戴长柏
- 作品数：90 被引量：298H指数：10
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金云南省应用基础研究基金中国科学院成都地奥科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>
- HIV介导的细胞凋亡被引量：1
- 2002年
- 孙强明徐维明戴长柏
- 关键词：HIV感染病毒蛋白细胞因子细胞凋亡介导
- 戊型肝炎病毒在人胚肺二倍体细胞KMB17等传代细胞中的繁殖被引量：10
- 2001年
- 目的探索戊型肝炎病毒(HEV)敏感细胞及体外培养条件,为HEV体外研究提供基础。方法用戊肝患者急性期阳性粪便悬液感染恒河猴进行毒种的扩增与活化,超速离心处理猴阳性粪便标本获取培养用毒种,将其接种于各种人源性细胞(包括人胚肺二倍体细胞KMB17、人肺癌细胞A549、人肝癌细胞BEL7402、人宫颈癌细胞Hela)和非人灵长类细胞(非洲绿猴肾细胞Vero),通过细胞病变观察、RT-PCR检测及免疫荧光实验来判定细胞是否对HEV敏感。结果KMB17、A549、BEL7402细胞中第一代传代7～9d出现细胞病变,11～13d脱落,传至10代仍可经正链和负链RT-PCR检测到HEV基因组正链RNA和复制的负链RNA的存在,而Hela、Vero细胞未见细胞病变,分别于2～4代后经RT-PCR不能扩增到特异片段。在KMB17细胞培养体系中经免疫荧光实验表明实验组有明显荧光着色,病毒捕获RT-PCR扩增到特异片段。结论在采用的培养条件下,KMB17、A549、BEL7402细胞对HEV敏感,而Hela、Vero细胞不敏感,本研究建立了一定代次内HEV组织培养体系。
- 乐耕耘吴娟马雁冰杜瑞娟庄俊英谢天宏李春宏戴长柏孙茂盛
- 关键词：戊型肝炎病毒RT-PCRKMB17二倍体细胞戊型肝炎
- huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白基因的构建及表达被引量：6
- 2001年
- 目的构建及表达具有huGM-CSF和huIL-6双重生物学活性的huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白分子。方法应用PCR技术对huGM-CSF和huIL-6的基因分别加以改造,同时在二者之间加上连接肽序列(G-G-S-G-S)3,克隆PCR产物,并构建成pBV220-GM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)表达质粒,表达质粒导入E.coliDH5α中诱导表达。通过QSepharoseH.P.离子交换柱和SephacrylS-200分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白。使用huGM-CSF依赖细胞株TF1和huIL-6依赖细胞株B9通过MTT法测量融合蛋白的生物学活性。结果pUC18-GM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)的测序结果表明,其序列与理论设计完全一致,表达质粒在E.coliDH5α中得到高效表达,表达的融合蛋白占总蛋白含量的25%以上,表达产物以包涵体的形式存在,通过QSepharoseH.P.离子交换柱和SephacrylS-200分子筛柱二步柱纯化及复性后获得目的蛋白,其纯度达到95%以上。融合蛋白具有huGM-CSF和huIL-6的双重生物学活性,其促进huGM-CSF依赖细胞株TF-1和huIL-6依赖细胞株B9增殖的比活性分别为1.08×108U/mg和1.95×107U/mg。结论获得了具有较高纯度和双重生物学活性的GM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白。
- 孙强明徐维明马雁冰杨旭刘红岩孙茂盛戴长柏
- 关键词：克隆基因表达生物学活性
- 人白细胞介素-6基因的克隆表达和纯化的研究被引量：6
- 1999年
