董京芳
- 作品数：19 被引量：234H指数：7
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 汉滩病毒膜蛋白重组腺病毒的构建表达及免疫效果研究被引量：2
- 2004年
- 探讨利用腺病毒载体作为汉滩病毒基因工程疫苗载体的可行性。通过PCR扩增,得到完整的汉滩病毒76-118株M片段编码区,将该片段克隆入质粒pAdTrackCMV的CMV启动子下游,得到阳性克隆pAdTrackCMV-M。PmeI线性化的阳性克隆与腺病毒骨架载体pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,经同源重组后得到重组病毒pAdEasy-M。pAdEasy-M经PacI线性化后,脂质体介导转染293细胞,经Western-blot检测表明,G1、G2基因在293细胞中得到表达。重组病毒免疫BALB/c小鼠,产生了具有一定中和活性的抗体。该研究为进一步研制以腺病毒为活载体的工程疫苗奠定了基础。
- 罗保君张强董京芳丁美刘树玲杭长寿李银太周育森
- 关键词：汉滩病毒M片段重组腺病毒
- 轮状病毒组特异性抗原VP6在重组腺病毒中的表达及其免疫学效果的研究被引量：14
- 2002年
- 目的 构建可表达A组轮状病毒组特异性抗原VP6的非复制型重组腺病毒载体 ,并对其生物学和免疫学性质进行研究。方法 将人轮状病毒VP6基因插入腺病毒载体pShuttle CMV中 ,通过细菌内同源重组方法获得重组腺病毒DNA ,将其转染 2 93细胞获得重组腺病毒。用聚合酶链反应 (PCR)及Southernblot方法 ,检测目的基因在重组腺病毒中的整合 ,用Westernblot检测VP6的表达。通过灌胃和滴鼻两种途径对小鼠进行免疫 ,并对免疫后小鼠体液和粘膜免疫进行分析。结果 得到了重组腺病毒rvAd VP6 ,VP6基因整合于腺病毒基因组中 ,在 2 93细胞中可稳定表达。 2次免疫后灌胃和滴鼻两组小鼠均产生明显免疫应答 ,血清IgG抗体滴度分别为 1∶1 0 0 0和 1∶1 0 0 0 0～ 1∶1 0 0 0 0 0。除了血清IgG外 ,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA ,滴度为 1∶1 0～ 1∶1 0 0。滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到分泌型IgA(sIgA) ,灌胃组仅在肠道检测到sIgA。滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组。结论 人轮状病毒VP6基因重组腺病毒载体的成功构建及所取得的良好免疫学效果 。
- 何金生王健伟姜秀丽王大燕温乐英董京芳屈建国洪涛
- 关键词：重组腺病毒VP6基因病毒抗原
- 1株表达人轮状病毒VP7的重组腺病毒的生物学特性鉴定被引量：2
- 2002年
- 目的 对表达轮状病毒VP7基因的 1株重组腺病毒rvAdG1VP7(G)的生物学特性进行鉴定 ,为进一步免疫学研究打下基础。方法 用rvAdG1VP7(G)感染 2 93细胞 ,并分别应用电子显微镜技术以及Southernblot、PCR、RT PCR和Westernblot等分子生物学方法了解rvAdG1VP7(G)的形态、VP7基因整合、遗传稳定性、VP7基因在细胞内转录及表达等有关生物学特性。结果 电子显微镜观察表明 :rvAdG1VP7(G)具有典型的腺病毒形态 ;Southernblot、PCR、RT PCR和Westernblot等分子生物学方法分析显示 :rvAdG1VP7(G)中确有特异性的VP7基因稳定整合 ,有较好的遗传稳定性 ,感染 2 93细胞后能有效转录 ,可表达轮状病毒主要结构蛋白VP7。结论 rvAdG1VP7(G)具有良好的生物学性质 ,为进行体内实验研究提供了必要条件。
