陈小芳
- 作品数：9 被引量：7H指数：2
- 供职机构：福建医科大学附属协和医院更多>>
- 发文基金：福建省科技创新平台建设项目福建省科技厅基金项目福建省临床重点专科建设项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组FN多肽在制备败血症等严重感染疾病的药物中应用
- 本发明公开了重组纤维连接蛋白N端肝素结合域多肽和C端肝素结合域多肽，所述的N端肝素结合域多肽是由FN分子中N端的五个I型同源结构组成，含有从Ser46－Gly282的237个氨基酸；编码该多肽的DNA序列从403bp到1...
- 陈元仲邹起练吴勇郭江睿陈小芳
- 文献传递
- PML-RARα融合基因不同亚型急性早幼粒细胞白血病的临床特征被引量：1
- 2019年
- 目的探讨PML-RARα不同亚型的急性早幼粒细胞白血病(APL)患者的临床特征及预后。方法收集福建医科大学附属协和医院2013年2月至2016年7月收治的78例初诊APL患者的临床资料,分析PML-RARα不同亚型患者的临床特征及预后。结果78例患者中,女性32例,男性46例,中位年龄40岁(13~68岁)。最常见的PML-RARα融合基因为L型(48.7%,38/78),其次为S型(46.2%,36/78)和V型(5.1%,4/78)。S型患者中白细胞计数>10×10^9/L(高危)者最多见(61.1%,22/36),与V型、L型比较,差异有统计学意义(χ^2=7.683,P<0.05)。78例中,合并CD34阳性8例(10.2%),合并FLT3-内部串联重复(ITD)突变17例(21.8%),合并DNMT3A突变12例(15.4%),附加染色体异常9例(11.5%);3种不同亚型间CD34阳性、FLT3-ITD、DNMT3A以及附加染色体异常发生率差异无统计学意义(P>0.05)。S型患者治疗期间发生维甲酸综合征(RAS)最多见(21/36),L型及V型较少发生(χ^2=7.633,P<0.05)。PML-RARα不同亚型患者间完全缓解率以及无病生存率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论PML-RARα不同亚型APL患者临床特点不尽相同,L型最常见,V型、S型中高危者多见,S型治疗期间合并RAS多见,不同亚型对完全缓解率及无病生存率无影响。
- 翁萍张淑遐陈小芳徐淑娟郭江睿何志鹏吴勇
- 关键词：基因融合PML-RARΑ
- 重组纤维连接蛋白N端肝素结合域多肽抗内毒素所致小鼠肝衰竭的作用被引量：1
- 2009年
- 目的通过动物实验研究重组纤维连接蛋白N端肝素结合域多肽（rhFNHN-29多肽）对内毒素血症肝衰竭的治疗作用。方法用内毒素脂多糖（LPS，Sigma）和半乳糖胺（Galactosamine GaIN，Sigma）注射小鼠腹腔，建立内毒素血症肝衰竭小鼠模型。实验小鼠随机分两组，1组为rhFNHN-29多肽治疗组，1组为生理盐水对照组，另设正常对照组。治疗组分别于注射（LPS和GalN）前半小时，后1、2、3h尾静脉注射rhFNHN-29多肽10mr／kg，生理盐水对照组注射等体积生理盐水，正常对照组注射等体积生理盐水。腹腔注射药物6h，眶静脉采血检测小鼠血浆TNFα，72h后计算小鼠死亡率，处死活鼠，取其肝、肾、脾、肺、心、脑组织进行病理组织学观察，肝组织做电镜超微结构观察，取肝组织对其TNFα、IL-1β、IL-6的表达进行PCR分析。结果生理盐水对照组小鼠72h死亡率为70％，多肽治疗组死亡率仅为15％。病理组织学观察显示生理盐水对照组肝组织呈广泛变性与严重坏死，多肽治疗组肝组织呈小面积变性和轻微坏死。电镜超微结构显示生理盐水对照组肝细胞呈严重的变性和坏死，多肽治疗组轻微变性。肝细胞因子表达分析显示多肽治疗组小鼠的TNFα、IL-1β、IL-6mRNA表达水平及血浆TNFα水平（0．86±0．43，0．86±0．31，0．27±0．13和23．6±5．8，P〈0．01）显著低于生理盐水对照组小鼠的水平（1．26±0．37，0．98±0．21，0．43±0．17和87．43±16．7，P〈0．01）。结论rhFNHN-29多肽对内毒素血症肝衰竭具有明显的预防和治疗作用，其作用机制可能与多肽的抗炎等作用有关。
- 邹起练郭江睿陈小芳陈显凌陈萍黄关娟陈元仲
