简清
- 作品数：71 被引量：573H指数：14
- 供职机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家科技基础条件平台建设计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学文化科学自动化与计算机技术更多>>
- 食物供应量对转红色荧光蛋白基因唐鱼生存和生长的影响被引量：5
- 2011年
- 选取雄性杂合子转红色荧光蛋白基因唐鱼(Tanichthys albonubes)(简称:转基因唐鱼)与雌性非转基因唐鱼交配产卵,出膜7 d后,在水温(25.0±2.0)℃条件下,选择健康仔鱼进行饱食(食物供应量高)、半饥饿(食物供应量中)和饥饿(食物供应量低)3种处理,结果显示:(1)出膜后7～72 d的唐鱼饱食组与半饥饿组死亡率无显著差异(P>0.05),但饥饿组唐鱼死亡率均显著高于饱食组和半饥饿组(P<0.01),表明食物供应量影响唐鱼的生存能力;(2)红色荧光蛋白基因在唐鱼体内表达,肉眼观察,最早出现在出膜后第30天。在出膜后的72 d,对3个处理组中没有表达红色荧光蛋白的唐鱼进行PCR验证,均没检测到沉默表达个体,此时3个处理组转基因唐鱼与非转基因唐鱼数量比均接近1∶1,符合经典的孟德尔单显性基因遗传模式,说明食物供应量多寡对转基因唐鱼与非转基因唐鱼生存影响效应是一致的;(3)出膜后28、42、57和72 d,对3个不同处理组的唐鱼幼鱼体长进行比较,结果均是饱食组>半饥饿组>饥饿组,且组间差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01)。而对72 d唐鱼幼鱼3个处理组内转基因唐鱼和非转基因唐鱼体长进行统计分析表明,3个处理组内转基因唐鱼和非转基因唐鱼体长差异均不显著(P>0.05),表明食物供应量多寡对转基因唐鱼与非转基因唐鱼生长影响效应也是一致的。综上所述,食物供应量对唐鱼生存和生长是有影响的,但对转基因唐鱼和非转基因唐鱼影响效应是一致的,可见转基因唐鱼在食物供应量缺乏条件下并没有生存竞争优势。
- 樊佳佳白俊杰简清叶星
- 关键词：适合度死亡率
- 牙鲆干扰素调节因子核心区序列的克隆及初步表达被引量：4
- 2001年
- 采用逆转录—聚合酶链式反应 (RT -PCR)方法 ,从牙鲆 (Paralichthysolivaceus)肝脏总RNA中扩增出干扰素调节因子 (fIRF)的核心区序列。定向插入质粒 pUC18,克隆的牙鲆IRFcDNA序列分析表明 ,与Yabu报道的牙鲆IRFcDNA相比有 1个碱基差异 ,但与推断的氨基酸序列完全一致。将牙鲆IRF的核心区序列cDNA定向插入原核表达载体 pBV2 2 0 ,构建成牙鲆IRF表达载体pBVfIRF2 2。SDS -PAGE分析表明 ,经 4 2℃诱导 ,含 pBVfIRF2 2质粒的大肠杆菌可表达一分子量约 12 0 0 0的特异蛋白。
- 张跃白俊杰李英华叶星简清李新辉罗建仁
- 关键词：牙鲆干扰素调节因子核心区分子克隆原核表达转录因子
- 鲤生长激素酵母工程菌的分泌表达和产物纯化被引量：1
- 2002年
