程晓亮
- 作品数：8 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华南农业大学兽医学院农业部动物疫病防控重点开放实验室更多>>
- 发文基金：广东省博士启动基金国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 杆状病毒双表达载体流感疫苗诱导H9N2亚型禽流感病毒致死性攻击的BALB/c小鼠获得完全保护
- H9N2亚型禽流感病毒在禽类中广泛流行,虽然它的致病性比较温和,却能引起鸡、鹌鹑、火鸡、鸭、鹅、野鸡、鹧鸪和鸽等禽类发病,甚至传染给包括人在内的哺乳动物。因此,迫切需要研制一种高效新型的疫苗来预防H9N2亚型禽流感。以杆...
- 林文耀樊惠英程晓亮叶昱陈筱薇廖明
- 关键词：HA基因
- 表面展示鸡传染性支气管炎病毒M41株S1蛋白的重组假型杆状病毒的构建
- 2012年
- 以鸡传染性支气管炎病毒M41毒株基因序列为模板,利用PCR方法扩增膜定位信号缺失的S1基因(dS1),将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1中,再次将S1及gp64的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒pFastBacTMDual,得到重组质粒pFastBac-gp64-dS1.将该重组质粒转化到DH10Bac感受态细胞中,获得重组穿梭载体Bacmid-gp64-dS1,提取重组Bacmid质粒,以PCR验证其正确性.将阳性重组Bacmid质粒利用脂质体转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BV-dS1.间接免疫荧光试验表明,该重组杆状病毒可以Sf9昆虫细胞膜表达鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白.
- 陈筱薇樊惠英林文耀程晓亮叶昱陈春丽廖明
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒M41S1蛋白重组杆状病毒
- 两广地区带犊母牛体系建立之浅谈
- 2010年
- 带犊母牛体系的建立在肉牛产业链中具有非常重要的意义。本文就该体系中种牛的选育、母牛产犊率和犊牛断奶体重的主要管理作一简单概述。
- 王文佳师志海程晓亮高豪王林
- 关键词：选育产犊率
- 表面展示猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组杆状病毒的构建
- 2011年
- 利用PCR方法扩增猪圆环病毒2型核定位信号区缺失的Cap蛋白基因,将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1的gp64信号肽和gp64成熟蛋白之间.将此融合片段亚克隆到质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA3.1-gp64-dCap.然后将含有CMV启动子,gp64及dCap的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒pFastBac-V,得到重组质粒pFastBac-dCap-V.然后将此转化DH10Bac感受态细胞,获得的重组穿梭质粒Bacmid-dCap-V,经脂质体转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒Ac-dCap-V.该重组病毒感染Sf9细胞后可以产生典型的细胞病变,转导哺乳动物细胞后经间接免疫荧光试验证明,该重组杆状病毒成功转导哺乳动物细胞并表达dCap蛋白.
- 程晓亮林文耀叶煜陈筱薇严常燕廖明樊惠英
- 关键词：猪圆环病毒2型
- 对不同表达系统的猪圆环病毒2型Rep蛋白的电泳特性分析被引量：1
- 2010年
- 利用特异性引物从圆环病毒2型(PCV2)毒株克隆出Rep基因,并将其插入到原核表达载体pET28 a和杆状病毒转移载体pFastbacHT(B)上,利用大肠杆菌BL21(DE3)株原核系统以及Bac-to-Bac杆状病毒系统表达Rep蛋白.Western-blotting表明,原核和真核表达系统均能表达出圆环病毒2型Rep蛋白,电泳分析表明,不同系统表达得到的Rep蛋白有不同的电泳特性,揭示Rep蛋白存在翻译后修饰.
- 张停婷程晓亮林文耀陈筱薇张桂红廖明樊惠英
- 关键词：圆环病毒2型REP蛋白真核表达杆状病毒表达系统
- 双表达H9N2禽流感病毒HA基因的假型重组杆状病毒系统的构建
- 2011年
- 以含有H9N2禽流感病毒HA基因的重组质粒pMD18-H9HA为模板,扩增HA基因,将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1中,再次将含有H9HA及gp64的基因片段克隆到质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA-H9-HA.然后将含有CMV启动子、H9HA及gp64的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒pFastBac-G,得到重组质粒pFastBac-G-H9-HA.将该重组质粒转化到DH10Bac感受态细胞中,得到重组穿梭载体Bacm id-G-H9-HA.利用脂质体转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BV-Dual-H9-HA.间接免疫荧光实验表明,该重组杆状病毒可以转导哺乳动物细胞并表达HA蛋白.免疫电镜观察结果表明,HA蛋白可以在该重组杆状病毒表面展示.
- 林文耀樊惠英程晓亮陈筱薇叶煜廖明
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型HA基因
- 杆状病毒双表达载体在禽流感疫苗研究中的应用
- 本研究旨在应用杆状病毒表达系统为载体，构建了H9N2亚型禽流感杆状病毒双表达载体疫苗。此种疫苗的特点是：一方面可以在杆状病毒表面展示禽流感的HA蛋白，另一方面杆状病毒基因组中所携带的HA基因也通过转导的作用，使其在动物细...
- 林文耀张杰程晓亮叶昱陈筱薇樊惠英廖明
- 关键词：禽流感疫苗研制杆状病毒HA蛋白
- 表达鸡传染性支气管病毒S1蛋白的重组假型杆状病毒的构建被引量：2
- 2010年
- 根据鸡传染性支气管炎病毒M41株的基因序列(GenBank:AY851295.1),设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增其S1基因,并将扩增产物克隆到杆状病毒转移质粒pFast-VSV-G-CMV中,获得重组质粒pFast-VSV-G-CMV-S1,进一步将该重组质粒转化到DH10Bac感受态细胞中,得到重组穿梭载体Bacm id-CMV-S1,再利用脂质体转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒Ac-V-S1.间接免疫荧光试验表明,该重组杆状病毒可以转导哺乳动物细胞并表达S1蛋白.
- 罗琼樊惠英罗开健林文耀程晓亮任涛廖明
- 关键词：鸡传染性支气管炎S1基因