- 何金生王健伟温乐英屈建国姜秀丽董京芳洪涛
- 关键词：重组腺病毒生物学特性遗传学
- 复制缺陷型重组腺病毒rvAdG1VP7免疫学效果的研究被引量：6
- 2002年
- 目的 对 1株可表达A组轮状病毒主要结构抗原VP7的重组腺病毒rvAdG1VP7的体内免疫学效果进行研究。方法 通过灌胃和滴鼻 2种途径对BALB/c小鼠进行免疫 ,并对免疫后小鼠体液和黏膜免疫进行分析。结果 初次免疫后 ,2组小鼠均有应答 ,但血清IgG抗体滴度及阳转率不同。再次免疫后 ,显示出明显的加强效果。除了血清IgG外 ,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA。滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到SIgA ,灌胃组仅在肠道检测到SIgA。滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组。对滴鼻组小鼠肺灌洗液IgG/SIgA的阳转率进行了比较 ,发现IgG的应答水平明显高于SIgA。免疫后小鼠血清中IgG的动态观察表明 ,抗体可长期持续至少半年以上。 结论 重组腺病毒载体rvAdG1VP7所取得的良好免疫学效果 ,为我国具有自主知识产权的新型轮状病毒基因工程疫苗的进一步研制奠定了基础。
- 何金生王健伟姜秀丽王大燕温乐英董京芳屈建国洪涛
- 关键词：缺陷型重组腺病毒轮状病毒属遗传学VP7基因
- 中国人TTV部分基因的克隆及序列测定被引量：106
- 1998年
- 目的：了解我国人群中是否存在ＴＴ病毒（ＴＴＶ）感染，分析国内ＴＴ病毒株基因结构特点。方法：用ＰＣＲ方法检测血清标本中ＴＴＶＤＮＡ，对ＴＴＶＤＮＡ阳性的标本进行序列测定。结果：１０例临床诊断为非甲至非戊型肝炎病人血清标本中，用ＰＣＲ方法检测出５例为ＴＴＶＤＮＡ阳性。将其中的一株命名为ＴＴＶＣＨ１（ＴＴＶ中国株１）并进行序列测定，该序列与日本ＴＴＶ部分基因（ＣＬＯＮ２２）相对应位置的核苷酸同源性为９８％。用ＢＬＡＳＴ程序检索了ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＰＤＢ序列库的３３２９４９个序列数据，没有发现与之有明显同源性的序列；与已知的肝炎病毒（Ａ至Ｇ）也没有明显的相关性，而只同日本报道的部分基因有很高的同源性。结论：该研究建立了检测ＴＴＶ的ＰＣＲ方法并测定了ＴＴＶ中国株的部分基因序列，首次证实在我国人群中存在ＴＴＶ的感染。
- 周育森何忠平董京芳王海涛
- 关键词：TT病毒聚合酶链反应核苷酸肝炎病毒
- 我国各血清型轮状病毒非结构蛋白NSP4基因特征的初步分析被引量：3
- 2001年
- 目的 对我国血清学调查中发现的四型 (G型 )轮状病毒NSP4序列进行测定和分析 ,了解NSP4的基因类型和变异状况。方法 利用银染测序方法对G1、G2、G3、G9型毒株NSP4cDNA序列进行测定。结果 四个血清型毒株NSP4的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为 78 8% ,93 5 % ;83 0 % ,95 5 %。G1、G3、G9型标本多属Wa组 ;G2型标本多属KUN组。NSP4的变异主要位于VP4结合域内的 135 145位氨基酸。结论 Wa组和KUN组是我国主要的两种NSP4基因型。
- 徐倏燊王健伟张忠浩何金生董京芳温乐英洪涛
- 关键词：轮状病毒NSP4基因型
- 一株TT病毒中国分离株结构区全基因的克隆及序列测定被引量：9
- 2000年
