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重组大肠杆菌的高密度发酵和甘油生产条件的初步研究被引量：4: 2006年; 在摇瓶中进行重组大肠杆菌菌株BL21高密度发酵条件的研究,考察了葡萄糖浓度、盐离子浓度、温度、接种量、发酵时间等对该菌株生产甘油的影响。初步确定底物浓度为2.5%,盐离子浓度0.2%,温度为37℃,接种量为2%,经24h的摇瓶发酵,甘油产量最高达6.8g/L。在30L发酵罐实验中、按初步确定的优化条件发酵26h,甘油产量可达46.67g/L,是LB/葡萄糖培养基中甘油产量的2.06倍。; 杜丽琴韦宇拓陈发忠黄日波; 关键词：重组大肠杆菌甘油发酵条件

乳酸片球菌L-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：11: 2006年; 与其它微生物相比,用大肠杆菌进行发酵生产乳酸有许多优势,但大肠杆菌没有L乳酸脱氢酶基因,不能利用糖发酵生产L乳酸.本文采用PCR技术,以乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)基因组DNA为模板,克隆得到L乳酸脱氢酶(Llactatedehydrogenase)基因,将该基因的ORF连接到表达质粒pET22b(+),获得重组质粒pETldhL.将pETldhL质粒转化大肠杆菌BL21株,实现了ldhL基因的表达;对含有ldhL基因的重组菌株进行表达研究,在30℃以IPTG诱导8h后,SDSPAGE分析可见明显特异性条带,酶活力达到6.49u/mL,是野生菌酶活力(2.82u/mL)的2.3倍.对重组表达的L乳酸脱氢酶生物学特性研究显示,它们的最适反应温度为27～30℃,最适反应pH为5.0～5.3.; 黄彦韦宇拓张黎陈发忠黄日波; 关键词：L-乳酸 L-乳酸脱氢酶乳酸片球菌克隆

克雷伯氏菌甘油脱水酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：14: 2004年; 利用PCR技术从克雷伯氏菌 (KlebsiellapneumoniaeATCC4 9790 )总DNA中扩增得到甘油脱水酶 (glyceroldehydratase ,DHAB)基因的DNA片段 ,并将其连接到表达质粒 pSE380 ,携带有重组质粒 pSE dhaB的大肠杆菌JM 1 0 9实现了dhaB基因的表达 ;对含有dhaB工程菌进行表达研究 ,表明工程菌在 37℃ ,以 1 .0mmol LIPTG诱导 5h酶活力即达到 1 1 6 4.1 4U L ,比野生菌酶活力 (1 6 8.6 9U L)提高了 6 .9倍。; 周文广韦宇拓黄鲲陈发忠黄日波; 关键词：克雷伯氏菌甘油脱水酶大肠杆菌克隆质粒

产甘油基因工程菌的构建: 2004年; 利用途径工程的基本原理 ,在大肠杆菌中构建一条产甘油的新代谢途径。从酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae INVSc1菌株总 DNA克隆 3-磷酸甘油脱氢酶基因 (gpdl)和 3-磷酸甘油酯酶基因 (hor2 ) ,构建由两个杂合启动子 trc启动基因的双表达盒的重组质粒 p GEM- Cgpd1- Chor2 ,后者转入E. coli JM10 9菌株 ,构建的重组菌株就具有一条直接将葡萄糖转化为甘油的新代谢途径 ,将该重组菌株以葡萄糖为底物进行摇瓶发酵 ,甘油产率为 1.18g/ L。该研究结果为进一步构建生产 1,3-丙二醇工程菌打下了基础。; 杜丽琴韦宇拓黄鲲陈发忠黄日波; 关键词：甘油葡萄糖重组质粒重组菌株基因工程菌磷酸

T.fusca海藻糖合成酶基因及海藻糖制造方法: 本发明涉及一种全新的海藻糖合成酶基因的克隆及其在相关宿主中的表达，该酶的基因基因克隆自Thermobifida菌属，它能够在正常的生化反应条件下将麦芽糖转化为海藻糖，该酶的底物转化率会随着反应温度的降低而升高，它可以利用...; 韦宇拓黄日波蒙健宗卢福燊庞中文朱绮霞陈发忠罗兆飞卢运琨王青艳黄鲲; 文献传递

甘油脱水酶的定向进化及其高通量筛选方法: ＜正＞1,3-丙二醇是一种重要的化工原料,它具有多种用途而倍受重视。在生物法生成1,3-丙二醇的过程中,甘油脱水酶（Glycerol Dehydratase,EC 4．2．1．30）能催化甘油生成3-羟基丙醛,（3- 羟...; 韦旭钦陈发忠韦宇拓齐向辉黄日波; 文献传递

T.fusca海藻糖合成酶基因及海藻糖制造方法: 本发明涉及一种全新的海藻糖合成酶基因的克隆及其在相关宿主中的表达，该酶的基因基因克隆自Thermobifida菌属，它能够在正常的生化反应条件下将麦芽糖转化为海藻糖，该酶的底物转化率会随着反应温度的降低而升高，它可以利用...; 韦宇拓黄日波蒙健宗卢福燊庞中文朱绮霞陈发忠罗兆飞卢运琨王青艳黄鲲; 文献传递

α-乙酰乳酸脱羧酶基因在枯草芽孢杆菌中的整合型表达被引量：7: 2010年; α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产中能加快啤酒成熟,有重要的应用价值。本研究将枯草芽孢杆菌启动子P43克隆到质粒pUC19-ALDC中的α-乙酰乳酸脱羧酶基因之前,得到重组质粒pUC19-P43-ALDC。重组质粒pUC19-P43-ALDC与质粒pMLK83-BN同源重组,筛选得到枯草芽孢杆菌整合质粒pMLK83-ALDC。用此整合质粒转化枯草芽孢杆菌1A751,挑选出新霉素抗性且无淀粉酶活性的重组菌株。此菌株用LB培养基在37℃、220r/min摇瓶培养过夜,测得α-乙酰乳酸脱羧酶活力为15.6U/mL,说明整合的α-乙酰乳酸脱羧酶基因能够在重组菌株中稳定传代和表达。本研究首次在枯草芽孢杆菌中用整合型的方式重组表达了α-乙酰乳酸脱羧酶,提出了一种有潜力的生产α-乙酰乳酸脱羧酶的新方法。; 廖东庆陈发忠岳田芳张云光黄日波李晓明; 关键词：Α-乙酰乳酸脱羧酶枯草芽孢杆菌同源重组

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陈发忠