胡雨
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 靶向ERM的慢病毒siRNA载体在原代肺微血管内皮细胞中的表达及对流感病毒复制的影响
- 目的:构建分别靶向Ezrin、Radixin、Moesin的siRNA慢病毒表达载体,转染原代大鼠肺微血管内皮细胞后观察其对ERM基因表达及流感病毒复制的影响。方法:根据siRNA设计原理,化学合成靶向大鼠Ezrin、R...
- 吴莹张淑静张晨月玄子男李姝玉高誉珊胡雨刘敏
- 关键词：小干扰RNA慢病毒载体肺微血管内皮细胞
- 文献传递
- 靶向ezrin、radixin、moesin的siRNA慢病毒感染原代肺微血管内皮细胞促进流感病毒的复制被引量：4
- 2015年
- 目的构建分别靶向ezrin(E)、radixin(R)、moesin(M)的siRNA慢病毒表达载体,转染原代大鼠肺微血管内皮细胞,观察其对E、R、M基因表达及流感病毒复制的影响。方法根据siRNA设计原理,化学合成靶向大鼠E、R、M基因的siRNA序列,克隆入慢病毒表达质粒GV248,构建分别靶向E、R、M基因的慢病毒siRNA载体Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-M-siRNA,同时构建靶向无关序列的Lenti-control-siRNA;组织块法分离培养大鼠原代肺微血管内皮细胞(PMVEC);Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-M-siRNA转染原代大鼠PMVEC后,荧光定量PCR检测E、R、M的mRNA的表达,Western blot法检测ERM蛋白的表达,激光共聚焦显微镜技术检测ERM蛋白的分布;FM1流感病毒鼠肺适应株感染慢病毒转染的PMVEC后,荧光定量PCR检测慢病毒载体对流感病毒复制的影响。结果重组质粒经测序鉴定,Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-MsiRNA、Lenti-control-siRNA构建成功。慢病毒载体转染大鼠PMVEC,感染复数(MOI)为10时感染率达80%以上。Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-M-siRNA明显抑制PMVEC中E、R、M的转录及表达。流感病毒感染PMVEC中,慢病毒空载体及Lenti-control-siRNA抑制流感病毒的复制,而Lenti-E-siRNA、Lenti-R-siRNA、Lenti-M-siRNA增加PMVEC中流感病毒的mRNA水平。结论成功构建靶向ERM基因的慢病毒载体,证实其可稳定转染PMVEC特异高效地抑制E、R、M基因表达;慢病毒载体本身能抑制PMVEC中流感病毒复制,而靶向E、R、M的慢病毒siRNA却促进流感病毒的复制。
- 吴莹张淑静张晨月玄子男李姝玉高誉珊胡雨
- 关键词：小干扰RNAEZRINRADIXINMOESIN肺微血管内皮细胞
- 加强深度辅导工作,探索深度辅导模式
- 为了加强大学生的思想政治教育,将思政工作落到实处,北京市委教育工委提出了'广大辅导员要开展面向全体、针对问题、科学指导、整合力量的深度辅导工作'的要求,以确保每名大学生在校期间都能得到至少每年一次的、有针对性的深度辅导....
- 胡雨
- 关键词：思想政治教育辅导员辅导模式
- 文献传递
- 靶向ERM的慢病毒siRNA载体在原代肺微血管内皮细胞中的表达及对流感病毒复制的影响
- 目的:构建分别靶向Ezrin、Radixin、Moesin的siRNA慢病毒表达载体,转染原代大鼠肺微血管内皮细胞后观察其对ERM基因表达及流感病毒复制的影响.方法:根据siRNA设计原理,化学合成靶向大鼠Ezrin、R...
- 吴莹张淑静张晨月玄子男李姝玉高誉珊胡雨刘敏
- 关键词：小干扰RNA慢病毒载体肺微血管内皮细胞
- 慢病毒介导的小鼠PINK1基因RNAi载体的构建及在NIH3T3细胞中的筛选被引量：3
- 2015年
- 目的:构建筛选靶向特异PINK1-siRNA慢病毒表达载体,感染小鼠胚胎细胞(NIH3T3)验证该病毒载体的敲减效率,为研究帕金森病的发病机制奠定基础。方法:构建2对靶向小鼠PINK1-siRNA序列(KD1和KD2),将这2对序列连接在GV118上,将重组载体和病毒包装的辅助质粒共转染293 T细胞,获得慢病毒颗粒,再将该病毒颗粒转染入NIH3T3细胞,用qRT-PCR验证细胞内PINK1 mRNA表达水平以验证敲减效果。结果:筛选出可以用于后续实验的高效靶向KD2序列,并成功转染到小鼠NIH3T3细胞中,在感染复数(MOI)为50时,KD2的沉默效果最好,敲减率达到66.4%。结论:成功构建了高效靶向小鼠PINK1-siRNA慢病毒载体,其可稳定转染小鼠NIH3T3细胞,可高效抑制PINK1 mRNA的表达。为下一步利用其感染神经细胞或注入动物脑内,进一步研究PINK1基因在帕金森病发病过程中的作用环节和机制提供了分子生物学的技术基础。
- 张淑静高誉珊孙红梅许红王媛媛刘谦胡雨吴莹和欣龚小钢
- 关键词：慢病毒载体NIH3T3细胞
