文阳安
- 作品数：37 被引量：86H指数：5
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胆总管结扎引起胆汁淤积对小鼠肝脏细胞增殖的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨胆总管结扎引起的胆汁淤积对小鼠肝脏增殖的影响.方法:采用胆总管结扎手术制备胆汁淤积小鼠模型;利用全自动生化分析仪检测小鼠血清肝脏生化指标水平;用免疫组织化学方法检测小鼠肝脏中增殖相关的指标的表达情况.结果:通过胆总管结扎手术成功制备了梗阻性胆汁淤积小鼠模型;小鼠血清生化指标以及病理组织学变化表明小鼠肝脏功能受损,胆总管结扎手术成功;胆总管结扎引起胆汁淤积后,肝脏细胞有丝分裂相增加,肝细胞和胆管细胞中增殖相关的标志物表达升高,表明细胞增殖活性增强.结论:胆总管结扎引起的胆汁淤积可以引起肝脏细胞以及胆管上皮细胞的增殖.
- 罗丹文阳安董玉芳周倩云张莉萍
- 关键词：胆总管结扎术胆汁淤积细胞增殖
- 乙型肝炎病毒X蛋白稳定表达株的构建及沉默效果观察
- 2011年
- 目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)基因的HepG2-HBX细胞系,观察小分子干扰RNA(siRNA)对HBX基因的特异性抑制效果。方法用脂质体将含有HBX序列的真核表达质粒pCDNA3.1(+)/HBX-Flag转染入HepG2细胞系,通过G418筛选后,分别经RT-PCR和免疫组化对HBX的表达进行验证;化学合成靶向HBX的siRNA(即siHBX),转染入HBX稳定表达株,分别以RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR检测HBX mRNA表达水平,Western blot检测HBX蛋白表达水平以验证siHBX对HBX基因的沉默效应,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果成功构建表达HBX基因的HepG2-HBX细胞系;siHBX可以高效特异抑制HBX表达,并抑制细胞周期进展。结论 siHBX可作为一种靶向抑制肝癌细胞系内HBX表达的策略,为后续HBV感染相关性肝癌的治疗奠定了实验基础。
- 杨兵陈维贤文阳安黄世峰周倩云张莉萍
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白肝癌小分子干扰RNA
- 家蝇幼虫抗菌肽对阴沟肠杆菌感染小鼠创面的抗菌活性被引量：3
- 2008年
- 目的:观察抗菌肽对阴沟肠杆菌感染小鼠创面的抗菌作用。方法:超声处理诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,经分离纯化后,体外实验分析抗菌肽的抑菌特性。取ICR小鼠30只,切除背部1cm×1cm全层皮肤,涂抹阴沟肠杆菌菌液作为感染模型,随机分为3组。伤后2h和每天各组分别用等渗生理盐水、100g/L的磺胺米隆或0.1g/L抗菌肽滤纸湿敷,伤前和伤后3d抽血观察白细胞变化;伤后3d痂下肌肉组织细菌定量和计算存活率。结果:抗菌肽纯化蛋白对阴沟肠杆菌的抑菌活性较强;术后3组白细胞记数均减少,对照组显著低于其他两组(P<0.05);痂下肌肉组织细菌定量抗菌肽组(99±32)×102CFU/g和磺胺米隆组(87±31)×102CFU/g,均显著低于对照组(504±338)×103CFU/g(P<0.01);对照组伤后3d存活率明显少于其他两组(P<0.05)。结论:超声处理能诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,其对阴沟肠杆菌感染的ICR小鼠创面有较强抗感染作用。
- 陈曼文阳安刘银河周义文涂植光
- 关键词：家蝇抗菌肽伤口感染阴沟肠杆菌