- 关键词：连接蛋白类肽类内毒素血症肝功能衰竭
- 纤维连接蛋白肝素结合域多肽在昆虫表达系中表达及活性鉴定
- 2008年
- 目的:将纤维连接蛋白N端和C端两个肝素结合域基因片断克隆至昆虫表达系统中进行表达,分离纯化所表达多肽并进行多肽结合肝素、FN抗原性和抗血小板减少内毒素血症活性鉴定。方法:用高保真PCR技术从FNcDNA中扩增目的基因片段,将目的基因片段克隆至昆虫表达系的Bac-to-Bac HT Vector,在E.coliDH5α中抗氨苄青霉素选择,挑选阳性菌斑通过PCR、酶切鉴定和DNA序列测定,确定无误,再扩增提取质粒,进一步转染MAX Efficiency DHIOBac^(TM)Competent E.coli,经三种抗菌素(卡那、庆大、四环素)联合IPTG、X-gal蓝白斑选择,挑取阳性白色菌斑提取质粒,PCR、酶切鉴定和DNA序列测定,确定无误,转染Sf 9昆虫细胞获取重组杆状病毒,重组杆状病毒再次转染Sf9昆虫细胞表达多肽。裂解Sf9昆虫细胞,SDS-PAGE分析裂解上清,镍离子亲和树脂分离纯化表达的多肽,Western blot鉴定多肽结合肝素和FN抗原性活性。动物实验探讨rhFNHC-36多肽抗血小板减少内毒素血症的作用。结果:纤维连接蛋白N端和C端两个肝素结合域多肽均在昆虫表达系统中得到表达,所表达的多肽具有与肝素结合的能力而不具FN抗原性。动物实验初步显示rhFNHC-36多肽具有抗血小板减少内毒素血症的作用。结论:在昆虫表达系统中表达纤维连接蛋白N端和C端两个肝素结合域多肽是可行的,所表达多肽具生物活性,但表达量尚较低,有待进一步优化表达以提高表达量。
- 邹起练陈元仲陈小芳吴勇陈萍黄美娟
- 关键词：纤维连接蛋白多肽
- TCP1表达对HL60和HL60/A 细胞增殖及细胞内药物蓄积的调控作用及其机制
- 2024年
- 目的:研究TCP1表达对HL60及HL60/A细胞增殖及细胞内药物蓄积的影响及其机制。方法:利用慢病毒转染技术构建敲低、过表达TCP1的HL60/A细胞和HL60细胞及其对照组细胞,Western blot评估敲低、过表达效率。采用CCK-8法检测细胞增殖能力;激光共聚焦显微镜及流式细胞术检测细胞内的药物蓄积;流式细胞术及Western blot检测膜转运蛋白(MRP1、P-gP)及p-AKT的表达水平。结果:在HL60/A细胞中敲低TCP1的表达能够抑制细胞增殖,增加细胞内药物蓄积,降低转运蛋白MRP1及P-gP的表达,在HL60细胞中过表达TCP1能够促进细胞的增殖,减少细胞内药物蓄积,提高转运蛋白MRPI及P-gP的表达。同时利用PI3K抑制剂LY294002抑制PI3K/AKT信号能够拮抗TCP1过表达所致的细胞增殖活性增强、细胞内药物蓄积减少及MRP1、P-gP表达的升高。结论:TCP1能够促进细胞增殖,并通过激活PI3K/AKT信号促进转运蛋白MRP1、P-gP的表达,降低细胞内的药物蓄积。
- 陈小芳陈显凌陈元仲
- 关键词：急性髓系白血病MRP1P-GPPI3K/AKT信号通路
- 纤维连接蛋白N端肝素结合域多肽的制备及其对DIC大鼠的治疗作用被引量：1
- 2010年
- 本研究利用酵母表达系统制备纤维连接蛋白(fibronectin,FN)N端肝素结合域多肽,检测多肽的生物学活性,进行多肽治疗DIC大鼠的实验研究。利用PCR技术从FNcDNA中扩增FN N端肝素结合域序列,将获得的目的基因片段克隆至T载体,筛选后转移至酵母表达pAo815SM载体进行选择,再构建重组酵母表达pPIC9K载体,线性化重组载体并转染GS115酵母细胞,在GS115酵母细胞表达目的多肽。发酵液经80%硫酸胺沉淀,沉淀物过S-100柱分离纯化,纯化物再经过SP柱纯化,测定多肽结合肝素等生物学活性。股静脉注射内毒素脂多糖(LPS)50mg/kg建立大鼠DIC模型。建立的DICSD大鼠40只,随机分2组,每组20只,一组为rhFNHN-29多肽治疗组,另一组为生理盐水对照组。治疗组分别于注射LPS前半小时、注射后2小时、4小时尾静脉注射rhFNHN-29多肽(10mg/kg);生理盐水对照组注射等体积生理盐水。另设正常对照组SD大鼠20只,注射等体积生理盐水作为正常对照组。各组大鼠于股静脉注射LPS后6小时,对侧股静脉抽血测血常规,分离血浆检测血浆TNFa和凝血象。于注射LPS后72小时处死大鼠,取肝、肾、脾、肺、心、脑组织进行病理组织学检查。结果表明:成功地在酵母表达系中表达了目的多肽,其表达量达到30mg/L,所表达的多肽具有结合肝素活性。在多肽抗DIC作用的动物实验中发现多肽治疗组的血浆TNFa水平、血常规指标、凝血象和病理组织学的改变都较生理盐水对照组更接近正常对照组。结论:成功地制备了rhFNHN-29多肽,这种多肽能在一定程度上预防和治疗DIC。