- 取本室构建的鲤生长激素毕赤酵母工程菌GS115 (pPICZαA -GH) ,甲醇诱导 ,SDS -PAGE检测 ,证明重组鲤生长激素 (RecombinantCarpGrowthHormone ,rcGH)在酵母中得到分泌表达。重组酵母菌生长曲线显示 ,细胞从培养第 8小时进入对数生长期 ,至 32hOD660 升至峰值 11.5 ,此后OD660 缓慢下降。在以 10 0 %甲醛按 0 .5 %添加量诱导至 72h、pH为 6 .0时 ,rcGH表达量最高。凝胶扫描分析 ,分泌表达的rcGH占上清总蛋白的 36 .4 1% ,表达量为 30 0～ 4 0 0mg/L发酵液。经离子交换层析法纯化表达产物 ,纯度可达 95 %。纯化的rcGH注射奥尼罗非鱼 。
- 李英华白俊杰简清叶星李新辉罗建仁梁旭方
- 关键词：生长激素分泌表达产物纯化
- 剑尾鱼线粒体细胞色素b基因的序列分析被引量：21
- 2002年
- 目的 克隆和测定剑尾鱼 (Xiphophorushelleri)线粒体细胞色素b基因 (cytb)的全序列。方法 提取剑尾鱼肝脏的总DNA。设计合成特异引物进行PCR扩增。扩增产物经琼脂糖电泳检测、纯化后克隆到pGEM Teasyvectorsystem中的T载体上 ,筛选转化子 ,提取质粒 ,酶切鉴定。挑取重组质粒pGEM T xhcytb 11进行序列测定。结果 获得了剑尾鱼线粒体cytb基因的全序列 ,共 114 0bp。结论 用BLAST与GenBank中的线粒体DNA序列进行比较 ,显示剑尾鱼与其他鱼类的cytb基因具有较高的同源性 ;根据剑尾鱼与其他 13种鱼的cytb基因序列同源性所建立的进化树 。
- 叶星白俊杰劳海华简清吴淑勤
- 关键词：剑尾鱼线粒体细胞色素B基因
- 鳜传染性脾肾坏死病毒主要衣壳蛋白基因的原核表达被引量：8
- 2004年
- 根据鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus, ISKNV)主要衣壳蛋白(Major Capsid protein, MCP)基因(mcp)序列设计引物,PCR扩增得到一长约1400bp的DNA片段, 将其克隆到pGEM-T Easy Vector。氨基酸亲水性分析表明,在150-250位氨基酸之间亲水性很高,可构成主要抗原决定簇及形成跨膜区。mcp基因经PCR改造后克隆至原核表达载体pBV220,构建表达MCP的大肠杆菌基因工程菌,该工程菌经42℃诱导,SDS-PAGE检测,在约50kDa处有一特异蛋白带,含量约为菌体总蛋白的23%。用纯化和复性后的蛋白免疫新西兰大白兔制备抗血清,Western-blotting分析显示,重组MCP制备的抗血清能与ISKNV MCP特异结合,说明表达产物具有与ISKNV MCP相似的抗原特性。
- 张敏白俊杰劳海华叶星简清罗建仁
- 关键词：衣壳蛋白原核表达免疫印迹DNA片段克隆
- 盘丽鱼属鱼类线粒体DNA细胞色素b基因序列和亲缘关系分析被引量：2
- 2005年
- 通过测定盘丽鱼属鱼类绿盘丽鱼(S.aequifasciataaequifasciata)、褐盘丽鱼(S.aequifasciataaxelrodi)和盘丽鱼(S.discus)线粒体DNA细胞色素b(mtDNAcytb)基因全序列,结合对GenBank中蓝盘丽鱼(S.aequifasciataharaldi)该序列的比较分析,共检测到23个变异位点,占全序列的2.02%,其中22个为转换,1个为颠换,碱基替换多发生在密码子的第三位点。盘丽鱼与其它3种盘丽鱼属鱼类的遗传距离在0.005～0.01之间,而绿盘丽鱼、褐盘丽鱼和蓝盘丽鱼彼此间的遗传距离在0.012～0.014之间,由此推测盘丽鱼似还没有分化到种的水平;本文还在绿盘丽鱼、褐盘丽鱼、蓝盘丽鱼和盘丽鱼4种盘丽鱼属鱼类的cytb基因比较分析的基础上构建了系统进化树。
