欧阳浩淼
- 作品数：20 被引量：29H指数：3
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国科学院院地合作项目北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 烟曲霉β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析
- 2013年
- 探索获得优良的β-葡萄糖苷酶基因，对实现其工业化生产具有重要意义。烟曲霉Aspergillusfumigatus基因组中含有一个堙，基因（1752bp），编码的蛋白约65kDa，推测为属于糖苷水解酶家族的β-葡萄糖苷酶。将bgl基因克隆并构建了重组表达载体pGEX．bgl，转化大肠杆菌EscherichiacoliBL21（DE3），经IPTG诱导获得表达。重组蛋白经亲和层析纯化后，以七叶苷为底物进行了酶学分析，结果表明该酶的最适温度是45℃，最适pH在5．5～6．0之间，对七叶苷的‰值为17．7mmol／L。该酶在pH4～7范围内稳定；70℃保温2h后仍能保持60％的活性。金属离子和化学试剂对酶活性有不同程度的影响，Ca计对重组酶有轻微的激活作用，而SDS可强烈抑制其活性。由于其相对于真菌来源的其他葡萄糖苷酶稳定性较高，为进一步的研究与应用奠定了基础。
- 谢贻欧阳浩淼黄日波陈东金城
- 关键词：烟曲霉Β-葡萄糖苷酶原核表达酶学性质
- 将蛋白定位于细胞膜的多肽及其应用
- 本发明公开了一种将蛋白定位于细胞膜的多肽及其应用。将蛋白定位于细胞膜的多肽的氨基酸序列为序列表中的序列1。编码所述多肽的DNA分子的核苷酸序列是序列表中的序列2。本发明的多肽与GFP蛋白融合的，成功的将GFP蛋白定位于细...
- 金城欧阳浩淼陈晓敏
- 文献传递
- 将蛋白定位于细胞膜和/或细胞壁的多肽及其应用
- 本发明公开了一种将蛋白定位于细胞膜和/或细胞壁的多肽及其应用。将蛋白定位于细胞膜和/或细胞壁的多肽的氨基酸序列为序列表中的序列1。编码所述多肽的DNA分子的核苷酸序列是序列表中的序列2。本发明的多肽与GFP蛋白融合的，成...
- 金城欧阳浩淼陈晓敏
- 文献传递
- 一种曲霉表达载体及其应用
- 本发明公开了一种曲霉表达载体及其应用。该表达载体，包含原核复制起点、筛选标记基因和外源基因表达盒；所述外源基因表达盒从上游至下游依次包括几丁质酶基因启动子、外源基因和终止子。本发明还公开了一种生产蛋白的方法，该方法是将所...
- 金城欧阳浩淼陈晓敏
- 文献传递
- 将蛋白定位于细胞膜和/或细胞壁的多肽及其应用
- 本发明公开了一种将蛋白定位于细胞膜和/或细胞壁的多肽及其应用。将蛋白定位于细胞膜和/或细胞壁的多肽的氨基酸序列为序列表中的序列1。编码所述多肽的DNA分子的核苷酸序列是序列表中的序列2。本发明的多肽与GFP蛋白融合的，成...
