郑佳玉
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 供职机构：扬州大学兽医学院江苏省人兽共患病学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业科研专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 结核分枝杆菌RD1区rv3873基因的原核表达及其产物的细胞免疫特性初步分析被引量：2
- 2010年
- 目的克隆表达结核分枝杆菌RD1区Rv3873蛋白并初步分析其细胞免疫特性。方法应用PCR技术扩增rv3873基因,插入表达载体pET30a(+),构建原核表达重组质粒pET-Rv3873,重组质粒在宿主菌BL21(DE3)诱导表达,利用表达的蛋白腹腔注射免疫小鼠,以细胞增殖和ELISPOT试验测定融合蛋白的细胞免疫应答。结果克隆的rv3873测序与已发表序列100%同源,融合蛋白大小43ku,淋巴细胞增殖实验显示该蛋白能引起小鼠T细胞免疫反应,ELISPOT实验结果表明多肽pep3873刺激特异性IFN-γ分泌细胞多于IL-4分泌细胞。结论成功地克隆表达了Rv3873蛋白,并发现该蛋白具有良好的细胞免疫特性。
- 周海霞陈祥郑佳玉牛中伟潘志明焦新安
- 关键词：结核分枝杆菌IFN-Γ
- 小鼠巨噬细胞系体外感染卡介苗的应答被引量：1
- 2010年
- 【目的】探讨小鼠巨噬细胞系RAW264.7体外感染卡介苗的应答。【方法】体外感染RAW264.7细胞23h后,分析细胞形态和细胞表面共刺激分子的表达。然后去除培养上清中的卡介苗,继续培养不同时间,通过CFSE、annexin V/PI和Rh123标记,分析宿主细胞的应答。【结果】卡介苗感染23h后,细胞生长状态良好,细胞内能明显观察到吞噬泡中的BCG。细胞表面共刺激分子CD40、CD54、CD80、CD86、CD11b的表达明显升高,CD11c、I-Ad以及H-2Kd的表达变化不明显。CFSE标记卡介苗后,随着培养时间的延长,荧光强度逐渐减弱,但是4天后仍然明显地高于对照组。除去培养上清中的卡介苗后继续培养,含有卡介苗的细胞逐渐减少,继续培养60h后基本检测不到。另外,卡介苗感染不能诱导细胞凋亡,线粒体膜电位先升高后降低,5d后,基本上与对照组一致。【结论】通过以上分析,为卡介苗免疫机理的研究提供了重要数据。
- 胡茂志陈义芳韩璐季琰郑佳玉孟闯周海霞陈祥焦新安刘秀梵
- 关键词：卡介苗RAW264.7共刺激分子线粒体膜电位
- 鸡α干扰素基因的原核表达及其活性测定被引量：5
- 2009年
- 应用RT-PCR技术,从被刺激诱导的鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡α-干扰素(ChIFN-α)基因cDNA,经克隆和测序后,构建原核表达重组质粒pGEX-proChIFN-α(全长序列)和pET-ChIFN-α(不含信号肽序列),并分别转化相应的表达菌。重组菌经IPTG诱导,SDS-PAGE结果表明,ChIFN-α基因均获得表达,重组蛋白大小分别为45ku、26ku左右,表达的蛋白以包涵体形式存在。表达产物经变性、提纯、复性,重组蛋白的含量约为1mg/mL。复性后的ChIFN-α能够在鸡胚成纤维细胞上抑制H5N1禽流感病毒的复制;用水泡性口炎病毒检测结果表明,重组ChIFN-α具有较高的抗病毒作用,其生物学活性达到2×106u/mg。
- 戴华郑佳玉陈俊华潘志明焦新安
- 关键词：原核表达抗病毒活性
- 抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的研制及鉴定被引量：3
- 2007年
- 应用淋巴细胞杂交瘤技术,以纯化的原核表达产物His-ChIFN-γ作为免疫原,以纯化的GST-ChIFN-γ作为检测原,制备抗鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和ECL法鉴定单克隆抗体(mAb)的生物学特性。获得4株可稳定分泌抗ChIFN-γmAb的杂交瘤细胞株1G10、2C3、3E5、3E3,其腹水ELISA效价为2×104~8.2×105;Ig亚类分别为IgG1、IgG1、IgG1和IgG2a。Dot-ELISA和ECL试验结果均表明:4株mAb只与表达ChIFN-γ的重组大肠杆菌反应,而与未表达ChIFN-γ的菌株不反应,表明4株mAb均特异性针对ChIFN-γ。鸡脾脏淋巴细胞经PMA刺激后,经固定、破膜,用mAb 2C3标记,利用流式细胞术可成功地检测到表达ChIFN-γ的T淋巴细胞。mAb为家禽的免疫检测、免疫细胞功能分析和免疫调节等研究提供依据。
- 戴华郑佳玉胡茂志陈俊华潘志明焦新安
- 关键词：Γ-干扰素单克隆抗体流式细胞术
- 鸡γ-干扰素在杆状病毒系统中的表达被引量：2
- 2009年
- 目的:获得具有生物学活性的重组鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)。方法:应用RT-PCR方法扩增ChIFN-γ基因cDNA,将其克隆入杆状病毒表达系统的转移载体pFastBac1,构建重组质粒pFast-ChIFN-γ,通过位点特异性转座,将ChIFN-γ基因整合到Bacmid穿梭载体中,构建重组质粒pBac-ChIFN-γ并转染昆虫细胞Sf9,采用间接免疫荧光试验(IFA)、ELISA试验鉴定重组ChIFN-γ的表达,通过细胞病变抑制法检测重组蛋白的抗病毒活性。结果:IFA、ELISA与细胞病变抑制试验结果显示,重组ChIFN-γ在杆状病毒系统中获得表达,其抗病毒活性达5×103～1×104U/mL。结论:重组ChIFN-γ的获得为其开发应用提供了重要的生物材料。
- 戴华季琰郑佳玉徐正中潘志明焦新安
- 关键词：杆状病毒重组蛋白
- 鸡白细胞介素4基因的克隆及其原核表达被引量：8
- 2008年
- 应用RT-PCR技术,从被诱导的鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡白细胞介素-4(ChIL-4)基因cDNA,经克隆筛选和测序后,构建出重组质粒pGEX-6P-ChIL-4和pET-ChIL-4,分别转化相应的受体菌,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,结果表明ChIL-4基因在上述载体中均获得表达,融合蛋白大小分别为38ku和18ku,Westernblot结果也显示,在相对分子质量38ku和18ku位置有特异性条带。这为重组ChIL-4的规模化生产、疫苗佐剂的研制及其单克隆抗体的制备奠定了基础。
- 戴华郑佳玉陈俊华孙林潘志明焦新安
- 关键词：CDNA克隆
