徐超
- 作品数：64 被引量：108H指数：6
- 供职机构：山东省寄生虫病防治研究所更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金山东省医药卫生科技发展计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学核科学技术更多>>
- 中国Ⅲ型弓形虫潜伏性感染前后宿主脑转录组差异分析
- 2023年
- 目的分析中国III型弓形虫虫株感染小鼠脑组织前后转录组表达差异,鉴定与小鼠行为变化相关的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。方法取感染和未感染中国III型弓形虫LHG株的小鼠脑组织,镜下观察脑包囊;提取总RNA,构建转录组文库,采用Oxford Nanopore Technologies单分子实时测序平台对感染组和对照组文库进行第三代纳米孔高通量测序,以Fold Change≥1.5且P<0.05作为筛选标准,从测序结果中筛选DEGs并对其进行Gene Ontology(GO)富集分析,Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)富集分析和Protein-Protein interaction network(PPI network)蛋白互作网络分析。结果共检测到722个DEGs,其中708个表达上调,14个表达下调。GO功能注释表明DEGs主要富集在宿主的突触刺激应答和免疫应答过程,同时也与行为调控、成瘾、化学突触传递等生物学过程有关。KEGG富集分析表明,多数DEGs富集在寄生虫和病毒感染相关通路。将基因表达差异幅度大、GO注释和KEGG富集排名均靠前的DEGs取交集,共筛选到10个关键上调基因(Cd74、Ccl5及H2家族的H2-Aa、H2-Ab1、H2-Eb1、H2-D1、H2-Q7、H2-K1、H2-DMb1、H2-Qa基因)和5个关键下调基因(Gng4、Frzb、Hes5、Mfge8、Cartpt基因)。对关键DEGs进行PPI互作分析,H2蛋白家族及CD74的蛋白互作连接度大,节点多。结论MHC类分子可能是弓形虫LHG株感染小鼠过程中宿主抵抗其感染的主要因子,弱毒弓形虫株可能通过干扰宿主的神经元干细胞功能和兴奋性神经递质代谢通路导致宿主出现精神行为异常。
- 代莉莎谢环环解晓曼朱文菊孙航张俊梅王琦董宏杰周贝贝赵桂华徐超尹昆
- 关键词：转录组
- 弓形虫微线蛋白16抗原表位区的预测及酵母表面展示被引量：1
- 2017年
- 目的应用生物信息学软件预测弓形虫微线蛋白16(TgMIC16)B/T细胞抗原表位并对抗原表位区进行酿酒酵母菌的表面展示。方法利用DNAStar和IEDB对TgMIC16进行B细胞抗原表位预测,利用SYFPEITHI和BIMAS预测其T细胞抗原表位。参照预测结果,采用pCTCON2/EBY100展示系统对抗原表位区进行酵母表面展示,利用间接免疫荧光(IFA)和流式细胞仪检测表达情况。结果 TgMIC16存在潜在的B/T细胞抗原表位且集中在aa343-625区域;该抗原表位区成功展示到酵母细胞表面,最佳诱导时间为24~36h。结论为下一步酵母载体疫苗的研制及疗效评价奠定基础。
- 孙慧李瑾肖婷徐超尹昆黄炳成雷战魏庆宽
- 关键词：抗原表位
- 弓形虫GRA6基因的重组、表达及鉴定被引量：3
- 2015年
- 目的构建弓形虫致密颗粒蛋白6(GRA6)基因重组质粒并在大肠埃希菌中进行表达。方法根据弓形虫GRA6基因序列设计并合成引物,用PCR方法从弓形虫基因组DNA中扩增GRA6基因片段,扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定后,再克隆到pGEX-4T载体中,重组质粒经限制性内切酶BamHI、EcoRI酶切鉴定并测序后,将重组质粒转化大肠埃希菌BL21后并用IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析并纯化,以Western blot分析其反应原性。结果以弓形虫DNA为模板扩增GRA6基因片段,经1%琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物大小为693bp,与理论值相符;重组质粒经酶切鉴定构建成功,测序结果与GenBank上弓形虫RH株GRA6序列AF239283.1同源性100%;重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达的GRA6融合蛋白分子质量单位约为52ku,与GST-GRA6的理论分子质量相符,该融合蛋白可被GST标签抗体识别。结论成功重组了弓形虫GRA6基因,表达蛋白具有反应原性,为弓形虫诊断抗原试剂盒的制备奠定了基础。
- 李瑾魏庆宽贾凤菊徐超肖婷王卫艳尹昆刘功振黄炳成
- 关键词：弓形虫基因克隆融合蛋白蛋白纯化
- 一种实验动物笼具自动清洗及更换垫料的处理装置
- 一种实验动物笼具自动清洗及更换垫料的处理装置，包括笼具处理模块、污物处理及液体供给模块，所述笼具处理模块由前箱体和后箱体组成，在前箱体内设置有笼具输入运输装置和笼具输出运输装置，在笼具输出运输装置的上方，也就是出口的上方...
