陈继德
- 作品数：19 被引量：12H指数：3
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 约氏疟原虫红外期发育相关基因的研究
- 2006年
- 目的寻找约氏疟原虫红外期发育相关基因,进行序列分析并推测其功能。方法分别提取约氏疟原虫感染大鼠(IL)和正常大鼠(UL)肝脏总RNA,根据疟原虫基因A+T含量高( >70%)的特点,设计可选择性扩增约氏疟原虫基因的G+C含量为40%的引物,采用差异显示PCR(differential display RT-PCR,DD-PCR)技术进行扩增,筛选差异片段,经TA克隆后测序并进行序列分析。结果找到6个与约氏疟原虫红外期发育相关基因(PyHs4、PyHs5、PyHs6、PyHs7、PyHs8、PyHs9);其中PyHs4与约氏疟原虫乙酰葡萄糖胺磷酸变位酶(phosphoacetylglucosamine mutase,AGM)具有相似性,PyHs5与约氏疟原虫红细胞膜蛋白3(erythrocyte membrance protein,PyHs5)具有同源性,PyHs6、PyHs7、PyHs8、PyHs9为功能未知基因。结论应用DD-PCR技术成功扩增了与约氏疟原虫红外期发育相关基因,为进一步的重组表达进功能和疫苗研究奠定基础。
- 宋蓓张锡林段建华陈继德姚玉淑
- 关键词：红细胞外期差异基因
- 媒介按蚊抗疟原虫感染的免疫相关基因研究进展
- 2005年
- 陈继德何瑛张锡林
- 关键词：抗疟原虫感染基因研究进展免疫相关基因媒介按蚊疟疾防治模式识别受体
- 大劣按蚊感染约氏疟原虫defensins基因的克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2011年
- 目的为探讨大劣按蚊对约氏疟原虫侵入的免疫反应,克隆大劣按蚊的抗菌肽defensins基因并对基因序列进行生物信息学分析。方法分别提取感染疟原虫的大劣按蚊的蚊胃总RNA,根据冈比亚按蚊defensins基因设计、合成简并引物,进行RT-PCR扩增目的片段,TA克隆后测序并进行序列分析。结果用简并引物的RT-PCR扩增出约氏疟原虫感染的大劣按蚊的189bp目的片段,序列分析表明与冈比亚按蚊defensins有87%同源性,与白蚊伊蚊defensinsD有88%同源性,为大劣按蚊的defensins基因。结论成功克隆并分析了大劣按蚊抗菌肽defensins基因,为进一步的重组表达和研究按蚊抗菌肽的生物活性奠定基础。
- 张锡林王英陈继德宋蓓
- 关键词：大劣按蚊克隆
- 约氏疟原虫环子孢子蛋白对TNF-α刺激人肝癌细胞株核转录因子活化的抑制作用被引量：3
- 2009年
- 目的观察约氏疟原虫环子孢子蛋白(CSP)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激人肝癌细胞株HepG2核转录因子-κB(NF-κB)活化的影响。方法以约氏疟原虫BY265株子孢子总RNA为模板,用RT-PCR扩增CSP基因的编码区序列并克隆至pFLAG-CMV8载体,构建重组质粒pFLAG-CMV8-CSP。以兔抗CSP多克隆抗体间接免疫荧光法观察pFLAG-CMV8-CSP能否在HepG2细胞中正确表达,及其在细胞中的分布。实验分为3组,A组(阴性对照组)为转染质粒pFLAG-CMV8的HepG2细胞,B组以100ng/ml TNF-α刺激转染质粒pFLAG-CMV8的HepG2细胞,C组以100ng/ml TNF-α刺激转染质粒pFLAG-CMV8-CSP的HepG2细胞。采用双荧光素酶试验和凝胶迁移试验(EMSA)检测NF-κB的核转位及其活化,观察pFLAG-CMV8-CSP对于TNF-α刺激HepG2细胞活化NF-κB是否具有抑制作用。结果质粒pFLAG-CMV8-CSP主要在HepG2细胞胞浆中表达。检测HepG2细胞浆中NF-κB活性,C组萤火虫荧光素酶活性与海肾荧光素酶活性比值为0.228±0.029,明显低于B组(0.571±0.030)和A组(0.438±0.085)(P<0.05)。EMSA结果显示,C组的条带明显弱于B组。结论位于细胞浆中的疟原虫CSP蛋白通过抑制NF-κB核转位,从而抑制TNF-α刺激HepG2细胞活化NF-κB。
- 丁艳陈继德周桃莉付雍彭小红徐文岳
- 关键词：约氏疟原虫环子孢子蛋白核转录因子-ΚB人肝癌细胞株
- 约氏疟原虫235ku多基因家族的基因克隆和序列分析
- 2006年
