王密
- 作品数：17 被引量：106H指数：5
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目黑龙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 4B-1200型平贝母收获机关键部件优化设计与试验
- 平贝母是一种百合科贝母属的草本药用植物,具有清热润肺,止咳化痰的作用,是东北的特产药材之一。由于平贝母较高的药用价值和经济价值,其种植面积不断增大,种植区的平贝母收获基本上还是传统的人工或半机械化作业。目前,国内的平贝母...
- 王密
- 关键词：平贝母收获机优化设计
- 文献传递
- 猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白C端主要抗原表位区的原核表达被引量：1
- 2010年
- 利用分子生物学软件分析GenBank公布的猪戊型肝炎病毒DQ1株ORF2的氨基酸序列,确定了其C端抗原性较高的区域,针对此区域设计并合成了一对特异性引物,RT-PCR扩增该区域,并将此片段克隆到原核表达载体pET30a(+)上,命名为pET30a-ORF2C,然后转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,1.0 mmol/L IPTG 37℃诱导表达。结果表明,RT-PCR扩增得到301 bp的片段,重组蛋白大小约为18 ku,与预期大小相符。Western blot分析表明,该蛋白与阳性血清发生特异性反应,为进一步利用其建立诊断方法奠定了基础。
- 冉旭华闻晓波王密李冬野侯喜林
- 关键词：猪戊型肝炎病毒ORF2
- 猪戊型肝炎病毒ORF2主要抗原表位区间接ELISA方法的初步建立被引量：4
- 2010年
- 应用原核表达系统表达猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白C端和N端的主要抗原表位区,重组蛋白命名为ORF2-C和ORF2-N,初步建立间接ELISA诊断方法。用重组蛋白ORF2-C和ORF2-N作为诊断抗原,对反应条件进行优化,初步建立ELISA诊断方法。抗原最适包被浓度ORF2-C为8μg/mL、ORF2-N为12μg/mL;血清最适稀释度均为1∶50,ORF2-C作用时间为50min、ORF2-N作用时间为90min;酶标抗体最适稀释度为1∶5000;ORF2-C判定标准:D450nm值≥0.348为阳性,D450nm值<0.348为阴性;ORF2-N判定标准:D450nm值≥0.397为阳性,D450nm值<0.397为阴性。与戊型肝炎病毒诊断试剂盒检测结果相比,阳性符合率分别为93.3%、86.7%。利用重组蛋白建立的ELISA方法特异性、敏感性和重复性均较好,且ORF2-C的检测效率明显高于ORF2-N,该方法的初步建立为进一步完善猪戊型肝炎病毒诊断方法奠定基础。
- 闻晓波王密冉旭华周恩民李晓娟侯喜林朴范泽
- 关键词：猪戊型肝炎病毒ORF2ELISA
- 牛化脓隐秘杆菌性肺炎的病原分离鉴定及诊断方法研究
- 近几年大规模牛场犊牛化脓性肺炎发病率呈上升趋势,经检测其病原以化脓性隐秘杆菌(A. pyogenes)为主。本研究旨在建立快速检测A.pyogenes的PCR诊断方法,并表达部分PLO蛋白,将其作为抗原,初步建立间接EL...
- 王密
- 关键词：化脓隐秘杆菌PCRPLO原核表达ELISA
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型ORF2-ORF1串联基因的原核表达及活性分析被引量：5
- 2010年
- 为探讨原核表达的PCV-2ORF2-ORF1串联蛋白的抗原性及其作为基因工程亚单位疫苗的可能性,以构建好的PCV-2大庆分离株质粒pMD-18T/PCV-2为模板,PCR分别扩增去掉核定位信号的Cap蛋白基因(dNLS-ORF2)和Rep蛋白基因(ORF1),将其串联克隆到原核表达载体pET30a(+)上,经PCR、酶切和测序鉴定,成功构建了重组质粒pET30a-ORF2/ORF1。转化E.coli BL21(DE3)pLysS感受态细胞,经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE电泳与Western blot分析。纯化的重组蛋白与PCV-2阳性血清发生特异性反应,并能与免疫小鼠的抗血清发生特异性反应。重组蛋白具有较好的免疫学活性,为基因工程亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 闻晓波李冬野李树东冉旭华李晓娟邵磊王密朴范泽杨焕民侯喜林倪宏波
- 关键词：猪圆环病毒2型ORF2
- 绵羊肝片吸虫谷胱甘肽硫转移酶基因的克隆与序列分析
- 2012年
