罗小林
- 作品数：8 被引量：27H指数：3
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- 小凹蛋白-1和细胞外钙敏感受体在人脐静脉内皮细胞小凹共定位研究被引量：1
- 2011年
- 前期研究发现小凹蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)和细胞外钙敏感受体(extracellular Ca2+-sensing receptor,CaR)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)膜上有共定位,且Cav-1下调CaR介导的钙内流。本实验探讨HUVECs中Cav-1与CaR的亚细胞定位,可为进一步机制研究提供理论依据。以3~4代HU-VECs随机分为2组:(1)对照组;(2)甲基-β-环糊精(MβCD)处理组,分别采用蔗糖密度梯度离心和Western blot技术提取含小凹膜碎片和检测Cav-1和CaR蛋白的表达。结果显示,(1)MβCD处理组HUVECs细胞中Cav-1和CaR蛋白的表达与对照组相比无差异(P>0.05)。(2)MβCD处理组小凹区Cav-1和CaR蛋白的表达低于对照组(P<0.05)。由此可知,Cav-1和CaR蛋白共定位于HUVECs的小凹区,MβCD可抑制两者在小凹的共定位。
- 龚艳胡清华钟华梁霄罗小林何芳
- 关键词：小凹蛋白-1
- 小凹蛋白1上调人脐静脉内皮细胞钙敏感受体介导一氧化氮合酶激活的机制被引量：3
- 2013年
- 目的探讨小凹蛋白1(Cav-1)上调人脐静脉内皮细胞钙敏感受体介导内皮型一氧化氮合酶(eNOS)激活的作用机制。方法培养人脐静脉内皮细胞,取同代细胞随机分为:(1)对照组;(2)钙敏感受体激动剂精胺(2.0 mmol/L)+Ca2+组;(3)Caveolae结构破坏剂(Filipin,1.5 mg/L)+精胺+Ca2+组;(4)Cav-1 ShRNA+精胺+Ca2+组;(5)空质粒+精胺+Ca2+组;(6)Filipin不同浓度(1.5、2.0、2.5 mg/L)组。免疫印迹检测人脐静脉内皮细胞中eNOS和磷酸化eNOS(p-eNOS)、Cav-1以及eNOS膜蛋白表达;免疫荧光和免疫共沉淀技术检测Cav-1和eNOS表达、共定位以及相互作用。结果不同浓度Filipin不影响eNOS和p-eNOS蛋白表达(P>0.05);精胺作用下细胞内p-eNOS表达增加(P<0.05),此作用可被Filipin(1.5 mg/L)或Cav-1基因沉默完全阻断(P<0.05);Fili-pin(1.5 mg/L)或Cav-1干扰处理后,eNOS的膜蛋白表达减少(P<0.05),eNOS的蛋白表达无变化(P>0.05);免疫荧光双标显示Filipin(1.5 mg/L)或Cav-1基因沉默后eNOS在小凹定位减少,核周边局部区域聚集增多。与对照组和精胺+Ca2+组比较,Cav-1 ShRNA处理组Cav-1和eNOS相互作用减弱(P<0.05),其他处理组间的相互作用无统计学意义(P>0.05)。结论人脐静脉内皮细胞中Cav-1上调钙敏感受体介导eNOS激活作用机制可能与Cav-1影响eNOS质膜定位及抑制eNOS向细胞器转位有关。
- 罗小林钟华梁霄王振焕龚艳邓峰美孙志萍何芳
- 关键词：小凹蛋白1内皮型一氧化氮合酶钙敏感受体人脐静脉内皮细胞
- Filipin对人脐静脉内皮细胞小凹蛋白-1作用的研究被引量：1
- 2012年
- 为探讨filipin对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中小凹蛋白-1(Cav-1)的亚细胞定位影响,为进一步研究Cav-1作用机制提供理论依据。培养2～4代HUVECs随机分为:对照组;filipin处理组;采用Na_2CO_3蔗糖密度梯度离心法提取HUVECs中含caveolae的膜碎片,Western blot技术鉴定Caveolae和检测Cav-1蛋白表达。结果显示,与Control组比较,filipin处理组caveolae区Cav-1表达减弱(P<0.05)。由此可知,Cav-1富集于HUVECs的caveolae,filipin可抑制Cav-1在小凹的表达。
- 罗小林梁霄赵慧王静吴玲玲钟华何芳
- 关键词：小凹蛋白-1人脐静脉内皮细胞
- 小干扰RNA沉默细胞外钙敏感受体抑制人脐静脉内皮细胞钙内流和NO生成被引量：13
- 2012年
