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甘琴华: 作品数：19 被引量：48H指数：5; 供职机构：山东出入境检验检疫局更多>>; 发文基金：国家质检总局科技计划项目山东出入境检验检疫局科研项目国家科技支撑计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

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跨境植物病原精准检测体系的建立与应用: 邵秀玲厉艳吴兴海牟海青封立平张京宣孔德英粟智平路延笃甘琴华王英超; 该项目属于农业科学中的植物检疫领域。生物入侵是全球关注的重大问题，中国也深受其害，美国因入侵生物造成经济损失每年达1500亿美元，中国每年损失约2000亿元人民币，约占国民生产总值的1.5%。准确、快速检出高风险植物病...; 关键词：; 关键词：植物病毒植物检疫

木薯细菌性萎蔫病菌的LAMP快速检测方法被引量：8: 2015年; 建立了一种木薯细菌性萎蔫病菌的环介导恒温扩增快速检测方法,为木薯细菌性萎蔫病的快速检测提供有力的技术支持。针对木薯细菌性萎蔫病菌TAL效应器蛋白质(pthBXam)靶序列的6个位点设计4条特异性引物,并对反应温度和内引物浓度等参数进行了优化,设计的引物与试验中提供的其他黄单胞近缘种都没有扩增反应,表现了较好的特异性。LAMP方法对木薯细菌性萎蔫病菌菌株DNA的检测下限为1pg/μL,比常规PCR灵敏度高100倍。该方法采用SYBR Green I染料法对扩增产物闭管检测,裸眼观察颜色变化判断反应结果,能快速、准确地对田间样品进行检测,没有出现假阳性和假阴性。与其他检测方法相比,LAMP方法检测时间短,效率高,降低了设备投入,易于操作,适合木薯细菌性萎蔫病菌的现场检疫和大规模监测。; 封立平李洪林倪新王简纪瑛甘琴华; 关键词：环介导等温扩增

边缘假单胞菌的分离鉴定及其特性被引量：6: 2011年; 边缘假单胞菌Pseudomonas marginalis是假单胞菌科假单胞菌属植物病原细菌,能引发百合软腐病[1]、草莓花疫病、番茄细菌性髓部坏死病[2]、马蹄莲块茎软腐病[3]等,还可引发洋葱、莴苣、中国白菜、大蒜、姜、花椰菜、水稻等软腐病[4]。边缘假单胞菌具有如此广泛的宿主致病性取决于其生理特点,尤其是在0℃生长良好、5℃能大量繁殖等特点[3]。; 甘琴华厉艳邵秀玲王英超; 关键词：假单胞菌属 PSEUDOMONAS 细菌性髓部坏死病植物病原细菌软腐病生理特点

LAMP方法检测豌豆细菌性疫病菌被引量：4: 2013年; 本文应用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)对豌豆细菌性疫病菌的肽相关脂蛋白(oprL)特异性基因进行扩增,采用2对引物识别目的片段的6个特异性区域,60 oC恒温1h完成扩增,设计的引物与假单胞属的近缘菌丁香假单胞菌丁香致病变种、绿黄假单胞菌、丁香假单胞菌大豆致病变种、丁香假单胞菌菜豆致病变种都没有扩增反应,表现了较好的特异性。该LAMP检测方法与普通PCR相比灵敏度高100倍。同时,LAMP技术的检测程序便捷,所需设备简单,其结果可以通过肉眼观察来判断,比常规PCR能更早得到反应结果,因此该技术在该病菌的口岸检疫方面拥有更大的优势。; 封立平尼秀媚厉艳吴兴海纪瑛甘琴华; 关键词：LAMP

玉米细菌性萎蔫病菌环介导恒温扩增(LAMP)快速检测试剂盒及其检测方法: 本发明涉及一种用玉米细菌性萎蔫病菌环介导恒温扩增快速检测试剂盒及其检测方法。该试剂盒内有模板预处理反应液、恒温扩增反应液Ⅰ。检测玉米细菌性萎蔫病菌的方法包括细菌DNA的提取、模板预处理、LAMP恒温扩增、核酸检测。其优点...; 封立平尼秀媚陈长法倪新厉艳纪瑛王英超吴兴海甘琴华

