覃一峰 作品数:31 被引量:49 H指数:4 供职机构: 广西大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家现代农业产业技术体系建设项目 广西大学科研基金 更多>> 相关领域: 农业科学 轻工技术与工程 更多>>
广西地区腹泻仔猪呼肠孤病毒的感染及序列分析 被引量:2 2024年 为了解广西地区腹泻仔猪中哺乳动物呼肠孤病毒(MRV)的感染情况及主要流行毒株,应用套式RT-PCR对广西部分地区2020-2022年173份腹泻猪样品进行检测,并选取部分阳性样品进行S 1基因扩增与分析,进一步了解广西地区MRV主要流行毒株的基因特征。结果显示,2020-2022年173份样品MR总阳性率为18%(32/173),各年阳性率分别为29.6%、9.9%和33%。获得1株S 1基因全长序列,序列比对结果发现该序列与其他MRV S 1基因序列的核苷酸同源性为43.4%~97.9%,氨基酸同源性为26.1%~97.8%;遗传进化分析显示,获得的毒株序列为MRV3型,与其他猪源MRV3型毒株ZJ2013、IND/MZ/3013789/reo在同一分支上,同属于谱系Ⅳ。结果表明广西地区猪群存在一定程度的MRV感染,为进一步防控广西腹泻猪群中MRV的流行提供科学依据。 隆美金 陆颖 李茂宁 易春华 廖梦娟 余科辰 覃一峰 陈樱 陈樱 黄伟坚 韦祖樟水牛匈爱病毒结构蛋白VP1的截短表达及多克隆抗体的制备 2023年 为了制备水牛匈爱病毒(BufHuV)结构蛋白VP1截短基因的多克隆抗体,将病毒的VP1截短基因克隆至原核表达载体pET-32a(+)获得重组质粒pET-32a-BufHuV-VP1,重组质粒转化至BL21感受态细胞(DE3)后诱导表达,VP1截短蛋白的分子质量约为31.5 ku,主要以包涵体的形式表达。以纯化好的重组蛋白免疫昆明小鼠以制备多克隆抗体,通过Western-blot与IFA鉴定其特异性。结果显示,制备的小鼠多克隆抗体能与纯化的VP1重组截短蛋白和感染BufHuV的细胞表达的VP1特异性结合,表明多克隆抗体具有良好的反应原性和特异性。水牛匈爱病毒VP1截短重组蛋白及其多克隆抗体的成功制备为研究BufHuV致病机制、VP1蛋白功能以及血清学检测方法的建立提供了材料基础。 邹延林 张广欣 罗宇航 朱鑫玥 刘黄豪 莫筱可 谢江 王小玲 陈樱 欧阳康 韦祖樟 覃一峰 潘艳 黄伟坚关键词:结构蛋白 原核表达 多克隆抗体 蓝耳病病毒和副猪嗜血杆菌病混合感染病例的诊断与分析 被引量:5 2017年 广西南宁某规模化猪场近期爆发疫情,临床表现为断奶仔猪发热、喘气、腹式呼吸、关节肿大,剖检发现病猪胸腔积液,心脏呈现"绒毛心"症状以及肿大关节有黏液,通过实验室检测发现该猪场蓝耳病(PRRS)抗体水平离散度高,从病猪身上可以检测到蓝耳病病毒(PRRSV),分离的细菌经鉴定为血清5型副猪嗜血杆菌(HPs),且出现了一定程度的耐药现象。该病例是由于猪场免疫效果不理想以及断奶仔猪转群等应激因素造成的蓝耳病和副猪嗜血杆菌病混合感染,提醒猪场应注意蓝耳病的防控。 覃一峰 覃念 钟莲 韦祖樟 陈樱 欧阳康 黄伟坚关键词:免疫预防 一起猪蓝耳病继发感染传染性胸膜肺炎的诊断与分析 被引量:2 2018年 为了查明广西横县某猪场疫情爆发的原因,试验采用细菌的分离培养及分子生物学方法来检测。结果表明:细菌分离培养初步得到分离菌株,经PCR鉴定为传染性胸膜肺炎放线杆菌,且出现了一定程度的耐药性;该养猪场猪蓝耳病病毒抗体水平高于正常值,且在病料中检测到蓝耳病病毒。说明此疫情是由猪蓝耳病继发感染猪传染性胸膜肺炎引起的,此案例提醒各养殖场在加强猪蓝耳病防疫的同时要重视生物安全措施,防止细菌的继发感染。 