赵昆
- 作品数：20 被引量：63H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 牛分枝杆菌mpb64-ag85b-esat6融合基因的分子克隆及表达被引量：5
- 2007年
- 以牛分枝杆菌valleeⅢ株基因组DNA为模板,PCR扩增mpb64、ag85b和esat6 3个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)和基因重组技术获得融合基因mpb64-ag85b,将mpb64-ag85b和esat6串联到同一原核表达载体pET32a(+)中获得重组质粒pET64-85b-e6。将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1 mmol/L)进行诱导,SDS-PAGE电泳分析表达情况,以Ni^(21)亲和层析柱纯化表达的融合蛋白和Western blot分析融合蛋白的免疫活性。结果表明:表达的融合蛋白大约为76 Ku,与预测大小相符,以Ni^(21)亲和层析柱纯化的融合蛋白能与牛结核病阳性血清发生反应。
- 迟磊刘思国王春来宫强赵昆王勇刘建东云孟克赵福广
- 关键词：牛分枝杆菌融合基因
- 禽分枝杆菌副结核亚种map0862基因与map2154c基因的串联重组表达被引量：4
- 2008年
- 以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增出了map0862基因和map2154c基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(PCR-SOE)获得了融合基因map0862-2154c。将融合基因与原核表达载体pET32a(+)连接,构建了重组质粒pET0862-2154c。将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1 mmol/L)诱导后对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western-blot检测。结果表明,表达的重组蛋白map0862-2154c的分子质量为76 ku,可用于建立诊断副结核病的ELISA。
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- 牛抗菌肽Bac7-Bac5融合基因在大肠杆菌中的过表达,纯化及抑菌活性被引量：14
- 2007年
- 牛抗菌肽Bac7和Bac5是一种线性阳离子小分子多肽,在机体天然免疫和获得性免疫中都发挥着重要作用。根据Gen bank中公布的牛抗菌肽bac7和bac5成熟肽基因序列,人工合成了融合基因Bac7-Bac5片段,克隆于原核表达载体pET32(a+)中构建了重组表达载体pET-B7-B5,将其转化于E.coli BL21(DE3)中实现了重组蛋白B7-B5(rB7-B5)的过表达,表达的rB7-B5以包涵体形式存在,rB7-B5表达量约占细菌总蛋白的36.6%,分子量大小为33kDa,与预测大小相符。以8mol/L尿素变性包含体后用Ni亲和层析柱纯化目的蛋白,经多步透析法复性的rB7-B5对猪胸膜肺炎放线杆菌和耐药性大肠杆菌具有很好的抑菌活性,为新型抗菌制剂的研制和开发奠定了基础。
- 赵昆刘思国王春来宫强迟磊刘建东王勇云孟克常月红刘慧芳周媛媛孙延鸣
- 关键词：融合基因抑菌活性
- 牛分枝杆菌新型DNA疫苗对BALB/c小鼠的免疫效果研究
- 利用PCR技术从牛分枝杆菌ValleeⅢ菌株中扩增出esat-6、mpb70和mpb83基因,通过重叠延伸剪接技术(SOE)合成mpb70-mpb83融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCDN...