- 为了探讨细胞外钙敏感受体(extracellular Ca^(2+)-sensing receptor, CaR)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cells, HUVEC)介导钙内流和NO生成中的作用,本实验针对GenBank中人CaR的cDNA序列设计合成小干扰RNA(small interference RNA, siRNA),并将其转染入HUVEC中,采用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果,Western blot检测CaR蛋白表达及转染后的干扰效率,Fura-2/AM负载检测细胞内Ca^(2+)浓度(intracellular Ca^(2+)concentration, [Ca^(2+)]i)变化,NO荧光探针DAF-FM DA负载检测细胞内NO的生成及内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)活性。结果显示,实验成功将CaR siRNA转入HUVEC,Western blot 检测结果显示转染48 h后,CaR蛋白表达降低(P < 0.05);与未转染对照组和阴性对照组相比,在精胺 + Ca^(2+)刺激下,CaR siRNA转染组的[Ca^(2+)]i、eNOS活性和NO含量均显著降低(P < 0.05)。上述结果表明,CaR在精胺介导的HUVEC Ca^(2+)内流和NO生成中发挥重要作用。
- 梁霄罗小林钟华胡清华何芳
- 关键词：内皮细胞钙敏感受体钙信号
- 缝隙连接在同型半胱氨酸介导的高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用被引量：7
- 2011年
- 为探讨缝隙连接在同型半胱氨酸(Hcy)介导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中的作用。取大鼠胸主动脉,采用组织贴块法进行原代培养,取3～5代细胞。分别采用不同浓度的Hcy(0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.5mmol/L)作用24h,用MTT法测定各组吸光值(A值),确定Hcy的作用浓度。取生长正常的细胞,分为4组:对照组(自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞组);不同干预组(均与自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞孵育):Hcy各浓度组;缝隙连接阻断剂(18α-GA)组;Hcy+18α-GA组;继续培养24h,用MTT法测细胞的增殖活性。结果显示:与对照组比较,0.025mmol/L及0.05mmol/L的Hcy浓度刺激下A值增大(P<0.05);缝隙连接阻断剂组A值降低。与Hcy组相比,Hcy+缝隙连接阻断剂组A值降低(P<0.05)。由此可知,缝隙连接可能参与了Hcy介导的高血压血管平滑肌细胞增殖。
- 王恩帮钟华罗小林梁霄邓峰美司军强何芳
- 关键词：同型半胱氨酸血管平滑肌细胞增殖
- 小凹蛋白-1上调人脐静脉内皮细胞CaR介导NO生成机制的研究
- 目的:探讨小凹蛋白-1(Cav-1)上调人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(CaR)介导一氧化氮(NO)生成的作用机制。方法:培养HUVECs,取同代细胞随机分为:对照组;CaR激动剂(精胺)组;小凹(caveo...
- 罗小林钟华吴玲玲梁霄赵慧王静邓峰美何芳
- 关键词：人脐静脉内皮细胞小凹蛋白CAR
- 小凹蛋白-1调节细胞外钙敏感受体介导NO生成的作用机制
- 目的：1探讨小凹蛋白-1(Cav-1)上调人脐静脉内皮细胞(HUVEC)钙敏感受体(CaR)介导一氧化氮(NO)生成的作用机制。 方法：(1)胰蛋白酶消化法原代培养HUVEC，倒置显微镜下进行细胞形态学观察及免疫细胞化...
- 罗小林
- 关键词：小凹蛋白-1脐静脉内皮细胞钙敏感受体一氧化氮
- 文献传递
- STIM1及其相关蛋白在脂筏介导的细胞内钙信号中的作用机制被引量：2
- 2011年
- 脂筏是膜脂双层内富含特殊脂质(胆固醇和鞘脂)和蛋白质的微区,脂筏作为独特的信号转导平台不仅可以为内部分子提供一个"交流"的环境,也有助于加快信号传递。Ca2+作为重要的信号分子,参与调控细胞许多生理功能。细胞内Ca2+浓度受各种信号分子,钙泵和钙池操纵的Ca2+内流等多种因素调节。最新研究发现:瞬时受体电位通道的一些成员、基质相互作用分子1以及Orai1在钙池操纵的钙通道介导的Ca2+内流过程中发挥着重要的作用。大量Ca2+通道和蛋白质(包括钙信号途径的关键蛋白)在脂筏微区集聚,脂筏功能越来越受到人们的关注。
- 罗小林何芳
- 关键词：脂筏
