王牟平
- 作品数：72 被引量：253H指数：9
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划中国农业科学院哈尔滨兽医研究所所长基金黑龙江省博士后科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 牛分枝杆菌mpb64基因的克隆、鉴定及其表达被引量：3
- 2005年
- 以牛型分枝杆菌基因组DNA为模板,PCR方法扩增mpb64基因,纯化PCR产物并与 pDM18-T载体连接、转化,经酶切及核苷酸序列鉴定为正确后,酶切产物亚克隆到原核表达载体 pET30a(+)的KpnI／EcoRI位点,构建重组表达质粒pET30a+-mpb64,转化到大肠杆菌DE3内,以 IPTG进行诱导,终浓度为1mmol／L,诱导产物进行SDS-PAGE电泳。结果表明,PCR方法成功扩增 出mpb64基因,核苷酸序列测定验证了其正确性,重组表达质粒表达的pET30a+-mpb64融合蛋白 相对分子量为30.4kDa,与实测相符。牛分枝杆菌pET30a+-mpb64的成功表达为牛结核病的诊断 及新型疫苗的研究奠定了基础。
- 张秀华刘思国宫强王春来王牟平彭永刚沈国顺郭洋郭设平
- 关键词：SDS-PAGE电泳核苷酸序列测定PCR产物IPTGT载体
- 果子狸SARS-CoV实验性感染的病理学研究被引量：2
- 2006年
- 目的为了明确实验性感染SARS-CoV的果子狸各器官的病理变化,进一步确定SARS-CoV与果子狸的关系,评价其作为SARS动物模型的可行性。方法在人源SARS-CoV分离株BJ01(有29个核苷酸的缺失序列)和GD01(无29个核苷酸的缺失序列)实验性感染果子狸的基础上,对其经福尔马林固定的肺、脾、淋巴结、肝、小肠、肾、气管、大脑、胰腺、性腺、胃、心组织进行病理组织学观察,同时用原位杂交技术(ISH)对SARS-CoV在组织器官中的分布进行检测。结果攻毒后不同时期,肺、脾、淋巴结、肝、小肠、肾和大脑有不同程度的病理变化,主要病变是肺脏为急性间质性肺炎:肺炎性水肿、肺泡腔浆液渗出以及肺泡壁充血、出血并因淋巴细胞、巨噬细胞增生、浆液渗出而显著增厚,肺内小血管增生、扩张。淋巴结、脾脏结构破坏,淋巴滤泡消失,脾小体萎缩,淋巴细胞明显减少,结缔组织增生。肝细胞脂肪变性,并见有多个淋巴细胞浸润灶。ISH结果显示,在肺、小肠、大脑中检测到SARS-CoV基因,其它器官中未检到,与SARS患者的检测结果基本相符。结论果子狸实验性感染SARS-CoV可导致与人类相似的病理学变化和病原分布,表明果子狸可以作为评价SARS-CoV疫苗及治疗药物的动物模型。
- 肖一红孟庆文尹训南关云涛刘永刚李昌文王牟平孔宪刚吴东来
- 关键词：SARS-COV果子狸冠状病毒感染原位杂交
- 猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因的克隆、表达及其免疫活性研究被引量：3
- 2004年
- 以猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型25＿4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因片段(OMPc),酶切及核苷酸序列分析鉴定后,与原核表达载体质粒pGEX＿6P＿1进行连接,构建成重组表达载体pGEX＿OM Pc,转入大肠杆菌BL21中,以IPTG进行诱导,SDS＿PAGE电泳分析发现,转化了重组质粒的菌株所表达的融合蛋白相对分子量为34kD,与实际预测相符,命名为GST＿OMPc。GST亲和层析柱进行纯化,ELISA方法对纯化蛋白进行检测。结果表明:纯化蛋白GST＿OMPc能够与兔抗猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型的阳性血清反应。OMPc蛋白的成功表达为其功能的研究打下基础。
- 刘思国彭永刚王牟平王春来宫强
- 关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌克隆
- 用切向流超滤的方法浓缩蓝耳病灭活疫苗半成品的研究报告被引量：3
- 2010年
- 为了验证采用切向流超滤的方法浓缩蓝耳病疫苗半成品对提高其效价的效果,我们作了多次浓缩试验,并于每次试验之后进行TCID50检测。选取其中4次试验的样品灭活乳化成苗,进行仔猪的免疫试验,于免疫后21日采血分离血清做ELISA检测。从动物试验的检测结果来看,浓缩后的仔猪阳性率高于浓缩前,证明以超滤的方法提高蓝耳病疫苗半成品的效价是可行的。
- 于向前王克雄于向西蔡雪辉王洪峰秦运安王牟平
- 关键词：蓝耳病效价动物试验
- 鸡产蛋下降综合征血凝抑制试验抗原符合率比较
- 2011年