- 宫强刘思国郭设平王春来王勇刘建东赵昆迟磊孔宪刚
- 关键词：牛分枝杆菌DNA疫苗免疫应答
- 文献传递
- 牛分枝杆菌单基因及双价融合基因DNA疫苗免疫效果的研究被引量：2
- 2007年
- 利用PCR技术和SOE技术扩增牛分枝杆菌ag85b、esat-6、hsp65、mpb64基因和ag85b-esat-6、hsp65-esat-6和mpb64-esat-6融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCA、pCE6、pCH、pCM、pCAE、pCHE和pCME。转染SP2/0细胞,检测目的基因的表达。以各重组质粒和pCDNA3.1(+)及PBS免疫BALB/c小鼠后检测血清特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖情况和IFN～γ分泌情况。结果表明,7种重组质粒免疫后小鼠血清抗体水平持续上升,与pCDNA3.1(+)对照组和PBS对照组相比差异显著(P<0.05),其中pCA组血清抗体水平明显高于其他6种DNA疫苗免疫组(P<0.05);三免两周后,融合基因免疫组的刺激值(SI值)与单基因免疫组相比差异显著(P<0.05),其中以pCME组的SI值最高;PPD刺激后融合基因DNA疫苗免疫组小鼠脾细胞分泌的IFN～γ高于单基因DNA疫苗组(P<0.05),而两对照组则未检测到IFN～γ的产生。成功构建了牛分枝杆菌ag85b、esat-6、hsp65、mpb64单基因和ag85b-esat-6、hsp65-esat-6、mpb64-esat-6双价融合基因DNA疫苗,从而为牛结核病新型疫苗的研制奠定了基础。
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- 关键词：牛分枝杆菌单基因融合基因DNA疫苗
- 重组ApxⅡA对胸膜肺炎放线杆菌灭活疫苗免疫效果的影响被引量：9
- 2006年
- 将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的结构基因ApxⅡA克隆到原核表达载体 pGEX-6P-1,并在大肠埃希氏菌中进行了表达,表达产物rApxⅡA以包涵体形式存在。为了检测 rApxⅡA的免疫原性,分别用rApxⅡA、灭活疫苗以及灭活疫苗添加rApxⅡA对比利时白兔进行了免疫。免疫后进行攻毒,所用菌株分别为同型菌株(APP7型L25-4株)和异型菌株(APP1型 4074株)。结果,免疫动物对相同血清型菌株的攻击获得完全保护,且对异型菌的攻击也获得一定保护作用。表明,rApxⅡA蛋白具有良好的免疫原性,作为抗原成分添加到灭活疫苗中后可提高灭活疫苗的免疫效果。
- 王春来刘思国邵美丽王勇宫强郭设平刘建东赵昆迟磊
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌灭活疫苗免疫效果
- 猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗保护效果的评价及其免疫机制的研究被引量：6
- 2006年
- 分别表达了rApxⅠr、ApxⅡr、ApxⅢ、rApxⅣr、Apfa和rOMP 6种重组蛋白,以不同组合分组免疫小鼠,分别以APP1型菌(5×109CFU)和APP7型菌(1×1011CFU)进行攻毒。结果显示,试验Ⅱ组(rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rOMP)的APXⅠ抗体水平、细胞免疫水平及对APP1和APP7型菌的保护效果均显著高于其他各试验组及对照组;试验Ⅰ组(灭活疫苗)、Ⅲ组(rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rApxⅣ)、Ⅳ组(rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rApfa)与对照组差异显著,但均显著低于试验Ⅱ组;APXⅠ抗体水平和细胞免疫水平与攻毒保护率呈正相关。证实rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rOMP组免疫效果最好,可对2个血清型APP的攻击提供有效保护。
- 王勇刘思国王春来邵美丽宫强刘建东迟磊赵昆郭设平李广兴
- 关键词：猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗免疫机制
- 牛分枝杆菌DNA疫苗免疫效果的研究
- 根据Gen Bank中发表的已知序列设计多对特异性引物,以牛分枝杆菌Vallee Ⅲ菌株基因组DNA为模板扩增Ag85B、esat-6、hsp65、mpb64、mpb70和mpb83基因片断,并通过SOE-PCR技术扩增...
- 宫强刘思国郭设平王春来王勇刘建东迟磊赵昆孔宪刚
- 文献传递
- 牛分枝杆菌DNA疫苗免疫效果的研究
- 根据GenBank中发表的已知序列设计多对特异性引物,以牛分枝干菌ValleeⅢ菌株基因组DNA为模板扩增Ag85B、esat-6、hsp65、mpb64、mpb70和mpb83基因片断,并通过SOE-PCR技术扩增Ag...
- 宫强刘思国郭设平王春来王勇刘建东迟磊赵昆孔宪刚
- 文献传递
- 用胸膜肺炎放线杆菌基因组表达文库免疫小鼠产生的免疫保护作用
- 为了筛选、鉴定APP保护性抗原基因库,本研究构建了胸膜肺炎放线杆菌血清7型的基因组表达文库(～106个克隆),并将该文库分成10个克隆库(1.0×105个克隆/库)。提取每个克隆库的重组质粒免疫小鼠并以1型胸膜肺炎放线杆...
- 刘慧芳周媛媛刘思国宫强王勇刘建东王春来云孟克常月红迟磊赵昆
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌免疫保护
- 文献传递