- 目的克隆约氏疟原虫不同虫期235 ku棒状体蛋白(Plasmodium yoelii yoelii235 ku rhoptry proteins,Py235)的基因,并对其进行序列测定和分析。方法根据疟原虫棒状体235 ku蛋白的基因序列,设计引物。用Tri-pure与氯仿等试剂提取不同时相点的约氏疟原虫总RNA,逆转录合成cDNA,用PCR的方法扩增Py235基因片段。将获得的预期大小的PCR产物插入PMD18-T克隆载体,转化XL1-Blue感受态细胞,蓝白筛选白色克隆,进行体外扩增,提取质粒,进行酶切鉴定,对含有目的插入片段的克隆进行序列测定。结果从不同侵入虫期的疟原虫总RNA中成功克隆出292 bpPy235基因片段,测序结果与GeneBank报道序列具有很高的相似性。结论在疟原虫235 ku多基因家族,不同侵入虫期疟原虫Py235基因的mRNA转录与表达具有一定的遗传稳定性,但表型也有变异,从而获得侵入不同宿主细胞的功能。
- 陈继德张锡林宋蓓段建华
- 关键词：疟原虫基因克隆
- 蚊期和红内期持续表达绿色荧光蛋白的重组约氏疟原虫被引量：3
- 2009年
- 目的构建蚊期、红内期持续表达绿色荧光蛋白(GFP)的约氏疟原虫BY265株。方法用SacⅡ酶酶切含有伯氏疟原虫ssu-rrna基因和GFP基因的重组质粒pl0017使之线性化,用电转化的方法将该重组质粒转化入红内期约氏疟原虫BY265株,获BY265-EGFP重组疟原虫,尾静脉注射感染昆明小鼠,24～30h后用乙胺嘧啶饲喂小鼠5～6d,鼠尾静脉采血涂片观察原虫感染率。以疟原虫基因组DNA为模板,PCR鉴定转染重组质粒pl0017的约氏疟原虫。斯氏按蚊叮咬感染BY265-EGFP重组疟原虫的小鼠,按蚊血餐后第7天和第16天解剖蚊胃和唾液腺,观察疟原虫能否在蚊体内正常发育。结果荧光显微镜观察到呈绿色荧光的红内期各期形态正常的约氏疟原虫。PCR检测结果表明,GFP和ssu-rrna基因已成功整合到约氏疟原虫基因组中。按蚊感染实验证实重组BY265株能在蚊体内正常发育。结论构建了蚊期、红内期持续表达绿色荧光蛋白的约氏疟原虫。
- 付雍丁艳周桃莉陈继德彭小红徐文岳
- 关键词：红内期绿色荧光蛋白约氏疟原虫
- TLRs激动剂抑制红外期疟原虫增殖及其机制研究
- 类铎受体(Toll-like receptors,TLRs)是模式识别受体(Pattern-recognition receptors,PPRs)家族中重要的组成部分,与病原体的特征性分子(pathogen associ...
- 陈继德徐文岳周桃莉丁艳黄复生
- 文献传递
- 小鼠尾静脉注射辅助装置
- 本实用新型涉及一种小鼠尾静脉注射辅助装置，其关键在于，包括一个具有管口的管体和一个盖在管口上的管盖，所述管体上开有至少一个透气孔，所述管盖中间开有一个穿孔；所述管体的材质为透明塑料。本实用新型结构简单，方便携带和方便操作...
- 周桃莉徐文岳陈继德丁艳付雍
- 文献传递
- 大劣按蚊丝氨酸蛋白酶与疟原虫感染相关性研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨大劣按蚊血淋巴中丝氨酸蛋白酶与约氏疟原虫感染的相关性。方法首先利用二维电泳分离感染约氏疟原虫的和吸食正常血的大劣按蚊血淋巴蛋白;然后进行Western blot,用丝氨酸蛋白酶抗体进行识别,并比较感染组与正常对照组间的区别;选择感染后不同时相点对大劣按蚊蚊胃和唾液腺进腺镜检,以观察蚊体内疟原虫情况。结果Western blot显示,正常对照组无阳性蛋白点,感染组有2个阳性蛋白点,分子质量单位分别为44ku和27ku,等电点分别为8.0和5.0;镜检显示,感染7d时可见卵囊颗粒样病变,11d时卵囊发育不同步且黑化明显,之后检出的卵囊数逐渐减少。蚊唾液腺内未见子孢子。结论大劣按蚊血淋巴中的丝氨酸蛋白酶与约氏疟原虫感染相关,可能参与蚊抗疟原虫感染的黑化包被反应。
- 王英李松张锡林陈继德周桃莉黄复生
- 关键词：大劣按蚊血淋巴丝氨酸蛋白酶
- 大劣按蚊血淋巴中疟原虫感染相关蛋白的cDNA克隆
- 2007年
- 疟疾是一种严重的传染病,大劣按蚊是我国及东南亚地区的重要传疟媒介。对大劣按蚊抗疟原虫感染分子机制的研究,具有重要意义。我们先前已成功分离了大劣按蚊血淋巴中约氏疟原虫感染相关蛋白(PIRP1),并对该蛋白进行了质谱检测。本研究在已获得PIRP1质谱检测信息的基础上,利用分子生物学技术,成功克隆了该相关蛋白的部分cDNA序列(GenBank序列号为EF409973)。为下一步对该蛋白的功能研究奠定了基础。
- 王英黄复生段建华周桃莉陈继德
- 关键词：大劣按蚊约氏疟原虫克隆血淋巴