- 用哈尔滨维科生物技术开发公司生产的批号为200901的鸡减蛋综合征京911株油乳剂灭活疫苗，以0．5mL／只剂量接种120日龄SPF鸡10只，7d后采血分离血清，以后每隔一定时间进行采血、分离血清。同时又采集了发病鸡场的15份发病鸡血清。分别用血凝抑制试验和琼脂扩散（AGP）试验对自制的阳性血清和发病鸡血清样品进行血清学检查。结果表明：当血清HI效价等于或大于28时，两种方法的符合率可达100％；当血清的HI效价为26-27时，AGP与HI的符合率为73．33％~86．67％；当血清的HI效价为24-25时AGP的检出率很低或完全呈阴性。从两种方法的符合率比较还可得出HI试验检测的灵敏度要高于AGP，而且HI法简单、特异、快速、实用、方便，不但能定性还可以定量。
- 鞠妍闫丽辉朱庆虎王牟平
- 关键词：鸡产蛋下降综合征符合率
- 牛、羊腐蹄病研究概况被引量：3
- 2008年
- 腐蹄病（Footrot）是由坏死梭杆菌（Fusobactefium necrophorum，F．necrophorum）和节瘤拟杆菌（Baeteroides nodosu，B．nodosus）协同感染引起反刍动物趾间皮肤及深层软组织的一种高度接触性传染病？以动物蹄部组织的化脓坏死性分解、腐败恶臭和角质形成受到破坏为主要特征。
- 童申军王牟平张传东祝东彬
- 关键词：腐蹄病接触性传染病反刍动物坏死梭杆菌节瘤拟杆菌软组织
- Ⅰ型犬腺病毒弱毒疫苗株及其应用
- 本发明公开了I型犬腺病毒弱毒疫苗株及其应用。本发明将所分离的I型犬腺病毒强毒株在MDCK上传代、克隆，培育了致弱毒株(CAV-HR)，安全性和免疫原性试验结果表明，本发明的弱毒株CAV-HR株对同源强毒攻击的犬可以提供很...
- 刘大飞张洪英曲联东王牟平刘立奎
- 牛分支杆菌热休克蛋白65基因的分子克隆和表达被引量：10
- 2004年
- 以牛型分枝杆菌Vallee菌株基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增热休克蛋白65(Hsp6S)基因,PER产物经纯化与EcoR Ⅰ/Sal Ⅰ双酶切后与经同样处理的原核表达载体pGEX-6P-1进行连接,转化感受态细胞BL21中,筛选和构建了原核重组表达质粒pGEX-H65,核苷酸序列测定验证其正确性。以1 Mol/LIPTG诱导,进行SDS-PAGE电泳。结果表明,Hsp65基因表达的融合蛋白GST-H65裂解为两部分;即64kD和22kD,两个蛋白分子量相加与预测的86kD(HsP60 kD+GST26 kD)相符。牛分支杆菌热休克蛋白HSP65的成功表达为其功能的研究打下基础。
- 刘思国王春来彭永刚宫强王牟平
- 关键词：分子克隆原核表达
- 结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6及CFP10在原核表达载体中的克隆鉴定和表达
- 以人型结核分枝杆菌H37RV株基因组DNA为模板,用PCR法对ESAT-6,CFP10进行扩增,产物经纯化后与载体PMD18-T连接,转化及酶切鉴定后,亚克隆到原核表达载体PGEX-6P-1,构建重组质粒,转化入大肠杆菌...
- 宫强刘思国王牟平王春来彭永刚沈国顺
- 关键词：结核分枝杆菌分泌蛋白克隆
- 文献传递
- 表达基因Ⅰ亚型禽呼肠孤病毒σB和σC的重组4型禽腺病毒的拯救及鉴定
- 2024年
- 为获得1株能够融合表达基因Ⅰ亚型禽呼肠孤病毒(avian reovirusⅠ-sub,ARV GCⅠ-sub)σB和σC的重组4型禽腺病毒(fowl adenovirus 4,FAdV-4)株,以禽腺病毒rHN20为病毒载体,构建表达σB和σC蛋白的重组黏粒rHN20-r1966-ARV GCⅠ-sub,使用新型Fosmid黏粒拯救系统进行病毒拯救。通过PCR、间接免疫荧光试验(ⅠFA)、Western-blot以及体外复制动力学曲线鉴定重组毒株。结果显示,在感染的LMH细胞中成功检测到ARVGCⅠ-sub的σB和σC基因;Western-blot结果显示,在感染重组病毒的LMH细胞中成功检测到FAdV-4的Fiber蛋白、ARVGCⅠ-subσB和σC蛋白;ⅠFA结果显示,能特异性检测到FAdV-4的Fiber蛋白、ARVGCⅠ-subσB和σC蛋白;重组毒rHN20-r1966-ARV GCⅠ-sub与亲本毒rHN20的复制能力无明显差异;表明重组病毒rHN20-r1966-ARV GCⅠ-sub拯救成功。重组病毒rHN20-r1966-ARV GCⅠ-sub的成功构建为同时靶向ARVσB和σC蛋白的ARV防控疫苗的研制提供了技术支撑,为ARV与FAdV-4的防控奠定了基础。
- 许壮壮郭茹王素艳高立陈运通张涛高宁玉吴龙波祁小乐张艳萍崔红玉刘永振段雨路王牟平高玉龙
- 关键词：重组病毒
