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詹政科: 作品数：10 被引量：24H指数：3; 供职机构：深圳大学生命科学学院过敏反应与免疫学研究所更多>>; 发文基金：深圳市科技计划项目国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目更多>>; 相关领域：医药卫生轻工技术与工程生物学更多>>

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双抗体夹心ELISA法测定食物中虾过敏原成分被引量：11: 2009年; 通过建立双抗体夹心ELISA法测定食物中虾过敏原成分,为食物过敏的预防与诊断提供理论基础。提取虾中过敏原蛋白,免疫小鼠制备抗虾过敏原的多克隆抗体,并以多克隆抗体包被酶标板,生物素标记多抗,建立双多抗体夹心的ELISA法测定食物中虾过敏原成分。成功地研制出双抗体夹心ELISA法检测食品中虾过敏原蛋白成分,具有特异性,其最低检出限为40ng/mL,标准曲线在40～1000ng/mL范围内线性良好。初步建立了检测虾过敏原蛋白成分的ELISA法,并具有较好的特异性和灵敏度,为进一步研制虾过敏原成分的ELISA检测试剂盒打下了基础。; 吴序栎吉坤美李佳娜詹政科刘志刚; 关键词：ELISA 多克隆抗体食物过敏

小麦GLB 1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定: 2014年; 以小麦主要过敏原Glb-1蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。采用细胞融合和有限稀释法相结合的方法快速筛选获得稳定分泌的特异性杂交瘤细胞株,用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水并用蛋白A亲和层析法纯化抗体后检测。采用间接ELISA法鉴定该单克隆抗体的IgG亚型;通过间接ELISA鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。利用双单抗夹心ELISA法检测单抗的抗原表位特异性。结果表明:共获得4株可稳定分泌小鼠抗小麦主要过敏原Glb-1蛋白的单克隆抗体,分别命名为1C4、4H5、1A9、4F5,经检测其Ig亚型均为IgG1,且4株单抗效价均在10-9以上。ELISA结果分析表明该4株单抗均能特异性识别小麦主要过敏原Glb-1蛋白且和其他常见食物无交叉反应性。将4株单抗两两配对进行ELISA实验,结果发现1C4与4H5可能有不同的抗原表位,以此建立的双抗夹心ELISA系统可以检测小麦Glb1-G3蛋白。实验成功制备了鼠抗小麦主要过敏原Glb-1蛋白抗原的单克隆抗体,并且建立了双单抗夹心ELISA检测系统,为小麦主要过敏原蛋白的检测奠定了基础。; 孔令超杨成彬詹政科刘志强刘立忠刘志刚朱清仙; 关键词：蛋白单克隆抗体免疫学鉴定

蚕蛹粗提浸液致敏小鼠哮喘模型的建立被引量：2: 2014年; 目的建立蚕蛹粗提浸液致敏Balb/c小鼠哮喘模型,检测分析蚕蛹粗蛋白致敏性。方法以Balb/c小鼠为模型实验动物,分为阴性组、阳性组。阴性组腹腔皮下注射生理盐水;阳性组腹腔注射蚕蛹粗提浸液致敏,连续3次,每次间隔1周。然后滴鼻激发1周每天1次。末次激发后24 h内进行气道高检测,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并对细胞进行分类、计数。检测特异性抗体(IgE)、细胞因子(IL-4、IL-10、INF-γ)以及肺组织病理变化等指标对模型的构建进行评价。结果阳性组的小鼠肺部病理改变明显,呈明显炎症病理改变,灌洗液中细胞计数明显升高,嗜酸性粒细胞明显升高(P<0.01),灌洗液IL-4、IL-10升高,INF-γ降低;阴性组各项指标均无升高。结论蚕蛹粗提浸液能使Balb/c小鼠发生致敏性哮喘,且致敏性强,建模成功,为以后相关过敏疾病防治奠定科研实验基础。; 李维中詹政科杨成彬刘志强肖小军龚苗刘志刚; 关键词：蚕蛹肺泡灌洗哮喘

口虾蛄原肌球蛋白基因表达及变应原性鉴定被引量：4: 2009年; 目的克隆口虾蛄原肌球蛋白(tropomyosin)基因并表达纯化出重组蛋白,研究其变应原性。方法提取口虾蛄总RNA,设计特异引物,通过反转录聚合酶链反应克隆出目的基因片段,测序后将该片段克隆到原核表达载体pET-28a上,转化到E.coliBL21(DE3)后,经异丙基-B-D-硫代乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化。采用免疫印迹(Western-blot)检测其与对虾过敏的患者血清IgE结合活性。结果经序列测定,该基因含有长度为855bp的开放阅读框,编码284个氨基酸(GenBank登录号为EF584510)。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测该重组变应原在大肠埃希菌中高效表达36kDa的目的蛋白,且重组变应原具有良好的IgE结合活性。结论本研究成功获得了具有变应原活性的重组口虾蛄原肌球蛋白。; 詹政科刘志刚吉坤美; 关键词：口虾蛄变应原原肌球蛋白克隆表达

