公共文化服务平台

共 9 条记录，以下是 1-9

全选清除导出

排序方式：

转染人CXCR4细胞株的构建及其生物学功能的研究被引量：1: 2006年; 目的:构建稳定表达人CXCR4基因的L929细胞株,分析CXCR4分子对转基因细胞迁移能力的影响。方法:TRIzol一步法抽提人外周血单个核细胞(PBMC)总RNA,RT-PCR扩增出CXCR4基因,双酶切装入逆转录病毒载体pEGZ-Term,与辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,用其培养上清感染L929细胞72h后,经Zeocin筛选出稳定表达CXCR4分子的L929细胞株;利用微孔隔离小室检测转人CXCR4基因的L929细胞在SDF-1α作用下的迁移能力。结果:构建含CXCR4基因的重组逆转录病毒载体,经转染包装细胞293T后,筛选获得能稳定高表达人CXCR4蛋白的L929转基因细胞,转入人CXCR4基因的L929细胞在SDF-1α作用下介导迁移。结论:成功构建转染人CXCR4细胞株,为肿瘤迁移模型的研究和鼠抗人CXCR4mAb的制备打下基础。; 周时勇杨明峰王雪峰于葛华成中芹张学光; 关键词：CXCR4 逆转录病毒迁移

人LIGHT基因转染细胞的构建及鼠抗人LIGTHT单克隆抗体的研制: 目的:研制鼠抗人LIGHT功能性单克隆抗体;研究LIGHT分子在T细胞活化及Mo-Dc分化过程中的表达情况及其生物学意义。方法:采用RT-PCR方法,从活化T细胞中克隆得到了人LIGHT的cDNA,将其装入逆转录病毒载体; 杨明峰王雪峰代群邱玉华张学光; 关键词：LIGHT 共刺激分子基因转染单克隆抗体; 文献传递

人B7-H4基因转染细胞的构建及其对T细胞的共刺激效应的初步研究被引量：7: 2005年; 目的构建含有人B7H4基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达B7H4基因的L929细胞并初步研究其对T细胞的共信号作用及可能机制。方法从含人B7H4基因的cDNA序列FLJ22418中,采用PCR扩增出B7H4全长基因,双酶切装入逆转录病毒载体pEGZHATerm,与辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,用其培养上清感染L929细胞72h后,经Zeocin筛选出稳定表达B7H4蛋白的L929细胞株;采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析免疫分子的表达、3HTdR掺入检测细胞增殖以及ELISA测定细胞因子的水平。结果构建了含人B7H4基因的重组逆转录病毒载体和获得含有B7H4基因的重组病毒,筛选获得能稳定高表达人B7H4蛋白的L929转基因细胞;该转基因细胞对T细胞体外具有抑制增殖、活化和细胞因子分泌的作用。结论构建了稳定表达人B7H4蛋白的细胞株,B7H4分子在体外通过抑制T细胞分泌IL2和促进其凋亡作用可显著地下调T细胞功能的效应。; 毛一香王勤陈洁陈永井施勤杨明峰李文香张学光; 关键词：B7-H4 逆转录病毒 T细胞功能基因转染细胞重组逆转录病毒载体

人可溶性OX40L在毕氏酵母中的表达: 人OX40配体(OX40L/CD134L)含183个氨基酸,分子量约34～40kD,为Ⅱ型跨膜糖蛋白;属TNF家族成员,主要表达于成熟DC、活化的B细胞、; 孙建军施勤杨明峰马泓冰周璇张学光; 关键词：毕氏酵母; 文献传递

人B7-H4重组蛋白在大肠杆菌中的有效表达及其对T细胞体外增殖和IL-2分泌的抑制作用: 为了研究B7家族新成员B7-H4的生物学功能,采用PCR的方法,从cDNA片断FLJ22418克隆得到了人B7-H4的cDNA。以此为模板,克隆得到了编码人B7-H4胞外段功能区hB7-H4的基因 (IgV和。IgC区)...; 毛一香陈永井马泓冰郁剑锋吴鸿雅杨明峰葛彦施勤王勤张学光; 文献传递

