李艳亮
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学农学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目陕西省“13115”科技创新工程国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 小麦品种陕253新型avenin-like的克隆与原核表达分析被引量：3
- 2010年
- 【目的】克隆小麦品种陕253中的新型avenin-like(类燕麦储藏蛋白),并构建该基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。【方法】利用PCR方法从小麦品种陕253中克隆新型avenin-like,将克隆的avenin-like亚克隆至表达载体,经酶切及测序鉴定后,转化宿主菌Escherichia coli Rosetta-gami B(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,并利用Western blot进行检测。【结果】从小麦品种陕253克隆获得3个新avenin-like,GenBank登录号分别为GQ903577、GQ903578和GQ903579。序列分析表明,其中GQ903579为假基因,利用所构建的大肠杆菌表达载体,经IPTG诱导,实现了对登录号为GQ903578的基因在原核系统的特异性表达。【结论】新型avenin-like的克隆及原核表达的成功,为小麦品质改良提供了研究基础。
- 陈瑞佶高翔陈其皎董剑赵万春李艳亮王明霞李敏庞红喜李哲清刘俊
- 关键词：基因克隆融合蛋白原核表达
- 小麦品种“陕253”低分子量谷蛋白基因克隆、原核表达及功能鉴定
- 低分子量谷蛋白亚基（LMW-GS）是麦谷蛋白中的重要组成部分,含量占籽粒贮藏蛋白的40%,仅次于醇溶蛋白。它们通过二硫键与高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS）形成大聚合体,共同决定小麦面粉的加工品质,而低分子量谷蛋白主要赋...
- 李艳亮
- 关键词：普通小麦原核表达蛋白纯化
- 文献传递
- 陕253γ-醇溶蛋白基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2010年
- 针对γ-醇溶蛋白基因家族成员,设计了覆盖其启动子及全长编码区的3对特异引物,从强筋小麦品种陕253中克隆了8条1000bp左右的片段(GenBank登录号为GQ871770～GQ871777)。该片段群包含典型醇溶蛋白亚基的完整编码序列,并在重复区存在丰富的插入/缺失(InDel);推导的氨基酸序列显示,8个基因均具有γ-醇溶蛋白亚基的典型结构特征,其中GQ871771为假基因,4条序列(GQ871770、GQ871772、GQ871776和GQ87177)具有9个半胱氨酸残基;启动子区序列分析表明,GQ871770、GQ871772、GQ871774和GQ871776在胚乳框存在6处SNP变异,其中两处变异发生于GCN4基序内,利用WebLogo3在线构建了储藏蛋白更具代表意义的30bp保守胚乳盒模式。进化分析证实克隆序列属于γ-醇溶蛋白基因家族成员。
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- 关键词：普通小麦基因克隆
- 小麦“陕253”低分子量谷蛋白基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2010年
- 为了挖掘和有效利用陕253中的优良基因,根据LMW-GS编码基因5′和3′端的保守序列设计引物,采用PCR方法以陕253的基因组DNA为模板进行扩增,分别回收并克隆到载体上,测序后得到11个新LMW-GS基因。GenBank登录号分别为GQ892576~GQ892580和GQ892583~GQ892588,其长度为903~1 081 bp。其中,GQ892576、GQ892585、GQ892586、GQ892587和GQ892588具有完整编码区,可分别编码305、351、298、351和307个氨基酸残基的成熟蛋白。而GQ892577、GQ892578、GQ892579、GQ892580、GQ892583和GQ892584由于在编码区内出现提前终止密码子,推测为假基因。推导的氨基酸序列结果显示：它们都具有LMW-m型低分子量谷蛋白亚基的典型结构特征。
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- 关键词：小麦陕253基因克隆
- 小麦品种陕253γ-醇溶蛋白基因的克隆、原核表达与功能鉴定被引量：5
- 2011年
- 利用设计合成的特异γ-醇溶蛋白基因引物,采用PCR方法从小麦品种陕253克隆获得一个γ-醇溶蛋白基因(GenBank登录号为GQ857626)。序列分析表明,该基因编码产物的II区由于碱基转换产生一个额外的半胱氨酸残基。构建了GQ857626的原核表达载体并转入表达菌株E.coli Rosetta gami B(DE3),IPTG诱导其成功表达。使用HisTrap HP组氨酸标记亲和层析柱纯化该基因的表达产物,并使用4 g粉质仪分析其功能。结果显示,将此纯化蛋白通过氧化还原反应整合到基础面粉后,面团的形成时间缩短,稳定时间减少,弱化度增加,导致主要的粉质指数明显下降,说明该亚基对面团流变学性质整体表现不利。
- 王明霞高翔陈其皎董剑赵万春李艳亮李敏
- 关键词：普通小麦粉质参数