- 本研究扩增肝片吸虫(Fasciola hepatica,Fh)谷胱甘肽硫转移酶(GST)基因,并进行同源性分析。根据GenBank发表的部分Fh GST基因序列设计并合成一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增出Fh GST基因完整的开放阅读框(openreading frame,ORF),测定序列,使用分子生物学软件进行同源性分析。获得Fh GST基因全长682bp,编码218个氨基酸,与澳大利亚分离的肝片吸虫GST同源性较高,与大片吸虫和卫氏并殖吸虫的GST也有较高的同源性。不同虫株GST基因具有较高的同源性,因此Fh GST蛋白不适合用作诊断抗原,但由于其存在交叉反应,GST基因作为分子疫苗的候选基因具有重要意义。肝片吸虫GST基因的克隆,为进一步研究GST蛋白的功能和作用奠定了基础。
- 冉旭华闻晓波王春仁刘娣刘娣孙中武李晓娟
- 关键词：肝片吸虫GST基因
- 肝片吸虫组织蛋白酶L真核表达载体构建及重组蛋白活性分析被引量：3
- 2013年
- 目的构建肝片吸虫组织蛋白酶L(CatL)的真核表达载体,研究重组蛋白的生物学活性。方法以构建好的重组质粒pET30a-FhCatL为模板,利用PCR技术扩增肝片吸虫组织蛋白酶L基因(catL),连接真核表达载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP-N1-CatL,转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光,Western blotting检测重组蛋白表达情况。结果重组质粒pEGFP-N1-CatL在HeLa细胞中获得了表达,Western blotting结果表明真核表达质粒表达的重组蛋白能与自然感染肝片吸虫的山羊阳性血清发生特异性反应。结论肝片吸虫CatL真核表达载体构建成功,真核表达产物可与自然感染的山羊阳性血清发生特异性反应,具有免疫反应性,可做为分子疫苗的候选和诊断抗原进行进一步的研究。
- 闻晓波冉旭华王春仁宋佰芬魏晓曼李晓娟王密苗艳
- 关键词：肝片吸虫真核表达活性分析
- 牛源化脓隐秘杆菌PLO蛋白的原核截短表达及其溶血活性检测被引量：11
- 2012年
- 为研究牛源的化脓隐秘杆菌溶血素(PLO)生物学功能,本研究应用PCR方法扩增牛源化脓隐秘杆菌(A.pyogenes)PLO全基因序列,通过生物信息学方法分析其与猪源A.pyogenes的PLO蛋白差异,并构建了溶血功能区重组表达质粒pQE30-PLO585,在E.coli XL1Blue中用IPTG诱导表达。结果表明,扩增到PLO蛋白基因ORF为1 605 bp,编码535个氨基酸,与猪源PLO的核苷酸序列同源性为97.4%,氨基酸同源性为97.2%,在生物学活性功能区没有发生改变。表达的PLO蛋白溶血功能区重组蛋白能够被阳性血清识别,而且具有溶解绵羊红细胞的活性,产生β溶血现象。本研究获得了牛源A.pyogenes截短重组PLO蛋白,并证明PLO具有β溶血功能与较好的抗原性。
- 周玉龙高小兵范春玲王密于红欣侯喜林朴范泽朱战波
- 关键词：生物学功能
- 大肠杆菌病病原学检测方法的研究进展被引量：19
- 2008年
- 大肠杆菌主要寄居于人和动物的肠道内,在自然界分布广泛,属于条件致病菌。大肠杆菌能通过消化道使人类和畜禽发生感染和中毒。对大肠杆菌病的防治和流行病学调查都依赖于对病原的及时准确的检测和鉴定。本文对大肠杆菌病各种实验室病原检测方法,包括细菌的分离培养、荧光免疫测定技术、免疫胶体金标记技术、免疫磁珠分离法、多重PCR、荧光定量PCR等方法作以概要性综述。
- 冉旭华王密闻晓波崔玉东
- 关键词：大肠杆菌病病原学检测多重PCR
- 肝片吸虫GST真核表达载体构建及重组蛋白活性分析被引量：3
- 2011年
- 目的构建肝片吸虫谷胱甘肽S-转移酶(GST)的真核表达载体,研究重组蛋白的免疫原性。方法以构建好的重组质粒pET30a-FhGST为模板,利用PCR技术扩增肝片吸虫谷胱甘肽S-转移酶基因(GST),连接真核表达载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP-GST,转染Hela细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光,Western blotting检测重组蛋白表达情况。结果重组质粒pEGFP-GST在Hela细胞中获得了表达,Western blotting结果表明真核表达质粒表达的重组蛋白能与自然感染肝片吸虫的山羊阳性血清发生特异性反应。结论肝片吸虫GST真核表达载体构建成功,真核表达产物可与自然感染的山羊阳性血清发生特异性反应,具有生物学活性,可做为分子疫苗的候选进行进一步的研究。
- 冉旭华闻晓波王春仁刘娣孙中武李晓娟王密
- 关键词：肝片吸虫GST基因真核表达活性分析
