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徐超: 作品数：11 被引量：14H指数：4; 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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一种重组人谷丙转氨酶蛋白标准品和重组人谷草转氨酶蛋白标准品及其制备方法: 本发明涉及标准品制备，具体讲，涉及一种重组人谷丙转氨酶蛋白标准品和重组人谷草转氨酶蛋白标准品及其制备方法。编码重组人谷丙转氨酶蛋白标准品的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，编码重组人谷草转氨酶蛋白标准品的核苷酸序列...; 徐超王玉梅黄杰高尚先; 文献传递

人丙氨酸转氨酶高效重组表达体系的构建: 2014年; 目的：构建人丙氨酸转氨酶（ ALT）高效重组表达体系，为ALT相关参考物质的原料制备奠定基础。方法利用生物信息学方法优化编码人ALT核苷酸序列中的密码子，合成人ALT新的基因，并将其克隆至pRSF-Duet表达载体中。重组表达质粒pRSF-Duet-ALT转化大肠埃希菌BL21，以2 mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导目的蛋白的表达，并通过改变诱导剂浓度、振摇速度及诱导温度优化表达条件，以产生可溶性蛋白。可溶性蛋白经镍离子柱亲和层析及分子筛层析纯化，以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS-PAGE）及蛋白质免疫印迹（ Western blot）鉴定蛋白的性质，并对重组蛋白的活性、不同储存条件下在血清基质中的稳定性进行检测。结果经过优化的ALT核苷酸密码子在大肠埃希菌中的使用频率均在10％以上；经表达优化，在IPTG 终浓度为2 mmol/L、25℃、150 rpm振摇8 h诱导条件下，可增加可溶性蛋白的产率；纯化后的目的蛋白经电泳及免疫印迹鉴定为谷丙转氨酶，活性可达80000 U/L。重组ALT在2～8℃、25℃均可稳定2～8 d，相对偏差均在5％以内。结论通过密码子优化，成功构建了重组ALT的高效表达系统，本重组蛋白可以达到作为参考物质原料的要求。; 王玉梅徐超刘艳高尚先杨昭鹏; 关键词：丙氨酸转氨酶重组蛋白质类密码子

人乳头瘤病毒核酸(分型)检测试剂(盒)行业标准的验证实验被引量：4: 2013年; 目的:通过对人乳头瘤病毒(HPV)核酸(分型)检测试剂(盒)行业标准的技术要求进行实验验证,评价了该行业标准的应用性。方法:用人乳头瘤病毒L1基因分型参考品作为统一的标准品,选择不同厂家的人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光法),对人乳头瘤病毒核酸(分型)检测试剂(盒)行业标准中的准确性、特异性、重复性和检测限等要求进行评价。结果:在准确性、特异性、重复性和检测限等项目中,对人乳头瘤病毒L1基因分型参考品进行检测的实验结果均符合该行业标准的技术要求。结论:制修订的人乳头瘤病毒核酸(分型)检测试剂(盒)行业标准,适用于指导该类产品(PCR-荧光法)的注册检验工作,能够满足我国对该产品试剂盒的监督管理工作需要。; 曲守方孙彬裕于婷孙楠王菲菲徐超黄杰高尚先; 关键词：特异性检测限

人乳头瘤病毒全基因组基因分型国家参考品在评价人乳头瘤病毒核酸检测试剂中的应用被引量：4: 2013年; 目的:使用人乳头瘤病毒全基因组基因分型国家参考品对人乳头瘤病毒核酸(分型)检测试剂盒进行评价。方法:采用建立的人乳头瘤病毒全基因组基因分型国家参考品,以参考盘包含的20种不同型别的人乳头瘤病毒全基因组重组质粒DNA和5份阴性参考品为样本,按照各个试剂盒要求进行检测。结果:检测人乳头瘤病毒全基因组基因分型国家参考品,试剂A、C、D检测结果全部符合,试剂B在特异性检测试验时HPV 31、59型有交叉,试剂E在特异性检测时HPV 6、26、66、67、82型有交叉。结论:包含20种不同型别的人乳头瘤病毒全基因组基因分型国家参考品能可靠评价人乳头瘤病毒核酸(分型)检测试剂盒。; 黄杰王菲菲徐超曲守方高尚先; 关键词：基因分型国家参考品实时PCR

一种荧光PCR方法用于高危型HPV基因分型检测: 2012年; 目的:建立一种可以检测高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)的荧光PCR方法,为临床宫颈癌的筛查提供新的检测试剂盒。方法:选择高危型HPV的L1区基因序列作为靶序列,应用Primer Premier 5.0软件在选取的序列区域设计引物和探针,建立和优化该检测方法。通过评价其准确性、灵敏度和特异性,建立一种荧光PCR方法,用于高危型HPV基因分型的检测。结果:用HPV L1基因型质控品进行检测时,该试剂盒针对高危型HPV L1基因质控品均具有较好的阳性结果;检测灵敏度约为10～100拷贝.反应体系-1;低危型HPV L1基因质控品则为阴性结果,用正常人白细胞全基因组DNA进行检测时,没有HPV特异性扩增信号出现。结论:建立的高危型HPV基因分型荧光PCR检测方法具有良好的准确性、检测灵敏度和特异性,可以用于临床宫颈癌的筛查。; 曲守方黄杰孙彬裕王菲菲徐超高尚先; 关键词：基因分型