- 诱导家蝇幼虫产生抗菌物质的实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的对家蝇体内的抗菌物质进行研究。方法通过喂菌及超声诱导家蝇幼虫产生抗菌物质,采用比浊法对家蝇体内抗菌物质的活性进行测定。结果家蝇经诱导后产生的抗菌物质具有较好的杀菌效果,但对不同细菌所产生的杀菌效果有一定差别。结论研究结果可为进一步纯化和分析家蝇体内的抗菌蛋白奠定了基础。
- 郭金英文阳安
- 关键词：家蝇抗菌物质抗菌活性
- 家蝇幼虫抗菌肽的超声诱导及分离纯化和活性研究被引量：5
- 2008年
- 目的:分离纯化家蝇(Musca domestica)幼虫免疫血淋巴中的抗菌肽,研究抗菌肽的性质和抑菌特性。为进一步研究家蝇幼虫抗菌肽的产生及应用提供实验基础。方法:通过超声处理诱导家蝇幼虫产生免疫血淋巴,经沸水浴热变性,结合高速离心,两步CM-Sepharose离子交换层析,冷冻干燥浓缩等步骤,分离得到一种具抗菌活性的蛋白质。用Tricine-SDS-PAGE鉴定抗菌肽的纯度和性质,抑菌试验分析抗菌肽的抑菌特性。结果:300W,50Hz超声处理60s能够诱导家蝇幼虫产生抗菌肽,经分离纯化后Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳结果显示为一条带,相对分子量大约为5.8kD。纯化蛋白对阴沟肠杆菌,绿脓杆菌等G-杆菌的抑菌活性较强,而对金黄色葡萄球菌效果不显著。结论:诱导和纯化了一种家蝇幼虫抗菌肽,为此类活性物质的分离纯化提供了有效的方式。
- 陈曼文阳安周义文涂植光
- 关键词：家蝇抗菌肽分离纯化
- Cyclopamine对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨sonic hedgehog(Shh)信号通路的特异性抑制剂环杷明(cyclopamine)对血清饥饿的人肝癌Hep3B细胞增殖、早期凋亡和白蛋白(albumin,ALB)、甲胎球蛋白(α-fetoprotein,AFP)表达的影响。方法:采用WST-8法、激光共聚焦扫描显微术、FCM法、RT-PCR和电化学发光免疫法,检测血清饥饿状态下cyclopamine引起的Hep3B细胞增殖抑制、线粒体膜电位改变,以及对细胞分泌ALB和AFP的影响。结果:血清饥饿状态下cyclopamine可明显抑制Hep3B细胞的增殖。半定量测量结果显示,Hep3B细胞平均红绿荧光吸光度比值有所降低;FCM法检测结果显示,6h后线粒体膜电位较0h时明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。AFP mRNA及蛋白分泌水平均明显降低,但对ALB mRNA及蛋白分泌影响不明显。结论:Cyclopamine对Hep3B细胞增殖以及AFP mRNA和蛋白的分泌有明显抑制作用,同时促进线粒体膜电位的降低,提示cyclopamine具有抑制肿瘤细胞生长和促进早期凋亡发生的作用。
- 刘靳波余晓林文阳安姜习新李朴杨细媚涂植光
- 关键词：细胞凋亡CYCLOPAMINE
- 巨噬细胞特异性启动子调控的真核表达载体的构建及靶向性研究被引量：1
- 2008年
- 目的:构建巨噬细胞特异性启动子调控的靶向巨噬细胞的真核表达载体。方法:PCR方法合成巨噬细胞特异性启动子,并将其插入带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pEGFP-N1中,替代CMV启动子。利用脂质体转染法,将其与红色荧光蛋白真核表达载体(pERFP-N1)共转染巨噬细胞和非巨噬细胞,通过荧光显微镜观察GFP和RFP在不同细胞中的表达水平来鉴定启动子的靶向性。结果:成功构建了巨噬细胞特异性启动子调控的真核表达载体,并且能在巨噬细胞中高效特异性地表达报告基因。结论:构建的靶向巨噬细胞的真核表达载体能提高目的基因的表达特异性,为提高基因治疗胞内菌感染的靶向性及降低毒副作用奠定了实验基础。