- 金城欧阳浩淼陈晓敏
- 烟曲霉的遗传操作系统被引量：2
- 2019年
- 建立遗传操作系统是研究基因功能的一种重要手段,在研究烟曲霉Aspergillus fumigatus致病性、感染机制以及耐药性等方面发挥重要作用。文中介绍了烟曲霉中主要存在的遗传操作系统包括根癌农杆菌介导的转化、PEG介导的原生质体转化法,并重点介绍了非同源末端连接DNA修复技术、RNA沉默技术以及CRISP-Cas9转化技术。
- 欧阳浩淼金城
- 关键词：遗传操作系统烟曲霉根癌农杆菌介导
- N-糖链加工影响里氏木霉形态发生并提高木质纤维素降解能力被引量：1
- 2021年
- 【背景】烟曲霉α-1,2-甘露糖苷酶Msd S在高尔基体中将N-糖链Man_(8)Glc NAc_(2)加工为成熟分泌糖蛋白的糖型Man_(6)Glc NAc_(2),有研究表明Msd S与烟曲霉的形态发生、细胞壁合成及蛋白质分泌密切相关;与烟曲霉不同的是,里氏木霉的成熟分泌糖蛋白上的N-糖链结构为Man_(8)Glc NAc_(2),细胞却能正常生长,说明丝状真菌N-糖链的加工具有物种特异性,但其生物学意义不明。【目的】为研究N-糖链加工对里氏木霉细胞生长及蛋白质分泌的影响,本研究将烟曲霉Msd S转入里氏木霉中以改变其成熟分泌糖蛋白的糖型。【方法】构建带有烟曲霉msd S基因的重组质粒并转入里氏木霉中,获得msd S表达菌株Tr-Msd S,分析Tr-Msd S菌株的生长表型、N-糖组、蛋白质分泌途径和纤维素酶活性的变化。【结果】在里氏木霉msd S表达菌株Tr-Msd S中,分泌糖蛋白的主要糖型由出发株的Man_(8)Glc NAc_(2)转变为Man_(6)Glc NAc_(2),细胞壁组分发生变化,但细胞壁完整性未受影响;与出发株相比,Tr-Msd S菌株产孢、出芽及分枝增多;另外,Msd S的表达还影响蛋白质分泌,在50°C时降解纤维素和β-葡聚糖的能力分别提高9.9%和32.2%。【结论】研究结果表明,N-糖链的加工可影响里氏木霉蛋白质,尤其是纤维素酶的分泌,干扰N-糖链加工可能是提高里氏木酶纤维素酶产量的新策略。
- Sharma Ghimire Prakriti欧阳浩淼赵光亚解明明周慧杨静华金城
- 关键词：里氏木霉纤维素酶蛋白质分泌
- 将蛋白定位于细胞壁的多肽及其应用
- 本发明公开了一种将蛋白定位于细胞壁的多肽及其应用。将蛋白定位于细胞壁的多肽的氨基酸序列为序列表中的序列1。编码所述多肽的DNA分子的核苷酸序列是序列表中的序列2。本发明的多肽与GFP蛋白融合，成功的将GFP蛋白定位于细胞...
- 金城欧阳浩淼陈晓敏
- 文献传递
- 里氏木霉细胞表面表达系统的构建被引量：2
- 2013年
- 【目的】烟曲霉(Aspergillus fumigatus)的AfMp1p是一种通过糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)修饰定位于细胞壁上的蛋白,其细胞壁定位信号位于蛋白质的C末端。里氏木霉(Trichoderma reesei)是一种重要的工业生产菌种。构建里氏木霉的细胞表面表达系统具有十分重要的意义。【方法】我们将AfMp1p的细胞壁定位GPI信号肽和烟曲霉几丁质酶AfChiB1的N端信号肽分别与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的C末端和N末端融合并转化里氏木霉。本文首先对木霉遗传转化系统进行了优化;随后通过Real-time PCR和蛋白定量,对GFP融合蛋白在里氏木霉中不同时期的表达情况进行了研究;最后对里氏木霉表达的GFP融合蛋白进行细胞定位研究。【结果】荧光观察结合Western blot的结果表明,在平台期中期和后期,带有GPI信号的GFP融合蛋白定位于细胞壁。【结论】烟曲霉来源的GPI信号可被里氏木霉识别,本论文所构建的表达系统可用于外源蛋白在里氏木霉中的细胞壁定位表达。
- 苏建臣欧阳浩淼赵婉董志扬金城
- 关键词：里氏木霉烟曲霉
- 仙鹤藓及小立碗藓耐旱相关基因的筛选鉴定及细胞学研究
- 欧阳浩淼
- 关键词：小立碗藓细胞骨架