- 目的：研究人ＩＬ６基因在大肠杆菌中的高效表达及表达产物的纯化。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆了人ＩＬ６ｃＤＮＡ，用ｐＢＶ２２０载体对ＩＬ６基因进行了表达调控研究，用阴离子交换柱和凝胶柱对表达产物进行纯化，用ＭＴＴ法测定ｒｈＩＬ６的活性。结果：表达调控研究发现，当ＳＤ序列到ＡＴＧ之间的距离为６ｂｐ和１０ｂｐ时在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ胶上未见明显表达，而当距离为５ｂｐ、７ｂｐ、８ｂｐ、９ｂｐ时均可获高效表达，最高表达量占菌体总蛋白的２６％。表达产物经变性复性及纯化后产品纯度达９８％，比活性为１１×１０８Ｕ／ｍｇ。
- 刘红岩马雁冰李智华姬秋彦李健峰周丽郭仁戴长柏
- 关键词：基因克隆基因表达纯化
- 人单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)实验感染树鼩的研究被引量：1
- 1985年
- 本文探查了树鼩对人单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的敏感性。其结果报道如下:(一)动物感染HSV-Ⅱ后的死亡率:树鼩经HSV—Ⅱ感染后第3天开始死亡,5一7天死亡数达到高峰。腹腔感染组第7天死亡率达80.2%,第14天为100%;阴道感染的动物死亡率为76.8%,见表1。以兔肾细胞悬液经阴道填充和腹腔注射的对照动物无1例死亡。
- 戴长柏
- 关键词：病毒树鼩
- 水蛭素基因的合成及在酵母中的表达
- 昝云红戴长柏
- 关键词：蛋白
- 人纤溶酶原K5基因在毕赤酵母中的表达及其抗肿瘤活性被引量：4
- 2008年
- 目的在毕赤酵母中表达人纤溶酶原K5基因,并检测hK5蛋白的抗肿瘤活性。方法根据酵母遗传密码的偏爱性优化设计hK5基因,构建重组表达质粒p819-8α-hK5,经G418加压筛选和甲醇诱导表达,并对摇瓶发酵条件进行优化。表达的hK5蛋白经纯化后,通过荷H22肿瘤昆明小鼠模型检测其抗肿瘤活性。结果筛选到2株高表达hK5蛋白的转化子,摇瓶表达量超过150mg/L,纯化后的蛋白纯度大于95.0%,并能够显著抑制昆明小鼠H22肿瘤的生长。结论hK5基因能够在毕赤酵母中高效分泌表达,且表达的hK5蛋白具有良好的抗肿瘤活性。
- 袁力勇刘勇饶春明马雁冰史新昌王军志戴长柏
- 关键词：人纤溶酶原毕赤酵母抗肿瘤活性
- 脂质体转移因子的制备及其活性研究被引量：9
- 2001年
- 以转移因子为包裹对象 ,探讨提高脂质体肽类药物的包封率和减缓渗漏率的方法和条件 ,以及制备过程对活性的影响 .采用逆相蒸发法制备、以正交试验设计筛选最佳配方组合 ,制备负电荷脂质体转移因子 .通过巨噬细胞吞噬试验和E -玫瑰花结试验比较不同剂型、不同给药途径对小鼠免疫功能的影响 .结果表明 :负电荷脂质体转移因子包封率和稳定性均比其他文献报道的有较大的提高 ,包封率 5次平均达 43% ,30d渗漏率 12 % ,具有一定的稳定性 ;E -玫瑰花结试验显示 :制备过程对转移因子活性无显著影响 ;巨噬细胞吞噬试验表明 :不论注射或口服脂质体转移因子 ,均有提高机体免疫功能的作用 。
- 戴宗祥刘少林苏晔张希平杨茜戴长柏
- 关键词：脂质体逆相蒸发法正交试验设计活性肽类药物包封率
- 基因芯片技术及应用被引量：8
- 2002年
- 基因芯片是通过把巨大数量的核酸固定在一块面积很小的基板上而构成 ,利用核酸分子的杂交特性 ,通过芯片的制备 ,待测样品的准备 ,样品与芯片杂交以及杂交图谱的检测和读出四个基本步骤便可获得待测样品的巨大数量的生物信息。目前基因芯片已应用于生命科学和医学等领域。本文就基因芯片技术近期的研究进展作一综合介绍。
- 孙强明栗秀芳戴长柏徐维明
- 关键词：基因芯片测序癌症
- 戊型肝炎病毒抗原基因片段及其组合表达质粒的构建被引量：1
- 2000年
- 目的选择及组合戊肝病毒 (HEV)抗原基因片段 ,进行表达与免疫学特性研究。方法根据已公布的 HEV序列 ,选择三段优势抗原表位 ,经 RT- PCR扩增基因片段 ,产物以单独或经甘氨酸连接肽串联组合的方式克隆到载体 pThioHis C中 ,经 DNA序列分析后 ,将构建的重组质粒转入大肠杆菌中进行表达 ,并以 Western印迹分析初步考察其免疫学特性。结果构建的六个重组质粒在大肠杆菌中获得了不同程度的表达 ,表达的目的蛋白具有与戊型肝炎患者阳性血清特异性结合的能力。结论 HEV抗原片段及其组合在大肠杆菌中得到了高效表达 ,并为优良诊断试剂及基因工程疫苗的研究提供了基础。
- 唐浩马雁冰李春宏杜瑞娟乐耕耘庄俊英刘勇孙茂盛戴长柏
- 关键词：基因克隆大肠杆菌基因表达戊型肝炎病毒