- 文阳安郭金英余晓林岑东刘靳波陈彦张健涂植光
- 关键词：巨噬细胞细胞特异性启动子真核表达载体
- 新型二聚体突变荧光引物定量PCR方法的建立及其在检测HCV中的应用被引量：3
- 2011年
- 目的开发新型二聚体突变荧光引物技术，建立一种能广泛应用于临床检测HCV的实时PCR方法。方法构建重组质粒pMD18-T—HCV5’NCR作为标准品，设计二聚体突变荧光引物，优化定量PCR体系，并进行方法学评价。将本法应用于临床确诊的30份HCV阳性患者、30份其他病毒性肝炎患者和30份健康志愿者血清标本的检测，定量结果与商品化TaqManHCV定量试剂盒的定量结果进行比较。结果建立了利用二聚体突变荧光引物的实时PCR方法，检测的线性范围为20-10^9IU／ml；批内CV在1．37％-4．59％之间，批间CV在1．58％-4．81％之间；对所有其他病毒性肝炎患者和健康志愿者血清HCV的检测结果均阴性，检测特异性为100％（60／60）；对临床确诊的HCV感染患者血清标本全部检出HCV阳性，定量结果与商品化TaqManHCV定量试剂盒的定量结果具有很好的相关性，相关系数R2=0．9501。结论建立的以二聚体突变荧光引物为平台的HCV实时PCR检测方法，具有快速、价廉、准确、结果可靠等特点，可为HCV感染的诊断、治疗监测和流行病学调查提供较好的技术支持。
- 夏乾峰文阳安刘靳波李朴涂植光
- 关键词：肝炎病毒属聚合酶链反应RNA病毒
- 特异性靶向巨噬细胞表达PR39的重组腺病毒抗胞内菌感染能力检测被引量：1
- 2010年
- 目的检测巨噬细胞靶向表达PR39的重组腺病毒Ad-SP/PR39在抗胞内菌方面的作用。方法重组腺病毒Ad-SP/PR39经CsCl密度梯度离心纯化,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白GPF的表达并检测重组腺病毒的滴度。Ad-SP/PR39感染小鼠巨噬细胞RAW264.7、人结肠癌细胞株Lovo、人肝癌细胞株HepG2、人乳腺癌细胞株ZR-75-30和非洲绿猴肾细胞株COS-7后,经RT-PCR和免疫细胞化学检测PR39的靶向表达特异性。将含Ad-SP/PR39的RAW264.7细胞裂解液作用于减毒结核分枝杆菌(BCG),检测其体外杀灭结核杆菌BCG的能力。另取RAW264.7细胞,吞噬BCG后,加入Ad-SP/PR39感染该细胞并检测细胞内活菌量,以观察其细胞内杀菌作用。结果经纯化后的重组腺病毒滴度可达5×1011efu/ml,能够有效感染小鼠巨噬细胞RAW264.7等多种细胞株。RT-PCR及免疫细胞化学技术检测各株细胞转录水平表达情况显示小鼠巨噬细胞RAW264.7能高效表达抗菌肽PR39,而其他细胞株几乎没有表达。与感染对照腺病毒Ad-C的RAW264.7细胞相比,转染Ad-SP/PR39的细胞显示出了更强的抗菌活性[BCG活菌数分别为(8.5±1.4)×106、(6.9±1.8)×106cfu/ml,P<0.05)],且能有效吞噬并杀灭胞内菌。结论本课题组构建的重组腺病毒能够靶向巨噬细胞表达抗菌肽PR39基因,发挥抗胞内菌作用,为抗菌肽在胞内菌感染治疗中的应用开辟了新思路。
- 余雪梅文阳安李朴孔飞飞陈光辉邱欣欣涂植光
- 关键词：腺病毒科巨噬细胞
- 乙型肝炎病毒X蛋白稳定表达株的构建及沉默效果观察
- 目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)基因的HepG2HBX细胞株,观察小分子干扰RNA(siRNA)对HBX基因的特异性抑制效果。方法用脂质体将含有HBX序列的真核表达质粒pCDNA3.1(+)/HBX-Flag...
- 杨兵张莉萍文阳安黄世峰
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