人巨细胞病毒IgG抗体质控盘的建立被引量：4: 2012年; 目的建立人巨细胞病毒IgG抗体质控盘,为以酶联免疫法和化学发光法为原理的人巨细胞病毒IgG抗体诊断试剂盒的性能评价提供可靠的质控物质。方法通过试剂盒筛选出人巨细胞病毒IgG抗体的阳性和阴性血清,将10份不同来源的阳性血清作为质控盘的P1~P10,5份不同来源的阴性血清作为质控盘的N1~N5,5份阳性血清混合制成质控盘的L1~L3。之后,用不同的试剂盒验证建立的质控盘。结果六家公司的试剂盒对本质控盘进行的准确性、特异性和检测限的验证结果均符合要求。对本质控盘的稳定性研究结果表明,质控盘的稳定性良好。成功建立了人巨细胞病毒IgG抗体质控盘。结论本研究建立的质控盘可用于以酶联免疫法和化学发光法等原理的人巨细胞病毒IgG抗体诊断试剂盒的性能评价。; 徐超黄杰曲守方孙楠高尚先; 关键词：人巨细胞病毒 IGG抗体

人类EGFR基因突变体质控品的建立被引量：3: 2011年; 目的:构建了29种人类EGFR基因突变体质控品,为人类EGFR基因突变检测试剂盒的性能评价提供了可靠的质控物质。方法:根据人类EGFR全基因序列,应用Primer Premier 5.0软件在选取的序列区域设计引物,通过PCR介导的定点突变技术引入突变位点、PCR产物与克隆载体连接,转化感受态细菌,筛选阳性克隆等,建立了包含不同人类EGFR基因突变体的质控品。结果:对29种人类EGFR基因突变体质控品进行序列测定,并将测序结果进行BLAST比对,结果表明成功建立了人类EGFR基因突变体质控品。结论:本研究建立的EGFR基因突变体质控品涵盖了EGFR基因的29种突变位点,覆盖了目前最常见的EGFR基因突变类型,能够用于评价国内大多数EGFR基因突变检测试剂盒。; 黄杰曲守方徐任徐超高尚先; 关键词：基因突变质控品 PCR

人谷草转氨酶的基因改造及高效重组表达: 2014年; 目的构建人谷草转氨酶(AST)高效重组表达体系。方法优化编码人AST的核苷酸密码子,合成人AST新的基因,并将其克隆至pRSF-Duet表达载体中,转化大肠杆菌BL21,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白的表达,并通过改变诱导剂浓度、振摇速度及诱导温度优化表达条件,以产生可溶性蛋白。可溶性蛋白经镍离子柱亲和层析及分子筛层析纯化,以SDS-PAGE电泳及蛋白质免疫印迹鉴定蛋白的性质,对重组蛋白的活性及在血清基质中的稳定性进行检测。结果经过优化的AST密码子在大肠杆菌中的使用频率均在10%以上;重组蛋白存在于上清和沉淀中,经表达优化,在IPTG终浓度为2 mmol/L、25℃、150 r/min振摇8 h诱导条件下,可增加可溶性蛋白的产率,纯化后的目的蛋白经电泳及免疫印迹鉴定为谷草转氨酶,活性可达136 000 U/L,且在含有蛋白酶抑制剂的血清中稳定存在。结论通过密码子优化,成功构建了重组AST的高效表达系统,重组蛋白可以达到作为参考物质原料的要求。; 王玉梅徐超刘艳高尚先; 关键词：谷草转氨酶基因改造密码子

人乳头瘤病毒全基因组基因分型国家参考品的建立被引量：4: 2013年; 目的:建立包含20种不同型别和5个阴性参考品的人乳头瘤病毒全基因组基因分型国家参考品,为人乳头瘤病毒基因分型检测、对试剂盒进行质控和分型检测试剂盒评价提供质控物。方法:通过对本科室保存的人乳头瘤病毒全基因组质粒进行提取、测序,用测序正确的质粒连同收集的阴性参考品组成人乳头瘤病毒全基因组基因分型参考品盘,并用不同的方法对本套参考品进行验证。结果:采用不同的验证方法对本参考品进行验证,结果表明,参考品中20个型别的阳性参考品其型别与验证结果一致,5个阴性参考品验证结果均为阴性。结论:成功建立了包含20种不同型别和5个阴性参考品的人乳头瘤病毒全基因组基因分型国家参考品。; 孙彬裕曲守方徐超黄杰高尚先; 关键词：人乳头瘤病毒基因分型参考品性能评价

重组人转氨酶标准物质及人巨细胞病毒IgG抗体国家参考品的研制: 目的通过采用基因重组的技术表达的谷丙转氨酶蛋白和谷草转氨酶蛋白研制人谷丙转氨酶和谷草转氨酶混合标准品，用于临床检验实验室以及谷丙转氨酶和谷草转氨酶试剂盒的质量控制。通过以正常人的血清为原料研制人巨细胞病毒IgG...; 徐超; 关键词：谷丙转氨酶谷草转氨酶人巨细胞病毒 IGG抗体; 文献传递

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