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血小板抗体及淋巴细胞亚群检测在特发性血小板减少性紫癜中的诊断意义被引量：3: 2005年; 目的比较抗血小板特异性抗体、PAIgG及淋巴细胞亚群在特发性血小板减少性紫癜(ITP)及非免疫性血小板减少症中的水平,以评价其在ITP中的诊断价值。方法用改良单克隆抗体特异性俘获血小板抗原法(MAIPA)检测患者血浆中抗血小板膜糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb和P-选择素)的特异性抗体。利用流式细胞术(FCM)检测患者外周血中PAIgG及淋巴细胞亚群。结果ITP组MAIPA的阳性率为63.3%,非免疫性血小板减少组为阴性;PAIgG分别为73.3%、45%。淋巴细胞亚群中,ITP组CD3、CD4、CD4/CD8显著高于正常对照组,CD8、CD19则显著低于正常对照组。结论抗血小板特异性自身抗体抗体对提高ITP的诊断有一定的实用价值,淋巴细胞亚群的变化能较好地反映ITP的病理机制。; 戴兰缪竞诚范磊沈文红韩悦白霞王兆钺阮长耿; 关键词：血小板抗体淋巴细胞特发性血小板减少性紫癜

RNA干扰法对内皮细胞基质金属蛋白酶-2功能研究被引量：5: 2008年; 本研究运用RNA干扰(RNAi)技术将内皮细胞MMP-2进行基因沉默,揭示MMP-2在内皮细胞增殖、迁移、侵袭、血管形成以及细胞周期等方面的作用。采用脂质体法将MMP-2小干扰RNA(siRNA)转化内皮细胞EAhy926,通过RT-PCR及流式细胞术分别在基因和蛋白水平验证转化的效率。应用MTT比色法测定经MMP-2 siRNA干扰不同时间EAhy926细胞的增殖能力;虎红染色测定光密度法观察干扰48小时后内皮细胞在两种趋化因子作用下的迁移及侵袭能力的变化;Matrigel胶三维培养法观察干扰48小时后内皮细胞血管形成能力的改变;流式细胞术及半定量RT-PCR法测定内皮细胞周期和相关基因的变化。结果表明:干扰因素施加后48小时MMP-2基因表达水平降低至谷底,较正常对照下降约82%;流式细胞术分析表明,干扰因素施加后60小时MMP-2蛋白表达水平降低至谷底,较对照下降约60%。MTT法检测显示干扰前后内皮细胞增殖无明显变化。内皮细胞经MMP-2 siRNA干扰48小时后在两种趋化因子作用下的迁移能力均受到抑制,且对COLⅣ的抑制作用强于Fn(Fn未干扰组0.581±0.012,干扰组0.261±0.002;COLⅣ未干扰组对干扰组为0.467±0.009vs0.110±0.010,p<0.01)。侵袭实验也有相似的结果(Fn未干扰组对干扰组为0.365±0.012vs0.101±0.002;COLⅣ未干扰组对干扰组为0.317±0.009vs0.102±0.010,p<0.01)。内皮细胞体外的血管形成能力在经siRNA干扰48小时后下降至正常的58.9%。内皮细胞经MMP-2siRNA干扰48小时及72小时后,有丝分裂后期细胞比例(G1)分别由对照组[(65.9±2.53)%;(63.2±1.89)%]上升至[(83.9±2.53)%,(89.2±1.24)%](p<0.01);DNA复制期(S)和有丝分裂前期(G2)期细胞比例分别由对照组[(32.7±1.91)%,(37.1±2.65)%]下降至[(18.1±1.49)%,(10.2±0.85)%](p<0.01)。半定量RT-PCR分析结果显示,内皮细胞Rb、cyclinD1以及PCNA基因表达量分别下降至未干扰者的35%,51%和22%。结论:MMP-2的表达与内皮细胞的增殖无明显; 胡晓慧范磊阮长耿; 关键词：基质金属蛋白酶-2 RNA干扰内皮细胞

RNA干扰法对内皮细胞基质金属蛋白酶-2功能研究: 目的:运用RNA干扰(RNAi)这一技术将内皮细胞MMP-2进行基因沉默,揭示MMP-2在内皮细胞增殖、迁移、侵袭、血管形成以及细胞周期等方面的作用。方法:采用脂质体法将MMP-2 小干扰RNA(siRNA)转化内皮细胞...; 胡晓慧范磊阮长耿; 文献传递

人血管性血友病因子A1区单克隆抗体的研制: 研究背景:血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)是血栓形成过程中的一个重要相关蛋白, 在初期止血过程中,它通过血小板膜表面的 vWF 受体 (GPIb/IX)与血小板结合,使血小板发生粘附...; 沈飞董宁征范磊赵益明谢丽倩阮长耿; 文献传递