- 张静白俊杰叶星劳海华简清罗建仁
- 关键词：细胞色素B亲缘关系
- 罗氏沼虾木糖葡萄球菌Xia-5#菌株的分类鉴定被引量：2
- 2004年
- Xia-5#菌株是从患肌肉白浊病的罗氏沼虾虾苗病灶分离列的1株有致病力的菌株，经形态学观察、生理生化特性分析和16S rRNA序列测定分析对其进行分类鉴定，其主要特性为：革兰氏阳性拟球菌，无鞭毛，无荚膜，不产生芽孢，发酵葡萄糖、果糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、阿拉伯糖、核糖、蔗糖及甘露醇产酸，β-半乳糖苷酶、过氧化氧酶及脲酶阳性，氧化酶、血浆凝固酶、V—P反应、精氨酸双水解酶均为阴性，对新生霉素具有抗性；菌株的16S rRNA序列分析结果表明：Xia-5#菌株与葡糖球菌属的菌株聚为一类，而与链球菌属的菌株距离较远，与已登录的木糖葡萄球菌16S rRNA序列的相似性大干99％，只在其中的3个核苷酸位置上存在差异；综合两方面的分类鉴定结果，将Xia-5#菌株归类鉴定为葡萄球菌属的木糖葡萄球菌(Staphylococus xylosus)。
- 姜兰劳海华简清白俊杰邹为民李凯彬
- 关键词：罗氏沼虾木糖葡萄球菌生理生化特性RRNA序列
- 锦鲤疱疹病毒主要囊膜蛋白基因的PCR扩增与序列分析被引量：13
- 2008年
- 为了进一步研究锦鲤疱疹病毒主要囊膜蛋白(KHV-MEP)的功能及锦鲤疱疹病毒(KHV)的感染机制,根据KHV-MEP基因序列设计并合成1对引物,从自然感染KHV发病的锦鲤(Cyprinus carpio Koi)肝组织总DNA中扩增获得特异性基因片段。将所得基因片段克隆到pMD18-T Simple Vector载体中,获得重组质粒T-KMEP;酶切鉴定后进行序列测定,并采用氨基酸亲水性分析软件TMpred对其编码氨基酸序列进行分析;在对该片段所编码氨基酸可能抗原位点分析的基础上,进行PCR改造构建原核表达载体,获得重组表达载体pBV-KMEP1和pBV-KMEP2。所获得的基因片段大小为771bp,该基因片段与GenBank中已登录的KHV-MEP基因(AB178537)的同源性为100%,是一个完整的开放阅读框,所编码的蛋白由256个氨基酸组成,分子量为28.2kD,等电点(PI)为8.65。该序列含有4个跨膜区,可构成主要抗原决定簇。结果显示所获得的目的基因片段就是锦鲤主要囊膜蛋白全基因。
- 谭爱萍邹为民赵飞姜兰陈信廉劳海华简清陆小萏罗理
- 关键词：锦鲤疱疹病毒原核表达载体
- 斑马鱼MyoD基因部分序列的克隆与分析
- 从受精后22h的斑马鱼胚胎中提取总RNA,采用RT—PCR克隆斑马鱼MyoD基因,获得长度约1346bp的目的片段,测序结果表明,该片段含有斑马鱼MyoD基因完整的3’末端,距5’端的起始密码子还有78个碱基,与基因库中...
- 王立新白俊杰陈宏罗建仁叶星简清劳海华
- 关键词：斑马鱼克隆
- 文献传递
- 重组虹鳟生长激素酵母对罗非鱼的促生长作用研究被引量：12
- 2001年
- 采用表达重组虹鳟生长激素的酵母工程菌Y33作为饲料添加剂投喂奥尼罗非鱼鱼种。结果表明 ,酵母胞内表达的虹鳟生长激素具有生物活性 ,能够经口服被鱼体肠道吸收 。
- 马进白俊杰简清李新辉罗建仁
- 关键词：虹鳟生长激素罗非鱼促生长作用基因重组
