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产单核细胞李斯特菌plcB基因的克隆与原核表达被引量：1: 2007年; 目的克隆并原核表达产单核细胞李斯特菌plcB基因。方法利用PCR技术从产单核细胞李斯特菌基因组中扩增不含编码信号肽的plcB基因。采用T-A克隆构建pGEM-T-plcB重组质粒,BamHI、XhoI双酶切pGEM-T-plcB获得plcB片段后再插入pGEX-6p-1原核表达载体,获得pGEX-6p-1-plcB重组表达质粒并在表达宿主菌BL21中诱导表达。对表达产物进行纯化和SDS-PAGE、Western-blotting、磷脂酶活性实验分析。结果克隆的plcB基因长834bp,与GenBank上公布的序列完全相同;表达的与GST标签蛋白融合的广谱磷脂酶C蛋白(GST-PC-PLC)具有磷脂酶生物活性和免疫原性。结论成功构建产单核细胞李斯特菌plcB基因的原核表达质粒,并在大肠杆菌中得到有效表达,这为进一步研究PC-PLC蛋白的致病与免疫机理奠定了基础。; 田德斌袁舟殷月兰黄金林董慧焦新安; 关键词：产单核细胞李斯特菌原核表达

产单核细胞李斯特菌actA基因在大肠杆菌中的表达及其单克隆抗体的研制被引量：10: 2006年; 利用PCR技术从血清型1／2a的产单核细胞李斯特菌Lm-4株中扩增出actA基因，经克隆筛选和测序鉴定后，构建成该基因的原核表达载体pGEX-6P-1-actA及pET-actA，转入E．coli后，IPTG诱导目的蛋白的表达。SDS-PAGE结果表明，actA基因在两种载体中均获得表达，融合蛋白的大小分别约为120kDa和97kDa。以纯化蛋白为材料进行了AetA单抗的研制，获得4株抗ActA的单克隆抗体杂交瘤细胞株，腹水单抗ELISA效价为1：5×10^4-1：1×10^5。选取单抗1A5进行Western blot分析，结果表明单抗1A5能和表达产物进行特异性反应，且与Lm-4多抗血清的Western blot结果一致。actA基因的原核表达及单抗的研制为研究ActA蛋白的生物学活性及其致病作用奠定了基础。; 殷月兰董慧焦新安焦红梅顾志强袁舟张晨菊征超峰; 关键词：产单核细胞李斯特菌单克隆抗体

产单核细胞李斯特菌actA基因的原核表达及其单克隆抗体的研制: 本文利用PCR技术从血清型1/2a的产单核细胞李斯特菌Lm-4株中扩增出actA基因,经克隆筛选和测序鉴定后,构建成该基因的原核表达载体pGEX-6P-1-actA及pET-actA,转入终宿主菌E.coli后,IPTG...; 殷月兰董慧焦新安焦红梅顾志强袁舟张晨菊征超峰; 关键词：产单核细胞李斯特菌单克隆抗体原核表达; 文献传递

产单核细胞李斯特菌actA基因的原核表达及其单克隆抗体的研制: 本文利用PCR技术从血清型1／2a的产单核细胞李斯特菌Lm-4株中扩增出actA基因,经克隆筛选和测序鉴定后,构建成该基因的原核表达载体pGEX-6P-1-actA及pET-actA,转入终宿主菌E．coli后,IPTG...; 殷月兰董慧焦新安焦红梅顾志强袁舟张晨菊征超峰; 关键词：产单核细胞李斯特菌单克隆抗体; 文献传递

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袁舟