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表位九肽库的构建及人Ⅳ型胶原酶特异结合肽的筛选被引量：4: 1998年; 将人工合成的编码九肽的随机序列ＤＮＡ片段克隆进丝状噬菌体表达载体ｆＵＳＥ５，经多次电击转化和表达，获得肽段与噬菌体ｐⅢ蛋白融合并展示在噬菌体表面的随机序列九肽表位肽库。库容量达１０１０个克隆。以Ⅳ型胶原酶为靶蛋白，采用亲和纯化筛选模式，从中筛选出Ⅳ型胶原酶结合肽。进一步ＥＬＩＳＡ检测筛选出与Ⅳ型胶原酶特异结合的２０个阳性克隆。序列分析发现一组肽含有ＷＤＸＸＤ的共同序列，一组含有ＷＶＧＸＸＲ的共同序列。其中ＷＤＸＸＤ的序列与Ⅳ型胶原酶单链抗体可变区序列同源。结果表明，多肽库是筛选蛋白特异结合肽的有力工具，表位九肽库的构建和筛选方法的建立为进一步应用筛选具有高亲和力的特异结合肽奠定了基础。; 李传昭杨文定刘玉乐王大伟赵爱民田波; 关键词：肽类

二价铜离子对牛正常朊蛋白二级结构的影响被引量：2: 2001年; 研究了二价铜离子对牛朊蛋白的二级结构的影响,牛朊蛋白(BoPrP^c)的小分子(BoPrP^cS)和大分子(BoPrP^cL)经初步纯化后,在含Cu^(2+)的碱性溶液中氧化,用反相柱进行氧化态和还原态的BoPrP^cL和BoPrP^cS的分离,质谱分析证明氧化态的Bo-PrP^cL和BoPrP^cS分子质量分别为24.064,15.819 ku。用远紫外圆二色谱(Far-UV CD)分析显示,BoPrP^cS在208和222 nm处出现两个负峰,为典型的α-螺旋型结构;而Bo-PrP^cL在222 nm处负峰减小,与未经氧化的BoPrP^cL的质谱和CD结果比较后发现,氧化后的BoPrPcL在八肽重复区结合了6个Cu^(2+),其β-折叠含量明显增加。而Cu^(2+)对BoPrP^cS二级结构基本无影响。BoPrP^cL结合Cu^(2+)的特性及其二级结构的相应变化可能与细胞内抗Cu^(2+)毒性与氧化压力有关。; 陈微涛王大伟饶子和田波; 关键词：抗氧化作用飞行时间质谱氧化态还原态

用疏水色谱法纯化基因重组牛朊病毒正常成熟蛋白被引量：1: 2001年; 研究并比较了高效疏水相互作用色谱 (HPHIC)的流动相组成、固定相、p H值和梯度方式对分离基因重组大肠杆菌高效表达的牛朊病毒正常成熟蛋白的影响 .在此基础上 ,确定了牛朊病毒正常成熟蛋白分离纯化的最优化条件 ,即仅用高效疏水色谱法进一步便可得到纯度和质量回收率均大于 90 %的目标蛋白 .还讨论了用 HPHIC对变性 b Pr Pc L 的分离机理 .; 耿信笃王超展张养军申烨华王大伟田波; 关键词：朊病毒基因工程

牛朊病毒细胞型蛋白的高效表达和结构的初步研究: Prusiner等人的一系列工作提示了羊搔痒病是由蛋白质侵染引起的,并将这种蛋白质命名为朊病毒蛋白(PrP).Prp包括两种形式,细胞型(PrP<'c>和异常型(PrP<'Sc>).宿主受到感染后,PrP<'c>的部分α...; 王大伟; 关键词：纯化复性 CD FTIR; 文献传递

牛朊病毒正常成熟蛋白的高效表达和二级结构分析被引量：10: 2000年; 利用ＤＮＡ重组技术，将牛朊病毒正常成熟蛋白基因插入表达载体ｐＥＴ３０ａ，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中高效表达，将表达产物（包涵体）用８ｍｏｌ／Ｌ尿素溶解，用阳离子交换柱纯化，纯化产物复性后，进行质谱、圆二色谱（ＣＤ）以及Ｆｏｕｒｉｅｒ变换红外光谱（ＦＴＩＲ）分析．结果表明，所得牛朊病毒正常成熟蛋白的分子量为２３６３０ｕ，其二级结构主要由α螺旋构成，含少量β折叠．; 王大伟杨怀义饶子和田波; 关键词：PRP 成熟蛋白

中国牛朊病毒基因的克隆和序列分析被引量：10: 1998年; 从中国牛外周血中分离淋巴细胞,提取基因组DNA.用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出不致病的朊病毒蛋白(PrP^c)基因,并克隆到pGEM-TEasy Vector.序列分析表明所克隆的牛PrP^c的片段大小为795bp,包含了牛朊病毒基因的完整编码区序列.该基因无内含子,同国外报道的已知序列完全相同.; 王大伟王学韩生成田波饶子和; 关键词：DNA序列分析基因克隆

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王大伟