季程远 覃一峰 黄培超 方庆励 刘芳 陈樱 韦祖樟 欧阳康 黄伟坚关键词:蓝耳病 传染性胸膜肺炎 防疫 生物安全 猪场育肥猪暴发猪肺疫的诊疗体会 2018年 广西梧州市某散养户猪场育肥猪近期暴发疫情,主要表现为发病猪咳嗽、喘气、发烧,腹部、臀部和耳朵发绀,呈现急性死亡症状,且死前口鼻流出泡沫状黏液。经实验室检测最终确诊为急性猪肺疫。药敏试验结果显示所分离菌株对氧氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星等药物高度敏感,使用敏感药物对猪群进行治疗之后,猪场基本稳定下来。 覃一峰 吴桂杰 李清清 黄伟坚关键词:急性猪肺疫 育肥猪 猪场 诊疗 敏感药物 广西地区1株牛细小病毒1型分离鉴定及遗传进化分析 2024年 【目的】了解广西地区牛细小病毒1型(Bovine parvovirus 1,BPV1)的生物学特性及遗传变异情况,为BPV1的防控提供理论依据和支撑。【方法】试验从广西地区养牛场采集409份犊牛腹泻粪便样本,通过BPV1特异引物进行PCR检测,使用牛鼻甲骨细胞(BT)对阳性样品进行病毒分离。收集产生细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)的BT细胞上清液,通过PCR扩增、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)、电镜观察等方法进行病毒鉴定。测定BPV1分离株感染BT细胞后不同时间病毒半数组织培养感染剂量(median tissue culture infectious dose,TCID_(50)),绘制病毒多步生长曲线。利用高通量测序获得病毒全基因组序列并对其进行遗传进化分析。【结果】409份粪便样本检测到1例BPV1阳性,阳性率为0.24%。病料接种BT细胞盲传至第3代,可观察到细胞圆缩、弯曲、形成细胞团块、溶解等现象。PCR扩增结果显示,产生CPE细胞上清经PCR扩增可出现特异性条带;电镜可观察到圆形、无囊膜、直径约24 nm的病毒粒子;IFA结果显示,接种分离株的BT细胞内可观察到特异性绿色荧光,成功分离到1株BPV1,命名为GXBS2209。第6代分离株病毒滴度为10^(5.75)TCID_(50)/mL,多步生长曲线显示分离株感染BT细胞后病毒滴度在120 h达到峰值,随后逐渐下降。测序结果显示,分离株基因组全长为5515 bp(GenBank登录号:PP158225),与美国Bovine parvovirus株全基因组序列相似性最高,为98.7%。遗传进化分析结果显示,分离株与Bovine parvovirus株处于同一分支,亲缘关系最近。分离株与参考毒株NS1、VP2基因核苷酸序列相似性分别为98.8%~99.4%、94.4%~98.1%,氨基酸序列相似性分别为98.8%~99.5%、90.3%~99.4%;NS1和VP2序列中各有2和3个氨基酸位点替换。【结论】本研究成功分离到1株BPV1,并对其全基因序列进行分析,为后续BPV1的致病机理、疫苗研究以及疾病防控奠定了基础。 吴奥祺 罗宇航 任同伟 王豪 董覃婷 覃一峰 韦祖樟 欧阳康 陈樱 黄伟坚 潘艳 李凤梅 谢江关键词:病毒分离 非洲猪瘟MGF360-11L蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立 被引量:2 2022年 本研究根据非洲猪瘟病毒(ASFV)HLJ/2018株(GenBank登录号:MK333180)MGF360-11L核苷酸序列,合成MGF360-11L基因序列,将其克隆至pET-32a(+)载体。测序正确后转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达与纯化,纯化后的重组蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。