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油脂工业酶制剂生产关键技术及其产业化应用: 林影王耀辉李小林汪勇潘力罗文华欧仕益韩双艳张广文孙晓燕王斌肖礼光蔡钰琪宋康乐黄碧莲梁书利; 项目实施过程中形成的关键技术与技术创新：建立了基于酵母展示技术的高通量酶分子筛选：基于酵母展示技术构建了酶定向进化与催化耦联化的技术平台，应用于南极假丝酵母脂肪酶和米黑根毛霉脂肪酶耐热稳定性的改造，通过脂肪酶的分子改造获...; 关键词：; 关键词：酶制剂脂肪酶发酵生产油脂精炼

豆豉纤溶酶在枯草杆菌WB800中的高水平表达(英文)被引量：13: 2007年; 一个来源于豆豉产生菌DC12的新的纤溶酶基因序列被克隆测序.为了实现在枯草杆菌中高水平表达豆豉纤溶酶,将来源于枯草杆菌168的重叠启动子P43序列以及转录终止信号序列通过重叠延伸融合,将融合序列克隆到大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE3中,构建了pBEP43载体.将豆豉纤溶酶基因插入到载体pBEP43后转化枯草杆菌WB800.结果表明,在P43启动子驱动下,豆豉纤溶酶基因在重组菌中的对数生长期和平衡期均获得了表达且分泌到培养基中.重组菌经培养后上清液中的纤溶酶活性最高达1270U/mL,是豆豉纤溶酶基因在自身启动子驱动下表达量的1.87倍和野生菌株枯草杆菌DC12表达量的4.1倍.; 罗文华郭勇韩双艳; 关键词：豆豉纤溶酶枯草杆菌重叠PCR 基因表达

食品纤溶酶研究进展被引量：15: 2006年; 溶栓疗法是血栓性疾病安全有效的治疗手段,开发安全高效、廉价的新型纤溶酶对于预防与治疗血栓性疾病具有重要意义。近年来,在日本纳豆、韩国大豆酱、中国豆豉、发酵虾酱等许多亚洲传统发酵食品中均发现有丰富的纤溶酶资源,这些食品微生物分泌的纤溶酶安全、高效,是潜在的溶栓剂。重点介绍传统发酵食品中发现的纤溶酶的理化性质、溶栓特性及其潜在应用。; 罗文华郭勇; 关键词：纤溶酶发酵食品豆豉纤溶酶

枯草杆菌纤溶酶基因的克隆及表达被引量：10: 2007年; 为了提高豆豉纤溶酶(DFE)的表达产量,采用PCR方法从高纤溶活性的枯草芽孢杆菌DC12的基因组中扩增获得DFE基因,将含有启动子至3非翻译区的全长1400 bp基因插入大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE3,构建了DFE基因的表达质粒,化学转化枯草杆菌WB800获得了DFE的重组表达菌.试验结果表明:DFE基因在自身启动子驱动下,在蛋白酶缺陷型的枯草杆菌中获得了高活性的分泌表达;重组表达菌株培养30 h后,培养物上清液中的纤溶酶活性最高可达690U/mL.; 罗文华郭勇韩双艳; 关键词：豆豉纤溶酶枯草杆菌基因克隆

豆豉纤溶酶基因的克隆、高效表达和定点突变研究: 来自豆豉的纤溶酶具有溶栓效果好、安全及廉价等优点，是潜在的新一代溶栓药物。从分子水平上开展豆豉纤溶酶(Douchi Fibrinolytic Enzyme，DFE)的研究，可利用基因工程技术大量生产制备豆豉纤溶酶，还可对...; 罗文华; 关键词：豆豉纤溶酶纤溶酶活性酶基因枯草杆菌序列同源性纤维蛋白; 文献传递

定点突变提高豆豉纤溶酶的酶活力和底物特异性的研究被引量：6: 2008年; 以pBE—DFE质粒为模板,采用反向长距离PCR技术对豆豉纤溶酶(Douchi Fibrinolytic Enzyme,DFE)基因进行定点突变,使位于酶的底物结合区第156位的谷氨酸和第166位的甘氨酸分别替换为丝氨酸和丙氨酸,使临近酶的底物结合区的第169位甘氨酸残基替换为丙氨酸,获得了三个突变体E156S,G166A和G169A.将含突变基因的表达载体转化枯草杆菌WB800,构建了豆豉纤溶酶基因突变体的表达菌株WB800(E156S);WB800(G166A)和WB800(G166A).将3种表达菌株进行液体发酵培养,结果发现发酵上清液中纤溶酶的纤溶活性为460,790和900U/mL,分别是未突变酶活性(660U/mL)的70%,115%和136%;3种突变酶对合成底物的H-D-Val-Leu-Lys-pNA的酰胺水解活性是未突变酶的17%,125%和121%.; 崔堂兵郭勇罗文华舒薇; 关键词：豆豉纤溶酶定点突变酶活力特异性

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罗文华