- 目的 克隆和序列测定TT病毒 (TTV)中国分离株全基因。方法 采用长片段PCR技术从一例临床非甲 非庚型肝炎病人血清中扩增TTV全基因 ,获得 3个互相重叠的片段 ,分别长 199、3 2 69和 4 3 4bp。用标准的分子生物学方法测定这 3个片段的序列 ,从而得到全长TTV基因序列。结果 TTV中国分离株全基因长 3 73 9个核苷酸 ,含两个开放读码框架。第一个ORF位于 5 89至 2 90 1位核苷酸 ,编码 770个氨基酸 ;第二个ORF位于 10 7至 715位核苷酸 ,编码 2 0 2个氨基酸。在该基因A占3 1 2 4 % ,G占 2 2 2 5 % ,C占 2 5 5 4 % ,T占 2 0 97%。TTV中国分离株与日本分离株的核苷酸和氨基酸同源性均在 94 %以上。但在 13 80bp～ 180 0bp间 ,两株间核苷酸同源性为 88% ,氨基酸同源性仅为81%。该区段可能是一个内部高变区。结论 这一TTV中国株和日本株属同一个基因型。在ORF1区段内可能存在一个内部高变区。
- 周育森董京芳何忠平周乙华王勇王海涛
- 关键词：肝炎病毒TT病毒
- 套式PCR和原位杂交技术检测肝病患者单个核细胞内TTV DNA被引量：2
- 1999年
- 目的 了解慢性乙型肝炎(中度)和原发性肝癌(HBsAg阳性)患者PBMC内TTVDNA存在情况。方法 采用套式PCR以及原位杂交技术检测外周血单个核细胞(PBMC)内TTVDNA。结果 套式PCR检测26例慢性乙型肝炎(中度)患者PBMC内TTVDNA阳性7例,阳性率269%,非常显著高于健康对照(χ2=143,P<0.001);21例原发性肝癌(HBsAg阳性)患者PBMC内TTVDNA阳性4例,阳性率190%,显著高于健康对照(χ2=486,P<0.05)。7例PBMC内TTVDNA阳性的慢性乙型肝炎(中度)患者PBMC原位杂交,其中4例细胞内阳性。结论 慢性乙型肝炎(中度)和原发性肝癌(HBsAg阳性)患者PBMC细胞浆内存在TTVDNA,且阳性率相当高。
- 刘振元周育森董京芳金荣华武艳宁郎振为
- 关键词：原位杂交细胞质
- 中国部分地区新型肝炎病毒TTV感染的分子流行病学被引量：83
- 1998年
- 目的了解我国部分地区新型肝炎病毒ＴＴＶ感染的分子流行病学、ＴＴＶ在人群中的感染分布状况，探讨ＴＴＶ在肝炎发病中的作用和地位。方法采用ＰＣＲ方法检测血清标本中ＴＴＶＤＮＡ，克隆测定不同地理株ＴＴＶ的部分基因序列，分析其基因变异情况。结果检测了南方（广东深圳和江苏南京）和北方（北京和辽宁沈阳）的１１２例非甲～非庚型肝炎病人，其中ＴＴＶＤＮＡ阳性者４８例，阳性率４２．９％，而１０２例甲～庚型肝炎病人中阳性率为２．９％（χ２＝４２．８，Ｐ＜０．０１）。ＡＬＴ异常而无甲～庚型肝炎病毒感染标志的献血员中，ＴＴＶＤＮＡ阳性率（３４６％）明显高于ＡＬＴ正常献血员的阳性率（１６．８％，χ２＝４．５，Ｐ＜０．０１）。南方株（广东深圳ＴＴＶＣＨＮ００２、南京ＴＴＶＮＡＮ００１）和北方株（北京ＴＴＶＳＨＢ０１５）病毒间同源性在９８％以上，日本发表的序列同源性也高于９７％。结论我国北方和南方地区均存在ＴＴＶ感染。ＴＴＶ感染与ＡＬＴ异常有极为密切的关系，可能是导致非甲～非庚型肝炎的重要病原。正常人群中存在ＴＴＶ感染者，类似于ＨＢｓＡｇ的所谓“慢性携带状态”。
- 周育森董京芳周乙华黄呈辉何忠平王海涛
- 关键词：TT病毒病毒性肝炎分子流行病学聚合酶链反应
- 人轮状病毒非复制型重组腺病毒粘膜免疫效果的研究
- 我们在用非复制型腺病毒载体成功制备含有人轮状病毒VP7、VP6基因重组腺病毒的基础上,利用小鼠为实验模型,通过灌胃和滴鼻两种免疫途径对其粘膜免疫的效果进行了研究。为较全面了解非复制型重组腺病毒免疫小鼠后,粘膜免疫产生的情...
- 何金生王健伟姜秀丽王大燕温乐英董京芳屈建国洪涛
- 文献传递
