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Pit-1/Hinf Ⅰ基因PCR-RFLP和鲁西黄牛与利木赞杂交牛生长性状的关联性分析: 2012年; 为了提高鲁西黄牛生长发育水平及产肉性能。利用PCR-RFLP技术研究111头利鲁杂交牛Pit-1基因多态性与体尺生长性状指标之间的相关性。结果表明,群体的Pit-1-HinfⅠ基因座的451 bp的PCR产物被限制性内切酶HinfⅠ酶切后表现多态性,它们的等位基因A、B频率分别为0.32,0.68,不符合Hardy-Weinberg平衡状态。群体Pit-1基因座不同基因型与体尺生长性状指标相关分析的结果表明,群体内AA基因型个体的尻高显著高于群体AB和BB型个体(P<0.01),可作为利鲁杂交牛尻高的候选基因之一;群体内AB基因型个体的髋宽显著高于群体AA和BB型个体(P<0.05);但在头长、额宽、胸围、胸深、胸宽、体斜长、尻长、腰角宽、坐骨结节宽、管围、体高、十字部高、臀端高等指标上均无显著差异(P>0.05)。; 刘桂芬万发春刘桂萍刘晓牧逯茂洋谭秀文成海建宋恩亮; 关键词：PCR-RFLP

基于荧光显色的IBV LAMP检测方法研究被引量：12: 2012年; 【目的】建立基于荧光显色的可视化禽传染性支气管炎病毒(IBV)环介导等温扩增(LAMP)检测体系,为IBV的快速临床检测提供有力的技术支持。【方法】根据NCBI中收录的IBV 5a+5b基因的8个区域设计了3对LAMP引物,通过对反应体系各组分和条件的优化,建立IBV LAMP检测方法,并对该方法的特异性和敏感性进行验证。分别用SYBR Green I和一定浓度比的钙黄绿素/锰离子混合物作为显色剂,对IBV LAMP检测结果进行可视化判定。应用该检测体系和PCR方法对临床送检的60份样品同时进行检测,比较2种方法的阳性检出率。【结果】成功建立了IBV LAMP检测方法,该方法能够在等温(63℃)条件下1h内完成反应,具有良好的敏感性和特异性,最低可以检出1拷贝/μL的阳性重组质粒,比普通PCR方法敏感100倍,而对其他病毒检测结果均为阴性。应用SYBR Green I和钙黄绿素/锰离子显色时,阴阳性样品均有强烈的颜色对比,其中0.05mmol/L钙黄绿素与0.6mmol/L锰离子混合液可以用于LAMP扩增产物的判断,其结果与琼脂糖凝胶电泳结果一致。在对60份临床样本的检测中,LAMP和PCR方法检测出的阳性样本数量分别为49份和42份。【结论】建立了基于荧光显色的IBVLAMP检测方法,该方法具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力。; 张琳马利丁雅苓逯茂洋胡北侠杨少华张秀美; 关键词：传染性支气管炎病毒环介导等温扩增钙黄绿素

虹鳟Ⅰ型干扰素基因的表达与纯化被引量：1: 2013年; 为了获得能用于抗虹鳟(Rainbow trout,学名,Oncorhynchus mykiss)病毒性疾病生物制剂开发的高纯度Ⅰ型干扰素(rtIFN3)蛋白,克隆了虹鳟rtIFN3,构建了pET21a-rtIFN3/BL21(DE3)原核表达与发酵系,并对rtIFN3进行了表达。重组的rtIFN3分子质量约18.5ku,以包涵体形式表达,表达量占全菌蛋白量的16%。随后,提取2L发酵瓶的包涵体蛋白,经变性与复性后,再经分子筛和阴离子交换层析进行纯化。纯化后,rtIFN3SDS-PAGE电泳结果表明蛋白纯度达98%,复性率为3%。本研究获得的高纯度复性蛋白为生物制剂的研制提供了材料。; 张琳丁雅苓逯茂洋夏春张秀美; 关键词：发酵纯化

中药新药研发中的风险与控制被引量：1: 2015年; 通过文献研究法,分析中药新药研发主要环节的风险并提出控制措施。结果表明:中药新药研发过程中存在立项评估、处方确定、原料控制、工艺设计和成品质量控制等五大特有风险。因此,在中药新药研发的关键环节甚至全程应贯穿风险分析和控制,做到尽量尽早规避风险、及时有效应对或转移风险,科学合理地降低中药新药研发过程中的高风险率。; 纪晓琳陈玉文逯茂洋; 关键词：中药新药研发

4株鸭坦布苏病毒包膜蛋白基因的分子进化分析及表达被引量：13: 2013年; 从规模化养鸭场分离到4株鸭坦布苏病毒,成功克隆了包膜蛋白(E蛋白)基因片段,并对其进行了序列测定、分析和表达。结果表明,E基因全长1 503bp,编码501个氨基酸,序列高度保守。进化分析显示,鸭坦布苏病毒属蚊媒黄病毒类恩塔亚病毒群,与其他坦布苏病毒及近期发现的BYD病毒关系最近。采用原核表达系统对E基因进行了表达,蛋白大小54 300,主要以包涵体形式存在。随后,对E蛋白外功能区序列和3D结构进行了分析,在已解析结构的黄病毒中与WNV E结构最为相似。研究结果为该病的防控和基因工程疫苗的研制奠定了基础。; 张琳逯茂洋胡北侠蒋一男许传田杨少华张贝张秀美; 关键词：分子进化

荧光显色技术在鸭坦布苏病毒LAMP检测方法中的应用及比较被引量：9: 2014年; 参考NCBI中已收录的鸭坦布苏病毒(DTMUV)E基因保守区域设计了6条引物,通过对反应体系中各组分和条件进行优化,建立了DTMUV环介导等温扩增(LAMP)检测体系,并应用荧光显色剂(SYBR GreenⅠ和钙黄绿素、锰离子)对扩增产物进行可视化判定。结果显示,以SYBR GreenⅠ为染料,显色敏感性为10copies/μL的病毒,比普通PCR高100倍;以钙黄绿素和锰离子组合作为显色剂,其显色极限为1 000copies/μL的病毒,虽低于SYBR GreenⅠ的显色敏感性,但能有效地避免气溶胶造成的空气环境污染。结果表明,本研究建立的荧光显色LAMP体系敏感性高、能避免交叉污染,具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力,能够为从源头遏制该病的发生和蔓延提供有效的手段。; 张伟逯茂洋黄庆华杨少华胡北侠许传田伊惠张琳张秀美; 关键词：环介导等温扩增

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逯茂洋

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