定簇变异1例,变异类型为L109Q。结论:ELISA差减分析法能有效地用于部分免疫逃逸变异HBsAg的临床诊断,其诊断能力视所依托试剂免疫逃逸变异检测能力不同而有显著差别。
- 李方和李佩珊刘静华彭静张春燕黄永国陈妍
- 关键词：乙肝病毒基因变异HBSAGELISA
- Toll样受体介导小鼠原代肝细胞产生的天然免疫应答及其对乙型肝炎病毒复制的抑制作用被引量：9
- 2011年
- 目的探讨肝细胞的Toll样受体（TLR）信号途径及其诱导的抗病毒免疫应答。方法分离野生型C57BL／6小鼠的原代肝细胞，定量逆转录一聚合酶链反应法检测TLR的表达。分别用TLR1～9配体刺激肝细胞并收集细胞上清液。酶联免疫吸附法检测细胞上清液内的细胞因子。病毒保护实验检测细胞上清液的抗脑膜炎心肌炎病毒因子，并将细胞上清液与HBV-Met细胞共孵育，用Southernblot法检测其对HBV复制的抑制效应。结果原代肝细胞能表达TLR1～9。与其TLR表达谱相应的，肝细胞在TLR1～9配体的刺激下均可以产生炎性细胞因子（肿瘤坏死因子α和白细胞介素6），而仅在TLRl、TLR3、TLR7和TLR9配体刺激下可产生I型干扰素（干扰素α和干扰素β）。在病毒保护实验中，TLR3和TLR7的配体可以刺激肝细胞产生大量的抗脑膜炎心肌炎病毒效应分子；而TLRl、TLR3和TLR4配体直接刺激的肝细胞上清液，以及TLR3、TLR7和TLR9配体转染刺激的肝细胞上清液，都能有效抑制HBV的复制。结论小鼠原代肝细胞有独特的TLR信号途径，并能通过TLR配体的激活产生抑制HBV复制的效应。这一发现对于制定基于TLR的抗肝脏靶向性病毒的治疗措施有指导意义。
- 吴珺陈明发夏幼辰郭艳林永孙潺张春燕陈妍刘慎沛郝友华陆蒙吉JorgF.Schlaak杨东亮
- 关键词：肝细胞TOLL样受体免疫肝炎病毒
- HBV G145R突变对S蛋白及“a”决定簇合成肽抗原性影响被引量：2
- 2007年
- 人工合成G145R突变后HBsAg"a"决定簇多肽G145R-SP24,将G145R-SP24、重组G145R变异S蛋白及重组野生型HBsAg分组免疫BALB/c小鼠,制备相应抗血清。通过观察各免疫原与抗血清或抗G145R变异HBsAg McAb的免疫反应特征,分析并比较G145R突变后对S蛋白及"a"决定簇合成肽抗原性的影响。结果,几种免疫原均取得理想的免疫效果,ELISA证实各抗血清均有较好的特异性。G145R-SP24和G145R变异S蛋白免疫小鼠获得的抗血清效价较野生型HBsAg略低,且抗原性也发生了明显改变,G145R突变后"a"决定簇仍然具有较好的免疫原性;另外G145R-SP24与G145R变异S蛋白之间也显示出不同的抗原性,提示孤立的G145R变异HBsAg"a"决定簇与完整G145R S蛋白的"a"决定簇可能形成不同的空间构象。本研究为进一步探讨"a"决定簇突变后空间结构的变化规律与抗原性改变的特点奠定一定的基础。
- 黄永国李方和龚劲松田拥军张春燕张小艳杨东亮
- 关键词：基因变异合成肽多克隆抗体
- 乙型肝炎病毒核心抗原单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用
- 2006年
- 单克隆抗体是由识别一种抗原表位的B细胞产生的同源性抗体，具有特异性强、纯度高、效价高、无或少血清学交叉反应等优点，在临床和科研中得到了广泛应用。目前对乙型肝炎病毒的相关发病机制还在进一步探索，特别是在建立动物模型方面还有很多问题需要解决，如土拨鼠肝炎病毒核心抗原是否与人源型的核心抗原存在交叉反应等等都需要尽快弄清楚。我们将原核表达截短型乙型肝炎病毒核心抗原（HBc144）纯化后免疫BALB／C小鼠，制备出了抗乙型肝炎病毒核心抗原的两株单克隆抗体，并对其特异性、亲和力、抗原表位等性质进行了鉴定，
- 王蓉田拥军张振华李新宇张春燕卢银平游上游杨东亮
- 关键词：乙型肝炎病毒核心抗原单克隆抗体BALB/C小鼠土拨鼠肝炎病毒抗原表位发病机制
- 热休克蛋白90抑制剂17-AAG对乙型肝炎病毒复制的抑制作用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨热休克蛋白90(HSP90)是否参与肝细胞转化生长因子(TGF)β信号通路的活化,以及HSP90对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法 HSP90抑制剂17-AAG作用HepG2细胞,提取细胞总RNA,实时定量RT-PCR检测TGFβ下游信号分子PAI-1的表达。HepG2细胞用17-AAG预处理2 h,同时用TGFβ或TβR抑制剂SB431542作用后,将HBV复制型质粒HBV1.3转染细胞,第4 d提取HBV核心颗粒,Southern Blot检测HBV复制中间体,ELISA检测上清HBsAg的表达。结果 17-AAG能够下调HepG2细胞PAI-1的表达,HepG2细胞内HBV复制中间体表达水平明显降低,HBsAg的表达亦受到抑制,但上调或阻断TGFβ信号通路对HBV复制影响不明显。结论 HSP90参与肝细胞内TGFβ信号通路的活化,其抑制剂17-AAG能够抑制HBV的复制与蛋白表达,但该抑制作用与TGFβ信号通路活化无关。
- 柯晓煜王秋景余源刘慎沛张春燕陈妍杨燕杨东亮
- 关键词：转化生长因子Β
- 鼠IgG定量ELISA实验参比品的制备及其应用
- 2007年
- 目的 制备一组用于小鼠IgG定量ELISA检测的实验参比品。方法 将三株杂交瘤细胞制备的小鼠腹水等体积混合，以葡萄球菌A蛋白（SPA）亲和层析纯化IgG，凯氏定氮法测定IgG含量，SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳作纯度鉴定并据此校正其IgG浓度，以特定保存液将其稀释成既定浓度系列，根据其在ELISA中的反应特征，制备浓度（自然对数）-A450值标准曲线，并将其用于对一组杂交瘤细胞培养上清中鼠单克隆抗体的IgG定量测定。结果提纯的鼠IgG经鉴定纯度达97．1％，且反应特性良好，其IgG含量与ELISA检测信号间有高度的相关性（r=0．990）。不同浓度的稀释系列经8次反复冻融，检测信号无显著变化，变异系数（CV）为1．87％～6．47％。将标准曲线计算所得浓度对设定浓度做回收实验分析，回收率89．1％～108．3％。并用其测得一组杂交瘤细胞培养上清的鼠IgG含量为8．0～51．5mg／L。结论 鉴定结果显示制备物定量准确，浓度范围适中，稳定性好，对于早期杂交瘤细胞分泌能力以及抗体稳定性的评价、单抗制剂的鉴定具有一定的应用价值。
- 黄永国张春燕龚劲松陈妍张波李方和
- 关键词：酶联免疫吸附试验单克隆抗体小鼠