标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中主要变应原Der f 2含量测定被引量：1: 2010年; 目的研制粉尘螨Ⅱ组变应原Der f 2单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb),并建立双单抗夹心ELISA检测方法 ,测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量。方法应用基因工程方法获得粉尘螨变应原Der f2重组蛋白并通过亲和层析纯化,再免疫小鼠,利用间接ELISA筛选获得McAb杂交瘤细胞株并纯化、鉴定抗体的特异性;用一株单抗包被酶标板,同时用生物素标记另一株单抗,从而建立双单抗体夹心ELISA法;并用此法测定粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f2的含量。结果成功地获得了一株单抗3B12与屋尘螨抗原具有交叉反应,另外一株单抗3G7与屋尘螨抗原没有交叉反应,并建立了双单抗夹心ELISA方法测定Der f2的含量,其方法的检测限为0.5ng/mL,并在6.25ng/mL-300ng/mL范围内线性良好;标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f2的含量为100ng/10000BAU。结论成功制备了高效价抗Der f 2单抗,并建立了双抗体夹心ELISA检测方法。该方法具有很高的灵敏度,可以测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中主要变应原Der f 2含量,为临床应用奠定基础。; 吉坤美刘晓宇唐艳詹政科刘志刚; 关键词：F 单克隆抗体夹心ELISA

双抗体夹心ELISA法测定食物中牛奶过敏原蛋白成分被引量：8: 2009年; 建立双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定食物中牛奶过敏原成分。通过提取牛奶过敏原蛋白,免疫小鼠制备抗牛奶过敏原的多抗,免疫印迹法鉴定多抗与牛奶过敏原蛋白的反应,并建立双多抗夹心ELISA法。结果表明,该法检测牛奶过敏原蛋白的最低检出限为25μg/L,标准曲线在25～1000μg/L范围内线性良好;同时对市场上食物标签标注含有牛奶、未含牛奶成分以及标注不详共12种食品进行检测,结果10种食品检测结果与食物标签标注内容相符,而2种标示不详的食品检测结果一个呈现阳性,一个呈现阴性。这说明本方法对于未标注牛奶过敏原成份的食品检测具有一定的实际应用价值。; 詹政科刘萍吉坤美李佳娜仇什刘志刚; 关键词：ELISA 多克隆抗体食物过敏

Derf3单克隆抗体的制备与应用及尘螨疫苗效价的测定: 詹政科; 关键词：粉尘螨单克隆抗体抗原定位

粉尘螨过敏原Der f15的表达、纯化和生物信息学分析被引量：1: 2015年; 目的表达纯化出粉尘螨过敏原Der f15蛋白,并预测其三维结构及B细胞抗原表位。方法利用实验室已有的Der f15质粒转化到大肠杆菌Rosetta,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,通过亲和层析纯化蛋白,经免疫印迹法（Western-blot）分析Der f15免疫原性,用生物信息学方法分析Der f15的三维结构及B细胞抗原表位。结果高效表达出Der f15蛋白。SDS-PAGE结果显示：表达的产物分子量约107ku。经亲和层析成功纯化蛋白,纯化蛋白以尘螨过敏患者血清为一抗进行Western-blot,结果显示：Der f15重组蛋白能与患者血清IgE发生特异性结合,而阴性对照没有反应条带出现,表明Der f15具有良好的抗原性。对B细胞抗原表位的预测表明,Der f15蛋白的第20-35、121-131、340-359及485-500是潜在B细胞抗原表位。结论粉尘螨Der f15表达、纯化和生物信息学分析研究有助于了解Der f15蛋白的分子生物学特性,为粉尘螨过敏反应性疾病的特异性诊断和疫苗治疗奠定理论基础。; 胡维詹政科刘玉琳喻海琼杨小猛刘晓宇; 关键词：粉尘螨免疫印迹法

粉尘螨铁蛋白的克隆、表达及蛋白特征分析: 2015年; 目的为了获得粉尘螨铁蛋白(ferritin)蛋白,并对该蛋白特征进行分析。方法根据铁蛋白基因已知序列,设计出相应的引物,提取粉尘螨总RNA,采用RT-PCR方法扩增出铁蛋白基因,PCR产物克隆入pET32a载体,构建的重组质粒pET32a-ferritin,经酶切和测序鉴定后,再转化至大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定其表达效果,用Ni+离子亲和层析柱纯化其重组蛋白。用生物信息学方法对粉尘螨铁蛋白的特征进行分析。结果成功克隆粉尘螨铁蛋白基因并构建了pET32a-ferritin重组质粒;粉尘螨铁蛋白基因开放阅读框为543bp,编码179个氨基酸,PI 5.35;SDS-PAGE结果表明铁蛋白基因在大肠杆菌Bl21(DE3)中获得良好的表达,经亲和层析纯化后,表达产物分子质量约为20kD。经生物信息学分析,粉尘螨铁蛋白含有8个丝氨酸激酶、7个苏氨酸激酶、7个酪氨酸激酶、0组氨酸激酶磷酸化位点,亲水区域大于疏水区域,属不稳定蛋白。结论克隆、表达了尘螨铁蛋白,经纯化后获得较高纯度的重组蛋白,并对其三级结构进行分析,为进一步研究尘螨过敏原的结构成分及其理化性质奠定理论基础。; 林建立詹政科刘玉琳范小琴耿晓瑞刘晓宇; 关键词：粉尘螨铁蛋白蛋白表达纯化生物信息学分析

粉尘螨主要变应原Der f3荧光抗原定位的研究: 目的本研究采用Der f3单克隆抗体与粉尘螨体特异性结合进行荧光定位,探索Der f 3存在于粉尘螨体内的部位,从而进一步指导我们进行粉尘螨变应原的研制工作。方法制备Der f3单克隆抗体,制作粉尘螨石蜡切片,用抗重组D...; 詹政科刘志刚吉坤美; 文献传递

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