- 尹昆赵桂华徐昊志徐超谢环环代莉莎
- 刚地弓形虫微线蛋白16基因片段原核表达、纯化及免疫反应性分析被引量：2
- 2016年
- 目的原核表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)微线蛋白16(micronemal protein 16,Tg MIC16)的3个基因片段,并分析3个重组蛋白的免疫反应性。方法参照Gen Bank中Tg MIC16基因序列,根据功能活性区将其分为3个片段(M16D1、M16D2、M16D3),分别设计引物,以刚地弓形虫RH株速殖子RNA为模板,通过RT-PCR扩增,获得预期的3个DNA片段,双酶切后连接至原核表达载体p ET-32a(+),将重组质粒转化入大肠埃希菌(Escherichia coli)TOP10,经PCR、双酶切筛选阳性质粒,测序确认后转化至E.coli Rosetta,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表达产物。重组蛋白经镍柱纯化后,分别以抗组氨酸(His)单抗和弓形虫感染兔血清为一抗,Western blotting分析其免疫反应性。结果 Tg MIC16 3个基因片段的RT-PCR扩增产物分别为1 806、1 290、855 bp。双酶切和测序结果显示,3个Tg MIC16片段的重组表达质粒构建成功。SDS-PAGE分析结果显示,3个重组蛋白成功表达,且均为以包涵体的形式表达,相对分子质量(M_r)分别为88 000、68 000、52 000。Western blotting分析结果显示,3个纯化的表达蛋白均能被抗His单抗和弓形虫感染兔血清识别。结论成功构建并表达Tg MIC16的3个功能活性区,且3个重组蛋白均表现出良好的免疫反应性。
- 李瑾崔勇尹昆刘功振肖婷徐超魏庆宽黄炳成孙慧
- 关键词：刚地弓形虫原核表达免疫反应性
- 弓形虫毒力效应因子ROP18的竞争性抑制剂的筛选及亲和活性分析
- 目的 通过药物靶标虚拟筛选技术，筛选靶向弓形虫毒性因子ROP18的小分子竞争性抑制剂，并对中靶小分子进行活性分析。方法 通过 MOE 软件的Structure Prepare 完成ROP18 三维晶体结构的结构准备;以A...
- 邱潇程允堂赵桂华徐超魏庆宽黄炳成闫歌曹建平尹昆
- 关键词：药效团模型弓形虫
- 一种宠物隔离笼
- 一种宠物隔离笼，包括隔离箱，所述隔离箱底面设置有密封胶条；所述隔离箱前端面设置有观察窗；所述隔离箱侧壁面设置有新风机，在其相对的一面，也就是隔离箱的侧壁面上设置有出风口，所述出风口为外凸出的管道形式；所述隔离箱前端面铰接...