- 邹起练郭江睿陈小芳黄美娟吴勇陈元仲
- 关键词：纤维连接蛋白酵母表达系统弥漫性血管内凝血
- 纤维连接蛋白细胞结合区功能多肽在杆状病毒表达系统中的表达与纯化被引量：1
- 2008年
- 目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达纤维连接蛋白(FN)细胞结合区功能多肽(CBD),并对其进行纯化和鉴定。方法:经PCR获得人血浆FN-CBD基因,酶切后定向克隆到T载体上,经测序正确后插入pFastBacHTB载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞;用抗生素平板筛选重组杆粒,脂质体介导重组杆粒转染sf9昆虫细胞并进行蛋白表达;经Ni-NTA层析柱对重组多肽进行纯化,对纯化的多肽行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果:得到融合6个组氨酸残基的FN-CBD,SDS-PAGE显示其相对分子质量约为36000,Western-blot表明该多肽能与FN的多克隆抗体结合。结论:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统能成功表达出人血浆FN-CBD,且表达产物具有良好的免疫原性,为后续结构、功能研究奠定了基础。
- 陈小芳陈元仲邹起练陈显凌
- 关键词：纤维连接蛋白杆状病毒表达系统蛋白纯化
- ZnPcS_2P_2在K562和HL-60细胞中的定位研究被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨ZnPcS2P2在K562细胞,HL-60细胞亚细胞结构中的精确定位,揭示光动力学疗法(photody-namic therapy,PDT)的作用机制。方法:将K562细胞,HL-60细胞与ZnPcS2P2共同孵育5 h。应用激光扫描共聚焦显微成像系统,选择特异性细胞器荧光探针(线粒体探针若丹明Rodanmine123、溶酶体探针LysoTrackerDND-26、内质网探针Dioc6(3)采用波形比较法对光敏剂进行亚细胞定位。结果:ZnPcS2P2在K562细胞,HL-60细胞中发出的荧光与负载的Rodanmine123、Lyso-TracKer DND-26、Dioc6(3)均有部分重叠,波形均有相似之处。ZnPc-S2P2在线粒体、溶酶体、内质网均有分布。结论:线粒体是ZnPcS2P2介导的PDT(ZnPcS2P2-PDT)光损伤的主要靶点,溶酶体、内质网也是ZnPcS2P2-PDT光损伤的靶点。
- 陈显凌陈元仲黄慧芳陈荣陈小芳黄祖芳
- 关键词：激光共聚焦光敏剂亚细胞定位
- 纤维连接蛋白C端肝素结合域多肽在毕赤酵母中的表达、纯化及鉴定被引量：2
- 2012年
- 为在毕赤酵母中表达纤维连接蛋白C端肝素结合域(Fibronectin C-terminal heparin-binding domainFNCHBD)多肽并研究其功能,通过PCR技术扩增FNCHBD目的基因,将目的基因与T载体连接,经测序正确后,插入pAo815SM酵母表达载体增加基因拷贝数,然后酶切克隆入酵母表达载pPIC9K;将重组质粒Sal I酶切线性化后转化毕赤酵母菌株,筛选工程菌,经甲醇诱导表达,用SDS-PAGE检测发酵上清液,表明有重组蛋白FNCHBD多肽的高表达,表达产物通过离心、超滤、离子交换层析纯化,纯化产物通过SDS-PAGE、Western blotting印迹、质谱及肝素亲和层沉析对表达产物进行鉴定。结果表明利用酵母工程菌成功表达和纯化了FNCHBD多肽,多肽的分子量接近32 kDa,纯化产物的纯度可达95%以上,能被FN多克隆抗体特异识别且具有多肽肝素结合活性,为后续结构及功能的研究奠定基础。
- 陈小芳陈显凌邹起练吴勇陈元仲
- 关键词：纤维连接蛋白毕赤酵母表达纯化
