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猪丹毒78_((75))弱毒菌株的研究——78_((75))弱毒株的诱变和筛选被引量：1: 1989年; 原猪丹毒78—78弱毒菌株是1978年从猪体分离所得的自然弱毒菌株。1983年以前在实验室条件下,经小白鼠、家鸽与猪进行了安全性、免疫原性及稳定性等系列试验,其结果均较良好。因此,于1984年采用78—78弱毒菌株制成了冻干菌,在区内的五个猪丹毒疫场和山东德州地区农村,对3500余头猪进行了田间试验,经过近期安全性和7～8个月的有效期考查,各试验点猪群均未见异常表现,也未发生过猪丹毒病。1985年初,用本菌种在北京市生药厂进行了6批次冻干苗中间试产,春防期间在江苏南通,湖南长沙、龙山,四川江津、江油和北京市郊区作了38744头猪的区域试验,其结果:本苗在南通、长沙和江津对约克、长白及其杂种猪,以皮下或肌肉注射法分别接种998头、108头和470头,各出现反应107头、10头和13头;在龙山对15455头湘西黑猪、北京郊区423头长白、荣昌、内江及其杂种猪,菌苗注射后,未见异常表现,以菌苗混饲喂服法,在江津和江油给约克、长白及其杂种猪群9734头和11556头投喂后,均未见异常表现。; 陈祝三蒲正矞陈廷和王东武志兰; 关键词：丹毒诱变

猪丹毒78_((75))弱毒菌株的研究——78_(75))弱毒菌株的生长特性观察: 1989年; 为掌握78_((75))弱毒菌株的生长特性,以便鉴别贴GC_(42)、G_4T_((10))及C_(43-5)菌株的区别点,特在相同条件下,观察了各菌株在明胶穿刺、明胶平板、马丁琼脂平板上的生长特性,各类生化反应及血清型别。; 陈祝三蒲正矞陈廷和王东武志兰; 关键词：丹毒

奶牛乳腺上皮细胞中bta-miR-29b实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用被引量：1: 2021年; 为了检测金黄色葡萄球菌(S.aureus)感染的奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)中bta-miR-29b表达,本研究建立bta-miR-29b实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评估,利用该方法检测金黄色葡萄球菌感染bMECs中bta-miR-29b的表达水平。结果显示,构建的RT-qPCR方法在bta-miR-29b标准品10 pg/20μL~1×10^(-4)pg/20μL浓度范围内,初始模板量和Ct值之间呈现良好的线性关系,线性相关系数R^(2)=0.9997。特异性试验结果显示,对bta-miR-29b标准品样本检测结果为阳性,对牛大肠杆菌和链球菌样本检测结果均为阴性,说明该方法特异性强;敏感性试验结果显示,对bta-miR-29b标准品的最低检测模板浓度为1×10^(-4)pg/20μL,比常规PCR检测的敏感性高100倍,表明该方法敏感性高;重复性试验结果显示,组内和组间的变异系数均小于1%,说明该方法重复性好。临床样本的检测结果显示,金黄色葡萄球菌感染bMECs后第24小时bta-miR-29b的表达量极显著下调(P<0.01)。上述结果表明,本研究建立的RT-qPCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,能够准确检测金黄色葡萄球菌感染bMECs中bta-miR-29b的表达,为今后bta-miR-29b的表达分析及其生物学功能的研究提供了研究手段。; 潘晓乐扈登强穆爱娟马继贤周学章韩博王东; 关键词：实时荧光定量PCR 金黄色葡萄球菌奶牛乳腺上皮细胞

产气荚膜梭菌毒素β1的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：2: 2022年; 目的原核表达产气荚膜梭菌毒素β1(Clostridium perfringens Beta1 toxin,CPB1),建立该毒素抗体的间接ELISA检测方法。方法利用基因工程技术获得cpb1基因,克隆至载体pET32a,构建重组质粒pET32α-cpb1,转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白CPB1。以重组蛋白CPB1作为包被抗原,HRP标记的羊抗鼠IgG为二抗,建立CPB1抗体的间接ELISA检测法。并以CPB1的单克隆抗体McAb 1K19为一抗,优化包被蛋白的包被浓度、一抗稀释度、封闭时间及二抗稀释度,确定方法的临界值,验证方法的特异性、精密性、灵敏性。采用建立的方法检测201份正常牛血清样品及阴性、阳性小鼠血清样品。结果表达的重组蛋白CPB1相对分子质量约为54000(CPB1蛋白与硫氧化还原蛋白的融合蛋白),主要以包涵体形式表达。包被蛋白最佳浓度为10μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶16384,最佳封闭时间为120 min,二抗最佳稀释度为1∶1000。除B和C型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,C.p.)外,其他常见食源性致病菌A_(450)均低于0.3;批内及批间精密性CV均<10%;当McAb 1K19稀释度为1∶32768,即浓度为0.002μg/μL时,A_(450)为0.2235,P/N为10.2。201份正常牛血清及阴性小鼠血清均为阴性,阳性小鼠血清为阳性,检测符合率为100%。结论制备的重组蛋白CPB1可用于建立CPB1抗体的间接ELISA检测法,建立的方法具有良好的精密性及较高的灵敏性,可用于大量临床样品的检测。; 马玲玲马红梅吴霜王东王东马臣杰李勇; 关键词：基因重组原核表达间接ELISA法