- 徐超尹昆赵桂华谢环环徐昊志
- 弓形虫表面抗原SAG2基因的克隆表达纯化及鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的构建弓形虫表面抗原2(SAG2)基因重组质粒并在大肠埃希菌中表达。方法根据SAG2基因序列设计并合成引物,用PCR法从弓形虫基因组DNA中扩增SAG2基因片段,再克隆到p GEX-4T载体中,构建重组质粒。重组质粒经酶切鉴定并测序后,在大肠埃希菌BL21中诱导表达,产物经SDS-PAGE分析并纯化,以Western blotting分析其反应原性。结果 SAG2基因PCR产物大小约为561 bp,与预期相符。重组质粒经酶切及PCR鉴定构建成功,测序结果与已知序列吻合。重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达的SAG2融合蛋白分子量约为47 ku,该蛋白可被GST标签抗体识别。结论成功重组了弓形虫SAG2基因,表达蛋白具有反应原性。
- 王卫艳李瑾魏庆宽贾凤菊肖婷徐超尹昆黄炳成
- 关键词：刚地弓形虫基因克隆融合蛋白蛋白纯化
- 弓形虫联合重组诊断抗原的克隆与表达
- 目的刚地弓形虫是一种世界性分布的感染率很高的专性胞内寄生虫,对于免疫力正常的人一般为隐性感染,而妊娠初期或免疫能力低下者,往往表现严重的弓形虫病。弓形虫的诊断对于控制弓形虫感染有重要意义,而其免疫学诊断的敏感性和特异性主...
- 李瑾魏庆宽肖婷王卫艳徐超刘功振黄炳成
- 关键词：弓形虫重组抗原克隆
- 文献传递
- 体外鼠星形胶质细胞在刚地弓形虫急性和慢性感染期的活化状态分析
- 2021年
- 目的探讨体外条件下急性和慢性弓形虫感染对小鼠神经免疫细胞(星形胶质细胞)的活化状态及炎症细胞因子分泌的影响。方法小鼠星形胶质细胞C8-D1A体外培养12 h后,加入纯化的弓形虫速殖子共培养0~72 h,取共培养1、2、8、12、24、36、48 h的培养物行瑞氏-吉姆萨染色,观察速殖子的胞内入侵增殖过程。弓形虫速殖子以1∶10的虫体与细胞比例接种于单层C8-D1A细胞中,共培养8 h后采用pH 8.2的碱性培养基于37℃自然条件下诱导速殖子向缓殖子转化,诱导转化96 h后RT-PCR检测缓殖子期特异蛋白BAG1基因的表达。分别取感染24、36 h及转化后96 h的培养物,采用Western blot方法检测鼠星形胶质细胞标记蛋白GFAP和vimentin的表达水平,采用qPCR法检测小鼠星形胶质细胞分泌肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)以及白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)mRNA的表达水平。结果体外条件下弓形虫黏附入侵鼠星形胶质细胞过程慢于入侵上皮细胞及巨噬细胞系。速殖子1 h后开始黏附,2 h后启动入侵,8 h后少数虫体开始分裂增殖,24 h后出现"菊花状"假包囊,48~72 h虫体逸出。急性感染期C8-D1A细胞表达的GFAP和vimentin水平与空白组比较无显著变化,慢性感染期则显著升高。急性感染期TNF-αmRNA表达量与对照组比较无显著变化(t=0.4539、2.516,P均>0.05),IL-6和IL-12 mRNA表达显著升高(t=7.260、12.62,P均>0.05),IL-1βmRNA表达则显著降低(t=21.23,P<0.05)。慢性感染期C8-D1A细胞TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA表达水平均显著降低(t=4.084、17.00、21.24,P均<0.05),IL-12 mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义(t=1.992,P>0.05)。结论缓殖子期弓形虫在体外条件下可诱导星形胶质细胞活化,但不同感染阶段关键细胞因子的表达有明显波动。
- 张丽新赵桂华赵强徐昊志徐超谢环环代莉莎孙慧李瑾魏庆宽尹昆
- 关键词：星形胶质细胞刚地弓形虫细胞因子体外
