徐建荣
- 作品数：7 被引量：2H指数：1
- 供职机构：徐州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 磷酸胆碱聚合物载AT1受体siRNA对血管内皮细胞AT1受体表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载AT1受体siRNA对血管内皮细胞AT1受体表达的影响。方法应用琼脂糖凝胶电泳表征具有不同N/P比值的MPC30-DEA70与siRNA的复合物;将不同比例的MPC30-DEA70/siRNA基因复合物转染至人脐静脉内皮细胞,应用荧光显微镜(FM)检测其细胞内分布;流式细胞术(FCM)检测转染效率及荧光强度;Western blot法和RT-PCR法检测AT1受体蛋白及mRNA的表达情况。结果不同N/P比值的基因复合物在电泳中可见不同程度的迟滞现象,随正电性增强而显著。FM观察到MPC30-DEA70/siRNA复合物分布在细胞核周围,FCM结果显示随N/P比值的增大,转染效率明显增加,荧光强度也随之增强。RT-PCR法和Western blot法显示随着N/P比值的增大,基因复合物可使AT1受体的mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论 MPC30-DEA70可作为AT1受体siRNA的载体转染至血管内皮细胞,下调AT1受体的mRNA及蛋白的表达,提示阳离子磷酸胆碱聚合物可以有效负载和运输siRNA,抑制特异基因的表达,是一种有效的非病毒类转基因载体。
- 王霞冯辉林雪烽徐建荣孙敏程莹王志荣张卓琦
- 关键词：SIRNAAT1受体
- 阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70在体转染大鼠心肌的实验研究
- 2012年
- 目的:探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70在体转染大鼠心肌的安全性和有效性。方法:应用原子转移自由基聚合(ATRP)法合成具有高度生物相容性的双嵌段磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70,并对材料的溶液进行表征;将22只雄性SD大鼠随机分为4组:Ⅰ组(生理盐水组,n=4),Ⅱ组(低剂量PC组,n=6),Ⅲ组(中剂量PC组,n=6)和Ⅳ组(高剂量PC组,n=6)。采用心肌局部注射方式实施在体心肌转染,各组在转染7天后处死大鼠,取心肌组织作快速冰冻切片;应用荧光显微镜(FM)、共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察PC聚合物的转染情况及在心肌细胞内的分布、定位。结果:在荧光显微镜下观察PC聚合物转染情况,生理盐水组隐约可见淡绿色荧光,Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组均可见明显绿色荧光,并与PC聚合物浓度呈剂量依赖性;共聚焦激光扫描显微镜观察PC聚合物可以转染进入心脏细胞,大部分分布于细胞质及核周围,少部分可以进入到细胞核内;各转染组荧光强度与阴性对照组相比,其差异均有统计学意义(P<0.001),其中Ⅳ组平均荧光强度最高,且与其他两组比较均有统计学意义(P<0.001)。结论:磷酸胆碱聚合物可以在体转染进入大鼠心脏组织,是一种安全有效的非病毒类药物运输裁体。
- 徐建荣林雪烽王霞冯辉张敏赵侠王志荣张卓琦
- 关键词：转染
- 磷酸胆碱聚合物载AT1受体反义寡核苷酸对自发性高血压大鼠血压及心血管重构的影响
- 2012年
- 目的探讨磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载AT1受体反义寡核苷酸(AS-ODN)对自发性高血压大鼠(SHR)血压及心血管重构的影响。方法将MPC30-DEA70(N)与FAM-AS-ODN(P)按不同N/P比值络合后经尾静脉注入SD大鼠体内,未经处理的SD大鼠为对照,3周后观察复合物在全身各组织器官的分布。再将MPC30-DEA70与AT1受体AS-ODN按不同N/P比值络合后经尾静脉注入8周龄SHR大鼠体内,未经处理的SHR大鼠为对照,3周后测量尾动脉压,对主动脉及心肌组织行天狼星红染色,并用Western blot法和RT-PCR法检测AT1受体蛋白及mRNA表达情况。结果 MPC30-DEA70/FAM-AS-ODN复合物能够进入肾脏组织;空白对照组和N/P=1∶0组的尾动脉压持续上升,缬沙坦组、N/P=10∶1组和N/P=1∶1组的尾动脉压较空白对照组明显下降;空白对照组和N/P=1∶0组心肌细胞肥大,主动脉壁增厚,胶原纤维大量沉积,而缬沙坦组、N/P=10∶1组和N/P=1∶1组上述情况较空白对照组明显改善;N/P=10∶1组和N/P=1∶1组AT1a蛋白和mRNA表达较空白对照组显著降低。结论 MPC30-DEA70能够安全有效地进入肾脏各组织,在体内运载AT1受体AS-ODN,下调AT1受体蛋白及其mRNA表达,抑制SHR大鼠血压进展及心血管重构,是一种创新性的非病毒类基因运输载体。
- 林雪烽徐建荣王霞冯辉张敏赵侠王志荣张卓琦
- 关键词：反义寡核苷酸AT1受体基因载体
- 新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC_(30)-DEA_(70)转染血管平滑肌细胞的体外研究
- 2011年
- 目的探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70(PC聚合物)转染进入体外培养的血管平滑肌细胞(VSMCs)的安全性和有效性。方法应用ATRP法合成具有高度生物相容性的PC聚合物MPC30-DEA70;植块贴壁法原代培养大鼠VSMCs;MTT法检测PC聚合物与VSMCs的细胞相容性;应用FM及CLSM观察PC聚合物在细胞内的分布和定位;FCM法检测PC聚合物在VSMCs中的转染效率和荧光强度。结果 PC聚合物与原代培养的VSMCs具有较好的细胞相容性,随浓度的增高表现出一定的细胞毒性;PC聚合物可以转染进入VSMCs,大部分分布于细胞质及核周围,少部分可以进入到细胞核内;PC聚合物在VSMCs中具有较高的转染效率和荧光强度,并呈剂量依赖性。结论 新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70可以转染进入血管平滑肌细胞,是一种安全有效的非病毒类药物运输载体。
- 赵侠鲁永织张敏林雪烽徐建荣王志荣王向东曹希传夏勇李东野张卓琦
- 关键词：血管平滑肌细胞转染
- 新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载TGF-β1反义寡核苷酸转染心肌细胞
- 目的探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC-DEA能否有效地负载针对大鼠TGF-β(N)基因的反义寡核苷酸(TGF-βAS-ODN)(P)进入心肌细胞,及对该基因胞内生物表达的影响。方法按不同N/P电荷比值将载体MPC-DE...
