王铭
- 作品数：10 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项哈尔滨市科技创新人才研究专项资金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生经济管理更多>>
- 弓形虫SAG1和GRA4基因的原核表达及其重组猫疱疹病毒Ⅰ型转移载体的构建被引量：5
- 2013年
- 为构建表达弓形虫抗原的重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)转移载体,本研究以pBluesciptⅡ-SK(-)为骨架载体,分别插入FHV-1 TK基因的5'(2 000 bp)和3'(1 700 bp)同源臂、pCAGGs载体中含有启动子和终止信号的表达盒以及弓形虫RH株SAG1或GRA4基因,构建重组FHV-1的转移载体pBS-TK-SAG1和pBS-TK-GRA4。将其分别转染于293T细胞,通过原核细胞表达的截短SAG1和GRA4重组蛋白制备的鼠多克隆抗体进行western blot鉴定。结果显示,制备的弓形虫SAG1和GRA4多克隆抗体能够特异性识别重组表达和虫体表达的天然的SAG1和GRA4两种弓形虫蛋白,分子量一致,分别为35 ku和45 ku。本研究为表达弓形虫RH株SAG1和GRA4基因的猫重组疱疹病毒Ⅰ型载体疫苗的研制奠定了基础。
- 高洋程子英王铭郑君贾洪林鲁承
- 关键词：弓形虫SAG1
- 伪狂犬病病毒被膜蛋白pUL11和pUL16单克隆抗体的制备及初步应用
- 2022年
- 为了制备能特异性识别伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)被膜蛋白pUL11和pUL16的单克隆抗体并初步评估其应用潜力,试验采用原核表达系统表达并纯化了PRV HLJ-2013毒株的pUL11和pUL16可溶性重组蛋白,对重组蛋白进行纯化,分别以两种纯化蛋白作为免疫原经皮下注射免疫小鼠制备单克隆抗体,并将该单克隆抗体与PRV HLJ-2013和单纯疱疹病毒1型(HSV-1)共孵育以确定其特异性。结果表明:试验采用原核表达系统成功表达并纯化了PRV HLJ-2013毒株的pUL11和pUL16可溶性重组蛋白,成功获得了pUL11的单克隆抗体11-3和pUL16的单克隆抗体16-13,11-3和16-13的腹水抗体效价分别为1∶25600和1∶51200;两株单克隆抗体均可与PRV及HSV-1感染的Vero细胞发生特异性反应。说明试验成功制备了pUL11和pUL16蛋白的单克隆抗体,该单克隆抗体具有较好的特异性。
- 朱婧史智宾杨德成王铭李嘉琦王鹏飞王靖飞
- 关键词：伪狂犬病病毒原核表达蛋白纯化单克隆抗体
- 新孢子虫cDNAT7噬菌体展示文库的构建及筛选
- 为筛选犬新孢子虫相关抗原,本研究利用T7噬菌体展示技术构建犬新孢子虫cDNA文库,并利用阳性血清筛选新型犬新孢子虫抗原蛋白.所构建的新孢子虫cDNA文库的原始文库重组克隆数为6×106pfu,扩增后文库滴度为3...
- 宋铭忻路义鑫韩彩霞李巍李晓云王铭
- 弓形虫移动联结复合物成员棒状体颈部蛋白4的功能研究
- 弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种原虫,属专性细胞内寄生的顶复门,可以引起严重的人畜共患弓形虫病。弓形虫病在全球范围内流行与分布,2013年在美国CDC发表的数据显示弓形虫在美国的感染率达到22.5%,全...
- 王铭
- 关键词：弓形虫
- 文献传递
- 弓形虫移动联合复合物成员棒状体颈部蛋白4的功能研究
- 弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种原虫,属专性细胞内寄生的顶复门,可以引起严重的人畜共患弓形虫病。弓形虫病在全球范围内流行与分布,2013年在美国CDC发表的数据显示弓形虫在美国的感染率达到22.5％,全...
