李文鹏
- 作品数：7 被引量：22H指数：3
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- A～D基因型乙型肝炎病毒全长逆转录酶区PCR方法的建立及应用被引量：6
- 2008年
- 目的建立适用于扩增我国常见的乙型肝炎病毒(HBV)A～D基因型全长逆转录酶(RT)区(包含全长HBsAg编码区)的聚合酶链反应(PCR)法,并确定其在分析临床标本中的应用价值。方法建立我国HBV基因序列库,设计适用于扩增A～D基因型HBV全长RT区引物,以A～D基因型HBV重组质粒为模板建立半巢式PCR(snPCR)法,并确定该法灵敏度。用所建立的snPCR对44份HBV DNA定量阳性(>5.0×102拷贝/ml)慢性乙型肝炎患者血清标本进行扩增及PCR产物直接测序。结果琼脂糖凝胶电泳及测序证实,snPCR可扩增A～D基因型HBV全长RT区,对A、B、C和D基因型HBV质粒扩增的灵敏度分别为1.2×103、7.0×102、6.0×102和6.0×102拷贝/ml。snPCR检测HBV DNA>5×102拷贝/ml血清标本的阳性率为88.64%(39/44),扩增阴性血清标本HBV DNA滴度均处于103拷贝/ml水平。扩增目的产物经直接测序确证无误。生物信息学分析显示,样品中B和C基因型分别占35.90%(14/39)和64.10%(25/39);其中15.38%(6/39)发生RT区变异,包括4例为已知耐药变异;7例(17.95%)存在HBsAg编码区变异,其中2例为已知免疫逃逸变异;6例(15.38%)发生RT区和HBsAg编码区"镜像改变"。结论建立了一种新的扩增全长RT区(涵盖全长HBsAg编码区)的snPCR。该法结合直接测序法,可同时分析我国HBVA～D基因型已知和潜在的耐药变异位点。
- 刘宝明李彤董建平胥婕李晓光严平王凤水闫玲李文鹏金晖杨靖娴庄辉
- 关键词：乙型肝炎病毒逆转录酶区耐药变异
- 1.2倍基因组长度C基因型HBV重组体构建及其在HepG2细胞中表达和复制研究
- 目的构建基于pBlueBac4.5质粒的1.2倍基因组长度C基因型HBV重组体,并研究其在HepG2细胞中的表达和复制。方法以重组质粒pWT上的1.2倍基因组长度C基因型HBV DNA序列和pBB4.5HBV1.3(D基...
- 李文鹏李彤闫玲刘宝明庄辉
- 关键词：HEPG2瞬时转染
- 文献传递
- 1.2倍基因组长度C基因型乙型肝炎病毒重组体构建及其在HepG2细胞中表达和复制被引量：8
- 2008年
- 目的构建基于pBlueBac4．5质粒的1．2倍基因组长度C基因型乙型肝炎病毒（HBV）重组体，并研究其在HepG2细胞中的表达和复制。方法以重组质粒pWT上的1．2倍基因组长度C基因型HBVDNA序列和pBB4．5HBV1．3（D基因型）上的pBlueBac4．5载体序列为模板，构建重组质粒pBB4．5HBV1．2（C基因型）。用FuGENEHD瞬时转染法，将pBB4．5HBV1．2导人HepG2细胞。用化学发光免疫分析法、Southern印迹杂交法、荧光定量PCR法，分别检测转染后不同时间点HBsAg和HBeAg、HBV复制中间体及HBVDNA水平。此外，对转染时重组质粒用量进行优化。结果酶切和序列分析证实，pBB4．5HBV1．2重组质粒构建成功。初步转染实验证实，在转染细胞培养上清中可检测到HBsAg和HBeAg。优化后转染条件为：使用60mm细胞培养皿，8～11tLgpBB4．5HBV1．2，质粒与转染试剂5：9（μg：μl）。在此条件下，5d实验周期内可检测到HBsAg和HBeAg持续表达（峰值一般出现在转染后第3天）、HBVDNA持续复制（10^6～10^8拷贝／ml）及HBVDNA复制中间体形成。结论在HepG2细胞中，建立了以杆状病毒转移载体pBlueBac4．5为基础的1．2倍基因组长度C基因型HBV体外培养体系，有望为研究HBV耐药、筛选新抗病毒药物等提供新技术平台。
- 李文鹏李彤闫玲刘宝明庄辉
- 关键词：乙型肝炎病毒HEPG2瞬时转染
- 钛钢人工听骨听力重建患者术后初步临床观察
- 李文鹏
- 关键词：听骨链重建听力
- 乙型肝炎病毒对拉米夫定耐药的研究进展
- 拉米夫定(lamivudine,LMV)是第一个用于治疗慢性乙型肝炎(乙肝)的核苷(酸)类似物,可明显抑制乙肝病毒(HBV)DNA复制,提高HBeAg血清转换率,并使患者获得肝脏生物化学和组织学改善。但临床上部分患者可表...
- 李文鹏李彤庄辉
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒对拉米夫定耐药的研究进展被引量：9
- 2007年
- 拉米夫定（lamivudine，LMV）是第一种用于治疗慢性乙型肝炎（乙肝）新的核苷（酸）类似物，可明显抑制乙肝病毒（HBV）DNA复制，提高HBeAg血清转换率，并使患者获得肝脏生物化学和组织学改善，但临床上部分患者可表现为无应答，或随用药时间延长出现反弹，即对LMV产生耐药。近期研究结果表明，HBV对LMV产生耐药可能涉及病毒、宿主及治疗方案等多因素的相互作用，存在复杂的机制。
- 李文鹏李彤庄辉
- 关键词：拉米夫定耐药乙型肝炎病毒乙肝病毒DNA复制血清转换率HBEAG
- C基因型HBV体外培养体系的建立及其在HBV表型耐药研究中的初步应用
- 李文鹏
- 关键词：瞬时转染耐药突变
