金雪花
- 作品数：3 被引量：17H指数：3
- 供职机构：沈阳农业大学生物科学技术学院更多>>
- 发文基金：教育部留学回国人员科研启动基金沈阳市大型科学仪器设备共享服务专项基金辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 单增李斯特菌基因组DNA提取方法比较被引量：7
- 2011年
- 为了选择一种简单、快速、有效的单增李斯特菌基因组DNA的提取方法,采用溶菌酶-蛋白酶K法、氯仿/异戊醇法、液氮冻融法提取单增李斯特菌基因组DNA,利用PCR扩增结果判断所得DNA样品的质量。结果为,3种不同方法均能扩增出234 bp条带,溶菌酶-蛋白酶K法提取的DNA模板检出限最低,为1.25×102CFU/mL。结论为,溶菌酶-蛋白酶K法提取的DNA模板进行PCR扩增检出限最低,该方法提取的基因组DNA适用于PCR扩增和其他分子生物学研究。
- 张喆吕淑霞祝儒刚徐斌金雪花
- 关键词：单增李斯特菌DNA提取
- EMA-LAMP方法快速鉴别检测单增李斯特菌被引量：4
- 2012年
- 作者建立一种将叠氮溴化乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)结合环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的新分析方法(EMA-LAMP),快速鉴别检测单增李斯特菌。通过对单增李斯特菌hly基因的六个区域设计4条LAMP特异性引物,EMA-LAMP在63℃下反应1 h,检测单增李斯特菌的死活细胞。结果表明,在浓度为2.0×108CFU/mL的单增李斯特死菌悬液中,使EMA激活光解进入死细胞中且与DNA结合的最佳曝光时间至少为20 min,不抑制活菌细胞DNA的LAMP扩增的最大EMA质量浓度为10μg/mL,而抑制死菌细胞DNA的LAMP扩增的最小EMA质量浓度为4.0μg/mL;活菌细胞的检出限为20 CFU/mL。
- 吕淑霞徐彬于晓丹金雪花林英
- 关键词：单增李斯特菌
- EMA-LAMP方法快速检测鉴别副溶血性弧菌被引量：6
- 2012年
- 建立将DNA染料EMA(ethidium bromide monoazide)结合环介导等温扩增技术(loop-mediated isother-mal amplification,LAMP)的方法(EMA-LAMP),用于检测鉴别副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)死/活菌细胞。针对副溶血性弧菌不耐热溶血素基因tlh(thermolabile hemolysin)特异性序列的6个位点设计4条引物及2条环引物,进行检测。结果表明,浓度为8.0μg/mL或更高浓度的EMA,至少经25 min的曝光处理,能够有效抑制浓度为1×108cfu/mL的副溶血性弧菌死细胞的扩增,而对用相同浓度EMA处理的副溶血性弧菌活细胞扩增没有影响。经EMA处理,含有不同比例的副溶血弧菌死细胞和活细胞的混合液中,活菌的最小检测限为1.0×102cfu/mL。EMA-LAMP方法比EMA-PCR方法区分死活细胞中的活细胞更为有效,是一种能够快速、灵敏且更为有效鉴别副溶血性弧菌死活细胞的新方法。
- 金雪花吕淑霞张超徐彬于晓丹
- 关键词：副溶血性弧菌