- 王铭
- 关键词：弓形虫基因功能
- 弓形虫酵母双杂交cDNA文库构建及与AMA1羧基端相互作用蛋白的筛选被引量：3
- 2014年
- 为筛选弓形虫AMA1基因羧基端(AMA1c)在弓形虫中的相互作用分子,本研究采用MatchmakerTM Gold酵母双杂交系统,构建了弓形虫RH株酵母双杂交cDNA文库,文库滴度达到4.26×107cfu/mL。以构建的pGBKT7-AMA1c诱饵质粒,使用PEG/LiAc法转化酵母菌株Y2H,利用表型筛选法检测AMA1c的自激活作用并进行酵母双杂交筛选,得到阳性克隆,根据序列比对分析结果,进一步进行共转化验证。结果表明,诱饵蛋白在酵母双杂交系统中具有无毒性和自激活作用,而且通过酵母双杂交筛选共得到13个与AMA1c蛋白相互作用的虫体蛋白。本研究结果为进一步研究AMA1c的功能奠定了基础。
- 程子英高洋王铭郑君贾洪林赵权
- 关键词：弓形虫酵母双杂交自激活
- 弓形虫ATG6基因敲除虫株的构建及其生长特性鉴定被引量：1
- 2017年
- 酵母ATG6蛋白是磷脂酰基醇-3激酶(PI3K)复合物Ⅰ的组成成分,在自噬起始阶段促进自噬小体的形成。为研究弓形虫ATG6同源蛋白(Tg ATG6)生物学功能,本研究首先构建进化树对Tg ATG6基因进行同源性分析,并通过构建稳定表达红色荧光的(ATG6-m Cherry)虫株,以检测Tg ATG6的亚细胞定位情况。通过CRISPR/Cas9技术制备Tg ATG6基因缺失虫株,采用流式细胞术对该虫株的生长特性进行检测。实验结果显示,Tg ATG6基因在进化关系上与植物来源的ATG6同源关系较近。Tg ATG6在虫体内呈弥散分布,经16 h饥饿诱导后,该蛋白在弓形虫体内发生聚集。经序列分析显示,成功获得了两种Tg ATG6基因缺失虫株(ΔTg ATG6-1和ΔTg ATG6-2)。在ΔTg ATG6-2虫株中,Tg ATG6基因开放阅读框的593~612位点之间插入了226 bp外源序列,而在ΔTg ATG6-2中,不能够有效扩增靶序列,表明两种突变虫株的Tg ATG6基因均被有效插入失活。此外,该基因的缺失可能影响了虫株侵入宿主细胞的能力。Tg ATG6基因缺失株的成功制备为进一步研究Tg ATG6蛋白功能奠定了基础。
- 李昭然曹世诺王铭陈运通贾洪林
- 关键词：自噬弓形虫
- 犬新孢子虫T7噬菌体文库的构建及其免疫相关基因的分析
- 新孢子虫病（Neosporosis）,是由专性细胞内寄生的犬新孢子虫（Neospora caninum）感染所引起的疾病。犬新孢子虫属于顶复门（Phylum Apicomplexa）、孢子虫纲（Sporozoasida）...
- 王铭
- 关键词：犬新孢子虫表面蛋白
- 文献传递
- 大庆油田采气分公司员工培训对策研究
- 目前全球经济处于高速发展阶段，我国经济也在逐步走向市场化、国际化，对国有企业的要求也逐步提高。在国有企业逐步趋于市场化的今天，要保持老国有企业的竞争优势、领导地位及企业活力，就更需要重视人力资源的发展。完成培训取决于培训...
- 王铭
- 关键词：竞争优势
- 新孢子虫cDNAT7噬菌体展示文库的构建及筛选被引量：2
- 2014年
- 为筛选犬新孢子虫相关抗原,本研究利用T7噬菌体展示技术构建犬新孢子虫cDNA文库,并利用阳性血清筛选新型犬新孢子虫抗原蛋白。所构建的新孢子虫cDNA文库的原始文库重组克隆数为6×106pfu,扩增后文库滴度为3×1010pfu/mL。分别提取犬新孢子虫免疫小鼠血清和感染小鼠血清中的IgG,并利用纯化的IgG对构建的新孢子虫cDNA文库进行筛选。经过3轮筛选,共鉴定出14个不同的犬新孢子虫基因插入片段。经过分析,有7个基因编码的是功能未知蛋白,其它为蛋白质合成相关蛋白、核苷酸代谢相关蛋白、核糖体蛋白、微线体蛋白、棒状体蛋白和致密颗粒蛋白。对这些蛋白的进一步研究将有助于开发新孢子虫病的诊断试剂和疫苗。
- 王铭高洋程子英郑君贾洪林宋铭忻
- 关键词：新孢子虫病
