王巍
- 作品数：4 被引量：19H指数：2
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- 发文基金：吉林省重大科技攻关项目国家科技重大专项吉林省科技发展计划基金更多>>
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- 酸性蛋白酶pepB基因植物表达载体的构建及在玉米中的转化
- 酶制剂作为一种无毒无任何副作用的绿色饲料添加剂,其应用正越来越广泛,有些营养学家甚至认为酶制剂应该作为家禽日粮的必不可少的组成成分。酸性蛋白酶是一类能够在微酸条件下水解
- 王巍王俊玲付永平兰磊王丕武
- 文献传递
- 酸性蛋白酶pepB基因植物表达载体的构建及在玉米中的转化被引量：2
- 2009年
- 以黑曲霉基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增了酸性蛋白酶pepB基因序列,并将其克隆到pMD18-TVector上,对重组子进行了PCR检测和限制性内切酶分析并测序。DNA序列分析表明:克隆片段长为1340bp,与已发表的pepB基因序列同源性达99.85%。将pepB基因片段插入到带有耐盐基因的表达载体pCAMBIA1301-BADH上,构建了无抗生素选择标记的重组质粒pB-pepB-35S,从而得到了植物表达载体,该载体利用耐盐基因BADH替代抗生素基因作为筛选标记。通过花粉管通道法将其导入玉米自交系,获得了转基因植株,并得到了转化植株的种子。
- 王巍王丕武王俊玲付永平兰磊杨金慧
- 关键词：玉米基因转化
- BADH/pepB双价基因无选择标记表达载体转化苜蓿的初步研究被引量：17
- 2009年
- 选用公农1号紫花苜蓿，以5～7d苗龄的无菌子叶为外植体，通过农杆菌介导法将含有甜菜碱醛脱氢酶（BADH）和酸性蛋白酶（pepB）双价基因的无选择标记表达载体导入苜蓿子叶中，并用含有Na2CO3和NaHCO3碱性盐溶液的培养基进行筛选，得到抗盐碱转化植株。碱性盐浓度48mmol／L宜于子叶愈伤诱导，有利于转化植株的获得。对转化植株进行PCR检测，初步证明目的基因序列已经整合到苜蓿基因组中。移栽成活的13棵碱性盐抗性植株经PCR检测有3棵植株呈阳性。
- 杨金慧王丕武曲静王巍王俊玲
- 关键词：BADH苜蓿
- 植物防御素D1基因种子特异表达载体构建及在玉米中的转化被引量：1
- 2010年
- 以绿豆基因组DNA为模板,通过PCR技术扩增了绿豆防御素D1基因序列,与GenBank中绿豆防御素基因的相应片段有99.08%同源性,克隆片段长为355bp。将种子特异启动子sbeIIb和D1基因插入到带有耐盐基因的表达载体pCAMBIA1301-BADH中,构建了无抗生素选择标记的种子特异表达载体pSBEIIb-D-B,该载体是利用耐盐基因BADH替代抗生素基因作为筛选标记,消除了对环境及肠道微生物的潜在威胁。将该载体利用超声波辅助农杆菌介导法转化了2个玉米自交系丹598、988的愈伤组织,经分化诱导出苗后进行PCR检测,证明得到转基因阳性植株,相对转化率最高达到7.8%。
- 王俊玲王丕武王巍付永平马建兰磊牛亚玲
- 关键词：玉米防御素表达载体构建转基因技术