Mer基因过表达对内皮细胞株HMEC-1细胞血管形成的影响及其机制探讨: 2007年; 目的探讨受体酪氨酸家族成员 Mer 基因对体外血管形成过程的影响及其具体作用机制。方法利用脂质体法将人全长 Mer 基因真核表达质粒转染到内皮细胞株 HMEC-1细胞中,G418筛选转染细胞得到阳性克隆,利用 PCR 和 Western blot 分别在 mRNA 和蛋白水平验证转染情况。利用Transwell 和 Matrigel 分别观察 Mer 基因过表达对于内皮细胞迁移能力和血管形成能力的影响。通过荧光定量 PCR 筛选血管内皮生长因子(VEGF)-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D以及血管内皮生长因子受体(VEGFR)-1、VEGFR-2基因的表达情况。结果经过 G418筛选后,PCR 和 Western blot 检测结果显示 Mer 基因在阳性克隆细胞中有较高水平表达,分别较空质粒对照组上升3.61倍和2.12倍;高表达 Mer 的 HMEC-1细胞迁移能力[迁移到 Transwell 下室壁的细胞为(21±6)/视野]较对照组[(36±11)/视野]明显下降。体外血管形成实验也表明高表达 Mer 基因的 HMEC-1细胞血管形成能力明显下降,抑制率为76.9%;荧光定量 PCR 结果显示 VEGF-C 和 VEGFR-2表达明显下降,VEGF-C 表达量为对照组的44.7%,VEGF-C 表达为对照组的25.6%。结论 Mer 过表达可以显著抑制 HEMC-1细胞的迁移能力和血管形成能力,并且可能是通过 VEGF-C/VEGFR-2信号途径发挥作用。; 范磊周梦云沈飞谢丽倩阮长耿; 关键词：受体酪氨酸激酶血管新生内皮生长因子

人血小板与幽门螺杆菌交叉抗原的研究: 特发性血小板减少性紫癜(ITP)是一种自身免疫性疾病,发病原因尚不清楚。Gasbarriri等在1998年首先提出对ITP患者进行幽门螺杆菌(Hp)清除治疗导致血小板计数增加或恢复正常,这一结果得到多数学者肯定,但也有人...; 白艳艳王兆钺白霞戴兰范磊刘芳董宁征阮长耿; 文献传递

人血管性血友病因子A1区单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究被引量：5: 2008年; 目的研制人血管性血友病因子(vWF)A1区的单克隆抗体及其生物学特性的鉴定。方法采用基因重组技术体外表达人vWFA1区蛋白(rvWF-A1),以rvWF-A1免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,HAT选择性培养,用ELISA筛选阳性杂交瘤细胞。采用Westernblot和免疫组织化学方法进行单抗鉴定。结果构建了rvWF-A1表达载体pQE30-vWF-A1。rvWF-A1在大肠杆菌M15中稳定表达。通过融合、筛选获得两株阳性杂交瘤细胞,命名为SZ-129和SZ-130。其分泌的抗体能特异性地与rvWF-A1和人血浆中vWF结合。结论表达了rvWF-A1,并制备了具有潜在抗血栓作用的vWF-A1单克隆抗体SZ-129和SZ-130。; 沈飞董宁征谢丽倩范磊赵益明阮长耿; 关键词：原核表达血小板单克隆抗体

联合MAIPA、网织血小板与PAIgG检测对特发性血小板减少性紫癜诊断的意义被引量：5: 2007年; 目的探讨血小板特异性抗体与网织血小板(RP)、血小板相关抗体(PAIgG)在特发性血小板减少性紫癜(ITP)诊断中的价值。方法通过改良的单克隆抗体特异性捕获血小板抗原试验(MAIPA)测定ITP(86例)与非免疫性血小板减少(30例)患者血浆中血小板膜糖蛋白(GP)Ib、GPⅡb-Ⅲa以及P-选择素自身抗体,同时以流式细胞术(FCM)检测相应的RP%及PAIgG。结果ITP组MAIPA、RP%和PAIgG检测阳性率分别为62·79%、80·23%和70·93%;非免疫性血小板减少组分别为6·67%、23·33%和36·67%;两组间差异显著(P<0·01)。三种方法检测ITP结果具有相关性(P<0·05)。结论MAIPA是ITP的特异性诊断指标,多种抗体应用可以提高其敏感度。MAI-PA联合PAIgG及RP测定有益于ITP的正确诊断。; 韩悦范磊戴兰白霞王兆钺吴德沛阮长耿; 关键词：特发性血小板减少性紫癜血小板特异性抗体血小板相关抗体网织血小板

人血管性血友病因子A1区单克隆抗体的研制: 2008年; 目的研制人血管性血友病因子(von Willebrandfactor,vWF)A1区的单克隆抗体。方法采用基因重组技术体外表达人vWFA1区蛋白(rvWF-A1),以rvWF-A1免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,HAT选择性培养,用ELISA筛选阳性杂交瘤细胞。Western blot方法进行单抗鉴定。结果构建了rvWF-A1表达载体pQE30-vWF-A1。rvWF-A1在大肠杆菌M15中稳定表达。通过融合、筛选获得一株阳性杂交瘤细胞1B10。该抗体Western blot显示能特异性地与rvWF-A1和人血浆中vWF结合。结论表达了rvWF-A1,并制备了具有潜在抗血栓作用的vWF-A1单克隆抗体1B10。; 沈飞董宁征范磊赵益明谢丽倩阮长耿; 关键词：原核表达单克隆抗体

Mer基因在急性髓系白血病中的异常表达: 2007年; Mer基因是Axl受体酪氨酸激酶家族中的一员，定位于2q14．1，全长为130755bp，包括19个外显子，MermRNA共3632bp，编码由999个氨基酸组成的相对分子质量为（18～20）×10^3的蛋白。Mer在正常的外周血和骨髓中表达于单核细胞，而在正常的粒细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞均不表达，但在部分恶性血液病细胞株中发现有Mer的异常表达，提示可能与部分血液肿瘤发生发展有关。我们利用流式细胞术和RT-PCR方法分别在蛋白和mRNA水平检测32例急性髓系白血病（AML）患者骨髓中Mer的表达，并初步探讨其与疾病发生发展的关系。; 范磊戴兰沈文红周梦云阮长耿; 关键词：急性髓系白血病 ER基因 RT-PCR方法受体酪氨酸激酶 B淋巴细胞

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