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精子发生和运动相关蛋白的研究新进展: 2014年; 近年来男性不育症的发病率有不断上升趋势，在男性不育的各种原因中，精子发生障碍是一个重要因素，其中遗传因素缺陷导致的精子发生障碍是一个重要机制。男性精子发生是一个复杂的细胞分化过程，受到诸多有序表达基因的调控，其中任何一个基因发生缺失、突变或表达异常都可能引起精子生成障碍，导致男性不育。近年来随着小鼠基因敲除技术的广泛运用，越来越多调节精子发生的基因被发现，据报道目前有超过2300个基因参与。; 汪智琼李红飞张玲刘晙玭平光伦张志兵; 关键词：精子发生

探讨ARM结构的缺失对SPAG6在真核细胞中定位的影响: 目的:构建 SPAG6基因全长及六个不同长短 ARM序列的真核表达载体pEGFP-N2-SPAG6-△ARM,探讨融合蛋白在细胞内表达及定位。观察全长及六个ARM结构缺失后对真核细胞CHO细胞中SPAG6蛋白定位的影响。...; 汪智琼; 关键词：男性不育蛋白定位真核细胞; 文献传递

ARM结构的缺失对SPAG6在哺乳细胞中定位的影响: 2015年; 目的：本研究构建精子相关抗原6（SPAG6）基因全长及6个不同长短ARM序列的真核表达载体pEGFP-N2-SPAG6-△ARM，并使其在CHO细胞中表达，观察全长及6个ARM结构缺失后对真核细胞CHO细胞中SPAG6蛋白定位的影响。方法利用NCBI数据库，寻找小鼠SPAG6蛋白的保守功能区，分析全长蛋白序列，检索出SPAG6有7个ARM区域。利用PCR技术扩增出6个缺失不同ARM结构的SPAG6 cDNA，测序后亚克隆至携带绿色荧光蛋白基因的pEGFP-N2真核表达载体中，对阳性克隆进行酶切和测序鉴定，将构建的重组质粒转染到CHO细胞中，分别提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察7个不同SPAG6/GFP融合蛋白在CHO细胞内的定位。结果酶切和测序鉴定表明，全长及6个缺失不同长短ARM结构的真核表达质粒构建成功，转染实验发现重组质粒均能够在CHO细胞中表达，但仅全长表达产物定位于微管，缺失任何一个ARM区域都可影响在细胞中的微管定位。结论SPAG6在哺乳动物细胞内的正确定位依赖于全长。该研究为进一步研究SPAG6蛋白的结构与功能奠定基础。; 汪智琼张玲石玉琴李红飞张志兵; 关键词：不育

精子相关抗原6与肿瘤早期诊断的研究进展被引量：3: 2014年; 精子相关抗原6（SPAG6）为新发现的癌睾丸抗原（cancer-testis antigens, CTA）家族的一员，是一种具有巨大肿瘤早期诊断的前景蛋白。SPAG6基因是1999年Neilson等[1]在用男性不育患者的高滴度抗精子抗体血清来筛选睾丸表达基因文库时克隆出来的。目前发现SPAG6在肿瘤组织中的特异性表达，以及其能引起特异性的体液免疫应答的特点，均符合肿瘤生物标记物的筛选标准。因此该基因可能适用于肿瘤早期诊断。本文就国内研究相对较少的SPAG6的基本特征、功能以及其与肿瘤早期诊断作一下概述。; 平光伦汪智琼张玲石玉琴江高峰张双玲刘晙玭张志兵

BC022687基因真核表达质粒的构建及在CHO细胞内的蛋白表达和定位被引量：1: 2013年; 目的:BC022687可能是调节纤毛形成的蛋白。本研究构建BC022687基因真核表达载体并探讨融合蛋白在细胞内表达及定位。方法:以小鼠睾丸cDNA文库为模板,PCR扩增全长BC022687编码序列,测序后亚克隆至携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的pEGFP-C1真核表达载体中。将构建的重组质粒转染到CHO细胞中,提取细胞蛋白进行Western印迹检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察BC022687/GFP融合蛋白在CHO细胞内定位。结果:翻译BC022687蛋白的cDNA序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小950 bp。Western印迹检测到相对分子质量约为64 000的融合蛋白表达。BC022687/GFP融合蛋白在细胞内定位以细胞质为主,并在中心体、纤毛形成的模板表达。结论:成功构建BC022687全长基因真核表达载体,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。; 李红飞张玲石玉琴汪智琼江高峰宋世震付国庆张志兵; 关键词：中心体 CHO细胞

利用新型DNDF7和携带LoxP位点的LPL4质粒快速构建S-Sox5基因打靶载体: 2015年; 目的体外实验已证实S-SOX5蛋白转录调节运动纤毛基因Spag6，为进一步探索其在体内的作用，拟构建S-Sox5基因的敲除载体。方法利用新型DNDF-7和携带LoxP位点的LPL4载体，选择S-Sox5基因第1外显子作为条件性敲除目的片段，SV129系Es细胞DNA为模板分步扩增包括S-Sox5第1外显子的中间段（middle piece），上游同源左臂4．8kb（upper arm）及下游同源右臂2．5kb（down arm）的基因片段；构建upper-arm-DNDF7、down-arm-DNDF7和middle-piece-LPL4质粒，将middle-piece-LPL4的酶切产物LoxP—middle—piece．LoxP和down-arm-DNDF7酶切产物相连，形成携带LoxP位点的middle-down-arms-DNDF7重组质粒，该质粒与upper-arm-DNDF7酶切产物相连，获得S-Sox5基因打靶载体。结果经酶切鉴定及测序证实，构建的upper-arm-DNDF7、middle-piece-LPL4、down-arm-DNDF7重组质粒和S-Sox5基因打靶载体结构正确，与设计相符。结论成功构建小鼠S-Sox5条件基因打靶载体，为进一步建立S-Sox5条件敲除小鼠，在体内研究其功能打下基础。; 刘晙玭汪智琼平光伦石玉琴张玲张志兵

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汪智琼