基于gpd基因的大蒜黑腐病菌实时荧光定量PCR鉴定技术被引量：5: 2015年; 【目的】大蒜黑腐病菌(Embellisia allii(Campanile)Simmons)的检疫鉴定主要采用形态鉴定方法。不仅耗时长,而且大蒜黑腐病菌与本属其他种以及其他属的分生孢子非常相似,极难分辨,需要建立快速、有效的分子诊断方法。研究旨在建立实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,q PCR)体系以准确、灵敏地鉴定大蒜黑腐病菌。【方法】从NCBI的Gen Bank数据库中,选取大蒜黑腐病菌和其他大蒜病害以及近似种的3-磷酸甘油脱氢酶(gpd)基因核酸序列数据15种,应用引物设计软件Primer express,根据探针设计原则从理论上选出1条探针和3对引物。根据试验结果对上述引物进行筛选,筛选出能够鉴定出大蒜黑腐病菌的特异性引物对和Taq Man探针。同时对反应体系中复性-延伸温度的反应参数进行优化,设计56、58、60℃3个温度梯度;将大蒜黑腐病菌基因组DNA在紫外核酸分析仪上进行定量后进行10倍的梯度稀释,对探针灵敏性进行测试,从而建立大蒜黑腐病菌Taq Man水解探针法q PCR检测体系。【结果】从基于Gen Bank上的15种gpd基因核酸序列设计的引物和探针中,筛选出能够鉴定大蒜黑腐病菌的特异性引物对Emb21/Emb32和Taq Man探针Emb。在供试的6种菌株中,只有靶标菌大蒜黑腐病菌利用该引物对和探针能够被特异性的检测到阳性,空白对照和其他参试菌均没有荧光信号的增加,检测为阴性。复性-延伸温度反应参数优化中,△Rn荧光信号增加值在58℃时达最大,56、60℃荧光信号增加值降低,经过多次重复试验,确定最佳的复性-延伸温度为58℃。灵敏度测试中,大蒜黑腐病菌DNA浓度稀释到140 pg时,所得的图形较好;当体系中模板浓度稀释到14 pg时,所得的图形较差。最终DNA检测灵敏度为140 pg。应用该引物和探针建立的q PCR检测方法能够从供试的菌株中特异性地检出大蒜黑腐病菌。【结论】建立了大蒜黑腐病菌Taq M; 王英超甘琴华厉艳纪瑛吴兴海邵秀玲; 关键词：3-磷酸甘油脱氢酶基因实时荧光定量PCR

玉米细菌性萎蔫病菌环介导恒温扩增(LAMP)快速检测试剂盒及其检测方法: 本发明涉及一种用玉米细菌性萎蔫病菌环介导恒温扩增快速检测试剂盒及其检测方法。该试剂盒内有模板预处理反应液、恒温扩增反应液Ⅰ。检测玉米细菌性萎蔫病菌的方法包括细菌DNA的提取、模板预处理、LAMP恒温扩增、核酸检测。其优点...; 封立平尼秀媚陈长法倪新厉艳纪瑛王英超吴兴海甘琴华; 文献传递

入境马蹄莲细菌性软腐病菌的分离鉴定被引量：5: 2014年; 目的在参展青岛世界园艺博览会的荷兰进口马蹄莲植株上,发现叶片有明显褐色软腐症状,为明确引起马蹄莲软腐病的病原,对叶片进行病菌的分离鉴定。方法采用组织分离法,从荷兰入境马蹄莲植株的病变叶片中分离纯化到2株致病性细菌菌株(MTL1、MTL2),对该菌株进行鉴定和生物学特性研究。结果形态及培养特征、生理生化特性的研究结果表明该菌株在NA培养基上能形成白色圆形单菌落,薄而平滑、边缘整齐,光滑不透明,KB培养基上划线培养后可产生明显的绿色的荧光。显微镜下菌体呈杆状,具多根极生鞭毛,革兰氏阴性菌。结论经形态鉴定、培养特征、生理生化及16S r DNA序列分析和致病性测定实验,确认引起马蹄莲细菌性软腐病的病原为边缘假单胞菌(Pseudomonas marginalis)。; 厉艳魏晓棠甘琴华纪瑛邵秀玲王英超; 关键词：马蹄莲细菌性软腐病病原鉴定

进境韩国大花蕙兰上唐菖蒲伯克氏菌的分离鉴定及生物学研究: 2014年; 大花蕙兰（Cymbidium hybridum），又名虎头兰、喜姆比兰，兰科、兰属多年生草本植物，是近几年我国花卉市场上流行的高档室内盆栽花卉。大花蕙兰的杂交育种已有一百多年的历史，每年新增加的品种有几十种之多。近年来，我国检验检疫部门分别从各入境口岸的进境大花蕙兰中多次发现携带有菊基腐病菌（Erwinia chrysanthemi）、兰花细菌性褐腐病菌（Erwinia cypripedii）、建兰花叶病毒（Cymbidium mosaic virus）等多种病原生物，均有潜伏期长、发病率高等特点。入境大花蕙兰种苗携带植物病原细菌、病毒等有害生物隐蔽性强、风险较高。; 厉艳甘琴华封立平邵秀岭; 关键词：大花蕙兰进境生物学唐菖蒲建兰花叶病毒

用于检测啤酒花矮化类病毒的NASBA扩增引物、试剂盒和检测方法: 本发明公开了一种检测啤酒花矮化类病毒的NASBA扩增引物、试剂盒和检测方法，其上游引物、下游引物的序列分别为SEQ ID NO:1～2，试剂盒包括NASBA扩增反应液A和NASBA扩增反应液B；检测方法包括：1）样品RN...; 吴兴海张成标魏晓棠甘琴华张京宣邵秀玲历艳尼秀媚; 文献传递

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