细胞快速、简易冻存法: 1996年; 将PK-15和ST细胞通过普通冰箱冷藏室(4℃)15分钟;普通冰箱冷冻室(-4℃)5分钟;低温冰箱(-20℃)20分钟;气态液氮30分钟后沉入液氮中,经一段时间后复苏,冻存细胞状态良好,全部冻存过程在70分钟内完成,比常规冻存方法节省时间,简便易行。; 王东谢琴何存利陈祝三余桂芳; 关键词：动物细胞培养

鸡减蛋综合征与传染性支气管炎二联油佐剂灭活苗的田间免疫试验: 2002年; 王东张文义卢汉礼张皓弘杨汉春; 关键词：减蛋综合征传染性支气管炎二联疫苗油佐剂灭活苗田间免疫试验

4种细胞冻存法的比较被引量：3: 1997年; ４种细胞冻存法的比较王东谢琴何存利陈祝三余桂芳（宁夏农林科学院畜牧兽医研究所银川７５０００２）在组织培养中，经常需要冻存细胞。一般采用液氮低温保存细胞，遵循的原则是缓慢冷冻和快速融解。我们在进行猪细小病毒单克隆抗体技术研究中，曾应用小鼠骨髓瘤细胞的冻...; 王东谢琴何存利陈祝三余桂芳; 关键词：病原细菌

猪丹毒78_((75))弱毒菌株的研究——78_((75))弱毒菌株的毒力和安全性试验: 1989年; 通过试验,筛选的78(75)弱毒菌株,对小白鼠、猪作了安全性试验,对鸽作了毒力测定,其结果令人满意。材料与方法 (一)菌种与菌苗菌种为78(75)弱毒菌株;菌苗为78(75)弱毒冻干苗。批号:788605、788606、788607、788608、788609(内蒙古兽医生药厂生产),788701、788702(湖南兽医生药厂生产)。 (二)试验动物健康猪为3～4月龄,宁黑与杜洛克或内江杂种,试前经猪丹毒血清培养凝集试验阴性者,来源于青铜峡市和中卫县养猪户;小白鼠、家鸽来源与要求同前。 (三)稀释液氢氧化铝稀释液,批号为8503002,南京药械厂;氯化钠注射液,批号791013,宁夏制药厂。; 陈祝三蒲正矞陈廷和王东武志兰; 关键词：丹毒毒力安全性

抗猪细小病毒单克隆抗体在猪细小病毒病诊断上的应用被引量：4: 1996年; 用淋巴细胞杂交瘤技术,研制出的抗猪细小病毒单克隆抗体,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,对本地区所采得的308份猪血清进行检测,阳性检出率达66.6%。其中20～35日龄仔猪阳性检出率在80%以上;45日龄仔猪阳性检出率为75.5%;屠宰猪阳性检出率55.2%。选择70份被检血清用已建立的检测猪细小病毒抗体的 ELISA 试验与传统的 HI 试验进行比较,其敏感性较高,ELISA 检出阳性率为85.7%,HI 检出阳性率为80%,前者较 HI 试验高出5.7个百分点。; 谢琴王东何存利陈祝三余桂芳; 关键词：单克隆抗体细小病毒病猪病

鸡减蛋综合征油佐剂灭活苗的制备及安全性和免疫效力试验被引量：1: 2002年; 将吐温 - 80加入灭活的EDS - 76尿囊毒中作水相 ,司本 - 80和硬脂酸铝加入 10号白油中为油相 ,两相混合后经胶体磨乳化制成油剂苗。检验结果表明 ,油剂苗的物理性状合格 ;无菌检验合格 ;安全性良好 ;免疫接种 2 0周龄鸡 ,8周后攻毒 ,试验组鸡产蛋率未见明显变化 (88%～ 90 % ) ,空白对照组鸡产蛋率下降 42 %。; 王东张文义卢汉礼张皓弘; 关键词：减蛋综合征安全性免疫效力

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