抗人CD40人-鼠嵌合抗体的构建及其表达被引量：13: 2006年; 目的:通过基因工程抗体改造技术构建并表达抗人CD40人-鼠嵌合抗体。方法:从分泌鼠抗人CD40单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株(5C11)中提取总RNA,用一对特异性引物通过RT-PCR扩增mAbVH和VL的DNA编码区基因。根据序列分析的结果,设计引物扩增VH和VL基因相应的信号肽序列。利用基因重组技术,将mAb5C11的VH、VL基因及其相应信号肽序列与人IgG1的CH基因、Cκ链基因进行拼接,构建人-鼠嵌合抗体基因的表达质粒pIRES/h5C11。用脂质体法将其导入293T细胞株中进行瞬时表达。利用流式细胞术对表达产物进行鉴定。结果:NCBI基因数据库Blast的结果显示,克隆的基因序列符合小鼠VH、VL基因及其信号肽序列的特征。表达质粒pIRES/h5C11的构建正确,并在293T细胞株中获得瞬时表达。表达的抗人CD40的人-鼠嵌合抗体和mAb5C11具有相同的抗原结合位点。结论:成功地克隆了鼠抗人CD40mAbV区编码基因,并实现了可溶性抗人CD40的人-鼠嵌合抗体在293T细胞中的瞬时表达。; 瞿秋霞陈永井葛彦王勤陈成杨明峰张学光; 关键词：单克隆抗体嵌合抗体 CD40

人LIGHT基因转染细胞的构建及鼠抗人LIGHT单克隆抗体的研制: 人LIGHT(TNFSFl4)属于TNF超家族成员，为Ⅱ型跨膜糖蛋白，编码240个氨基酸。原位杂交实验发现人LIGHT定位于19p13．3，与CD27L，4．1BBL，c3相邻。LIGHT与LTβ和FasL分别有34％和...; 杨明峰; 关键词：LIGHT 共刺激分子基因转染单克隆抗体; 文献传递

人PD-L1Ig融合蛋白的表达及其生物学活性的研究被引量：9: 2004年; 为获取人PD L1Ig融合蛋白 ,研究其对T细胞的调节效应 ,采用PCR法从pMD18 T/PD L1中扩增出人PD L1基因的胞外段序列 ,从人脾脏细胞中扩增出人IgG1Fc恒定区基因 ,两者拼接后插入逆转录病毒载体pEGZ Term ,用脂质体法与两个辅助病毒载体共转染 2 93T包装细胞 ,用含病毒颗粒的培养上清反复感染L92 9细胞 ,Zeocin筛选能稳定分泌人PD L1Ig蛋白的基因转染细胞并亚克隆之 ,经无血清培养 ,收集的上清用Dotblot检测、ELISA定量后 ,浓缩并经ProteinG柱纯化 ,再经Westernblot鉴定。以FACS分析纯化蛋白对活化T细胞表达的PD 1结合能力 ,以体外T细胞活化体系观察其对T细胞表型的调节作用。结果表明 ,成功地构建了表达人PD L1Ig蛋白的重组逆转录病毒载体 ;获得的L92 9/PD L1Ig细胞能稳定分泌人PD L1Ig蛋白 ;该蛋白与PD 1受体具有良好的结合能力 ,能抑制T细胞的进一步活化。; 陈永井姜智张光波毛一香瞿秋霞葛彦杨明峰张学光; 关键词：PD-1 PD-L1

人B7-H3基因转染及其生物学功能的研究被引量：11: 2004年; B7 H3是新近发现的B7家族新成员。为探讨其体外生物学功能及单克隆抗体的研制构建了B7 H3基因转染细胞。利用PCR的方法扩增出B7 H3基因 ,继而插入逆转录病毒载体pGEZ Term ,重组逆转录病毒载体与两个辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞 2 93T ,经用含有完整病毒颗粒的 2 93T细胞的培养上清感染L92 9细胞 ,Zeocin筛选获得B7 H3的基因转染细胞。RT PCR、Westernblot和流式细胞仪表型分析等方法鉴定表明 ,B7 H3/L92 9基因转染细胞能稳定表达人B7 H3蛋白。继而基因转染细胞对T细胞体外培养试验显示该基因转染细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖。ELISA法分析表明该基因转染细胞抑制活化T细胞IFN γ及IL 10的分泌。CD2 8信号可以逆转B7 H3对活化T细胞的抑制效应。综上结果证实 ,B7 H3对体外活化的T细胞具有负性调控作用。; 张光波陈永井姜智於葛华杨明峰施勤王勤李文香张学光; 关键词：B7-H3 基因转染共刺激分子

全选清除导出

共1页<1>

杨明峰