胡秋炅
- 作品数：7 被引量：7H指数：2
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- PPV SC-1株VP2蛋白Cys-402、214的定点突变及其对PPV VLPs影响的初步研究
- 本研究以PPVVP2为基础，通过定点突变的方法研究了Cys在VLPs高级结构和免疫原性中的作用，旨在寻找利于外源基因插入的位点，为以PPVVLPs为基础的多价疫苗和抗原转运系统的研究提供理论基础。方法：根据GenBank...
- 胡秋炅
- 关键词：定点突变多价疫苗重叠延伸PCRVLPS
- 文献传递
- PPVSC-1株VP2基因的定点突变及真核表达载体的构建
- 2008年
- 以PPV VP2为基础,利用重叠延伸PCR技术分别将VP2蛋白中第402位(A)和214位(B)的半胱氨酸突变为精氨酸,并将突变体克隆入pMD19-T Simple载体中;经酶切、PCR和测序鉴定后,利用KpnⅠ和BamHⅠ酶切位点,定向克隆入真核表达载体pPI-2.EGFP中,构建突变体与报告基因EGFP融合表达的pPI-2.EGFP.VP2(A)和pPI-2.EGFP.VP2(B)真核表达载体;利用脂质体法将重组质粒分别转染COS-7细胞。结果:成功构建了突变体的真核表达载体;在转染后的荧光观察中发现,pPI-2.EGFP.VP2(A)和pPI-2.EGFP.VP2(B)质粒转染细胞后,两者表达后的荧光信号不同,A样品的荧光呈颗粒状分布于细胞中,而B样品的荧光信号均匀分布于细胞中。提示,突变是引起表达差异的主要原因。
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- 关键词：猪细小病毒VP2定点突变
- PPV SC-1株VP2蛋白Cys-402、214的定点突变对VLPs的影响
- 2010年
- 以PPVVP2为基础,定点突变VP2蛋白中的Cys-402(A)、214(B),并构建突变体的真核表达载体,通过电镜技术和小鼠免疫试验探讨突变对VLPs的包装和免疫原性的影响。结果显示,在目标位点成功的引入突变,并构建了真核表达载体pPI-2-EGFP-VP2(A、B);电镜和小鼠免疫试验结果显示Cys-214对VLPs的组装和免疫原性的发挥是必需的,而Cys-402的突变并不干扰VLPs的形成和免疫原性的发挥,推测Cys-402及其附近可能存在利于外源基因插入的位点。本试验为以PPVVLPs为基础的多价疫苗和抗原转运系统提供了理论依据。
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- 关键词：猪细小病毒VP2定点突变
- PPV VP2和PCV2 ORF2重组病毒样颗粒的获得及其免疫原性研究被引量：1
- 2010年
- 将PCV2 ORF2基因插入PPV VP2基因HindⅢ酶切位点(即PPV VLPs的N端1/3处)获得重组基因VP2.ORF2,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-C1中得到重组质粒pEGFP-VP2.ORF2,经转染及电镜观察表明成功获得VP2.ORF2重组病毒样颗粒。重组病毒样颗粒经超速离心纯化后免疫小鼠,同时设立PPV普通疫苗、PCV2弱毒株及空白对照组,并在不同时期检测小鼠CD_3^+、CD_4^+、CD_8^+T淋巴细胞动态变化情况及PPV和PCV2抗体水平。结果显示:VP2.ORF2重组病毒样颗粒免疫小鼠后能诱导较高水平的细胞免疫和高于同等条件普通疫苗和弱毒株的体液免疫水平。此研究结果为进一步探索VP2.ORF2重组病毒样颗粒的形成机制提供了依据,也为PPV-PCV2二联疫苗的研发打下了基础。
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- 关键词：猪细小病毒
- 猪圆环病毒ORF2基因的插入对猪细小病毒VP2基因蛋白表达的影响被引量：4
- 2008年
- 将扩增得到的PCV2SC株ORF2基因插入PPVSC-1株VP2基因的HindⅢ(522bp处)和SacⅠ(1220bp处)2个特异限制酶切位点,并将此重组基因分别连接到含绿色荧光蛋白基因的伪狂犬病毒转移载体(pPI-2.EG-FP),脂质体转染系统转染COS-7细胞,倒置荧光显微镜观察重组基因表达情况。结合测序结果预测重组基因所编码的蛋白质的二级结构。
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- 关键词：猪细小病毒猪圆环病毒病毒样颗粒
- VP2蛋白Cys-402、Cys-214对猪细小病毒VLPs影响的初步研究被引量：1
- 2009年
- 试验以猪细小病毒VP2 Cys-402（A）、Cys-214（B）定点突变体为基础，将突变体真核表达载体转染COS-7细胞及核酸免疫猪细小病毒抗体阴性的小白鼠，通过电镜技术和流式细胞仪技术探讨突变Cys-402、Cys-214对猪细小病毒病毒样颗粒的影响，旨在寻找利于外源基因插入的病毒样颗粒内部位点。电镜和小白鼠核酸免疫试验结果表明：Cys-214对病毒样颗粒的组装和免疫原性的发挥是必需的，其突变后不能促使VP2形成病毒样颗粒，更不能在免疫后的小白鼠血清中监测出相应抗体的存在；而Cys-402的突变并不干扰病毒样颗粒的形成和免疫原性的发挥。由此可以推测Cys-402及其附近可能存在利于外源基因插入的位点。
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- 关键词：猪细小病毒VP2病毒样颗粒
- 猪细小病毒SC-1株VP2基因的定点突变及其对该基因表达的影响被引量：2
- 2008年
- 根据GenBank中的猪细小病毒(PPV)VP2基因序列设计并合成了2对突变引物,对PPV SC-1株VP2基因进行了定点突变。利用重叠延伸PCR技术分别将VP2蛋白中第402位(A)和214位(B)的半胱氨酸突变为精氨酸,并定向克隆入真核表达载体pPI-2.EGFP中,构建含报告基因EGFP的重组质粒pPI-2.EGFP.VP2(A)、pPI2.EGFP.VP2(B);利用脂质体介导法将上述重组质粒转染COS-7细胞,从而研究该突变对VP2基因表达的影响。结果显示,成功构建了含突变体及EGFP的真核表达载体;在倒置荧光显微镜下,突变后的质粒转染呈现不同的荧光信号,A样品的荧光呈颗粒状分布于细胞中,而B样品与阳性对照相似,荧光信号均匀分布于细胞中。提示,突变的引入是导致表达差异的主要原因。
- 胡秋炅徐志文郭万柱朱玲蒋清蓉王印王小玉
- 关键词：猪细小病毒VP2基因定点突变真核表达