以纯化的MGF360-11L重组蛋白作为包被抗原,建立了检测ASFV MGF360-11L抗体的间接ELISA方法。用建立的间接ELISA方法与法国ID-Vet非洲猪瘟抗体检测试剂盒分别对192份临床血清样品进行检测比较,结果显示,该间接ELISA方法的特异性为91.6%,敏感性为92.1%,符合率约为91.7%。表明,该间接ELISA方法敏感性高、重复性好和特异性强,可初步用于临床血清样品非洲猪瘟抗体的检测,该方法的建立为ASFV的快速诊断提供了更多选择,对非洲猪瘟的防控提供了技术支持。 奚媖牡 耿鑫梅 黄香梅 邹延林 卢丽飞 吴青萍 覃一峰 黄伟坚关键词:非洲猪瘟病毒 原核表达 间接ELISA PRRSV诱导猪体内肺泡巨噬细胞炎症模型的建立 被引量:7 2018年 【目的】建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)诱导体内猪肺泡巨噬细胞(PAM)炎症模型,评价PRRSV感染对仔猪免疫系统的影响,为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的临床诊断及科学防控提供参考依据。【方法】以PRRSVGXNN1396株人工感染30日龄健康断奶仔猪,复制出PRRS病症,剖杀后采集病料,通过组织病理学和RT-PCR检测观察各免疫器官组织的病理变化及其病毒分布情况,并检测PAM细胞内的COX-1、COX-2等酶活性变化及IL-6、IL-8、IL-10、IL-1β、IFN-γ、MCP-1和TNF-α等炎性细胞因子水平变化。【结果】断奶仔猪接种PRRSV-GXNN1396株后第3 d开始表现出典型的PRRS病症,PRRSV主要集中在肺脏、颌下淋巴结、血液和扁桃体等样品组织中,攻毒仔猪各主要器官的实质细胞及有关淋巴细胞均出现不同程度坏死和炎症细胞浸入现象,尤其以肺脏、肾脏、脾脏等器官受损严重,出现巨噬细胞和淋巴细胞浸润。PRRSV感染早期(第3 d)仔猪PAM细胞中的ROS水平及COX-2、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α等因子水平均呈升高趋势,且COX-2、IL-6、IL-8和TNF-α因子水平极显著升高(P<0.01);随着感染天数的增加,PAM细胞内的COX-2、IL-6和IL-8因子水平呈下降趋势,TNF-α因子水平呈上升趋势。【结论】成功建立了PRRSV诱导仔猪体内PAM细胞炎症模型,进一步佐证PRRSV主要侵害猪的免疫器官组织,以达到免疫抑制的效果,并推断感染第3 d是病猪炎症反应的高峰期。 罗文涓 杨剑 敖妙 刘妍璨 覃一峰 文露婷 黎江 韦英益 胡庭俊关键词:炎症模型 茶皂素对鲤鱼生长性能的影响 被引量:4 2013年 在配合饲料中添加0,200,400,600,800,1000mg/kg茶皂素,进行为期60d的鲤鱼饲养试验,结果表明:饲料中添加一定量的茶皂素对鲤鱼有促生长作用,且添加600mg/kg茶皂素时,饲养效果最佳,其增重率为506.83%、生长比率为3.01%、饲料系数为1.99、蛋白质效率为1.21%。 李能琴 覃一峰 徐雯 张胜男 王士长关键词:饲料添加剂 茶皂素 鲤鱼 2014-2016年广西部分地区猪瘟病原和血清学调查 为了解近年来广西地区猪群猪瘟感染情况,为猪场制定合理的防控措施提供依据,本研究于2014-2016年对广西部分地区362份组织样品进行猪瘟的病原学检测,对2994份血清进行猪瘟的抗体检测.结果发现2014-2016年广西... 季程远 覃一峰 谢欣 方庆励 秦树英 欧阳康 黄伟坚关键词:猪瘟 病原检测 血清检测 流行病学