- 张敏徐建荣林雪烽赵侠王志荣张卓琦夏勇李东野
- 文献传递
- 磷酸胆碱聚合物MPC_(30)-DEA_(70)负载转化生长因子β1AS-ODN转染心肌细胞
- 2015年
- 背景:目前反义寡核苷酸的基因治疗已经拥有良好的应用前景,但是反义寡核苷酸的相对分子质量小却不容易入细胞并且易被核酸酶降解,能否有效地穿过细胞膜且不被核酸酶降解从而与目的基因结合发挥作用,因此人们一直致力于理想载体的选择、基因转移效率的增加和转移特异性等研究。目的:探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70能否有效地负载转化生长因子β1反义寡核苷酸(AS-ODN)进入心肌细胞,并观察其对该基因胞内生物表达的影响。方法:按不同N/P电荷比值将载体MPC30-DEA70与转化生长因子β1 AS-ODN络合成形成基因复合物并且对其总电性进行表征;采用MTT法检测MPC30-DEA70与心肌细胞的生物相容性;共聚焦激光扫描显微镜观察MPC30-DEA70/TGF-β1AS-ODN在细胞内的分布和定位;应用流式细胞仪检测MPC30-DEA70/TGF-β1AS-ODN(FAM标记)的细胞转染效率和荧光强度;Western blot、RT-PCR法检测转化生长因子β1细胞内表达水平。结果与结论:MPC30-DEA70与心肌细胞具有较好的细胞相容性,在较高质量浓度(>20 mg/L)下才表现出一定的细胞毒性并呈剂量依赖;MPC30-DEA70/TGF-β1AS-ODN复合物对心肌细胞具有较高的转染效率,并且能够携带转化生长因子β1 AS-ODN进入细胞后下调转化生长因子β1 m RNA和蛋白的表达。新型阳离子磷酸胆碱基聚合物MPC30-DEA70可以有效负载和运输转化生长因子。
- 杨煜张敏徐建荣林雪烽赵侠王志荣曹希传张卓琦
- 关键词：转化生长因子Β1转染细胞转染心肌细胞
- 磷酸胆碱聚合物载反义c—myc寡核苷酸对兔髂动脉球囊损伤后血管狭窄的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨局部转运磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载反义c—myc寡核苷酸（c—mycAS—ODN）基因复合物对兔髂动脉球囊损伤后血管狭窄的影响。方法40只家兔随机分为对照组、多聚赖氨酸（PLL）组、裸c—mycAS—ODN组、PLL载基因复合物N／P=3：1组和N／P=5：1组，每组各8只。构建兔髂动脉球囊损伤模型，于血管损伤段行PLL、c—mycAS—ODN、PLL载N／P=3：1和N／P=5：1基因复合物的局部转运。24h后应用共聚焦显微镜观察基因复合物在髂动脉的分布情况；4周后苏木精-伊红染色光镜下观察髂动脉的组织形态学变化，包括新生内膜面积（NIA）、中膜面积（MA）和新生内膜／中膜面积比（I／M）；Western blot法检测各组损伤血管处c—myc蛋白的表达情况。结果共聚焦显微镜可见转染N／P=3：1、N／P=5：1基因复合物的血管内膜有均匀的绿色荧光分布。苏木精-伊红染色光镜下对照组、PLL组、裸c—mycAS—ODN组均可见显著的内膜增生，组间比较NIA、I／M无显著性差异（P〉0．05）；与对照组比较，N／P=3：1组和N／P=5：1组NIA、I／M均明显减少（P〈0．05），后两组间比较无显著性差异（P〉0．05）。Western blot显示对照组、PLL组、裸c—mycAS—ODN组c—myc蛋白表达均明显增高，组间比较无显著性差异（P〉0．05）；与对照组比较，N／P=3：1组和N／P=5：1组c—myc蛋白表达明显减少（P〈0．05），后两组间比较无显著性差异（P〉0．05）。结论多聚赖氨酸可促进MPC30-DEA70／c—myc AS—ODN复合物进入髂动脉血管，有效抑制球囊损伤后新生内膜的过度增生，为基因治疗血管内狭窄提供了新型的非病毒类转基因手段。
- 冯辉王霞林雪烽徐建荣孙敏程莹徐晤杨煜王志荣张卓琦
- 关键词：血管狭窄基因载体
