王朝霞
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室更多>>
- 发文基金：上海市浦江人才计划项目转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- H9亚型禽流感病毒基质蛋白M1单克隆抗体的制备与鉴定被引量：6
- 2010年
- 本研究用纯化的H9N2亚型禽流感病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,成功获得3株能稳定传代并分泌抗H9亚型禽流感病毒基质蛋白M1单克隆抗体的杂交瘤细胞:3G8、2F6、5F2。间接ELISA方法检测,3株单克隆抗体的腹水间接ELISA效价达106以上。构建了真核表达载体pCAGGS-M1并转染于MDCK细胞,以用于腹水的Western blot和间接免疫荧光鉴定。间接免疫荧光结果表明,3株单克隆抗体皆与真核表达蛋白M1反应。这些单克隆抗体的制备为后期研究M1蛋白在流感病毒复制与出芽过程中的重要生物学功能奠定了基础。
- 戴晓光滕巧泱黄海碧王朝霞张树梅张旭徐大伟申之义李泽君
- 关键词：H9亚型禽流感病毒单克隆抗体间接免疫荧光蛋白免疫印迹法
- 稳定表达流感病毒PR8 HA蛋白MDCK细胞系的建立及鉴定被引量：3
- 2010年
- 为建立稳定表达流感病毒(IV)HA蛋白的MDCK细胞系,本研究利用含有嘌呤霉素抗性基因的pMX载体,在启动子下游的AgeⅠ和NotⅠ两个限制性内切酶位点之间插入PR8株HA基因的开放阅读框,构建重组质粒pMX-PR8HA,将pMX-PR8 HA与3个分别表达VSVG、gag/pol和NF-KB的重组质粒共转染293T细胞,获得逆转录病毒样颗粒。用含有逆转录病毒样颗粒的细胞培养上清液感染MDCK细胞,利用嘌呤霉素进行筛选、纯化得到稳定表达PR8株HA蛋白的细胞系。连续传10代后,进行PCR、RT-PCR、IFA和western blot鉴定,结果表明,获得了能够稳定表达IV PR8株HA蛋白的MDCK细胞系。该细胞系的建立有望为IV表达外源基因提供可靠的培养细胞系。
- 黄海碧滕巧泱王朝霞戴晓光张树梅张旭申之义李泽君
- 关键词：流感病毒HA基因
- PR8流感病毒突变株的制备及其在鸡胚上生长特性的研究被引量：2
- 2010年
- 在前期发现流感病毒WSN株的NS2或NP蛋白突变使病毒在细胞上增殖能力明显提高的基础上,研究了这些突变是否会使PR8病毒效价在鸡胚上进一步提高的可行性,通过反向遗传操作技术获得了NS2E67S和NPP277A两株PR8突变病毒。经过比较突变病毒与野生病毒在鸡胚中的增殖能力,发现NS2E67S突变病毒在鸡胚上增殖后的效价与HA抗原表达量均明显提高,而NPP277A突变病毒在鸡胚上的增殖能力不及野生PR8病毒。该研究结果将对进一步研究病毒基因变异与宿主互作机制奠定基础,有可能通过NS2E67S突变病毒对改良流感疫苗具有重要的应用价值。
- 王朝霞滕巧泱戴晓光黄海碧张树梅张旭徐大伟李培锋李泽君
- 关键词：流感病毒突变株
