陈莉莉 作品数:24 被引量:129 H指数:6 供职机构: 华中科技大学同济医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 湖北省科技攻关计划 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
冠心病患者心肌脂肪酸结合蛋白水平的变化及其临床意义 2006年 目的探讨冠心病患者血浆心肌脂肪酸结合蛋白(H-FABP)的水平变化及其临床意义。方法选择78例胸痛发作6小时内的冠心病患者,其中急性心肌梗死(AMI)32例、不稳定性心绞痛(UAP)24例、稳定性心绞痛(SAP)22例,并选69例健康体检者为对照组。采用夹心ELISA法检测H-FABP含量。结果AMI组的H-FABP水平(78.58ng/ml±52.2ng/ml)明显高于UAP组(12.57ng/ml±5.80ng/ml),P<0.01、SAP组(3.52ng/ml±2.29ng/ml)和对照组(3.30ng/ml±1.56ng/ml),P<0.01;UAP组的H-FABP水平明显高于SAP组和对照组,P<0.01;SAP组和对照组的H-FABP水平比较无差异(P>0.05)。结论血浆H-FABP水平可作为心肌坏死或损伤的早期判断指标,可为冠心病患者的危险分层及治疗提供依据。 陈莉莉 谢红艳 郭小梅关键词:心肌脂肪酸结合蛋白 心肌梗死 心绞痛 腺病毒介导的线粒体融合素基因-2诱导大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞凋亡 被引量:10 2006年 目的研究腺病毒介导的线粒体融合素基因2(mitofusin2gene,Mfn2)对大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)凋亡的影响。方法建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,用携带大鼠Mfn2基因(rMfn2)的重组腺病毒Adv rMfn2GFP和含有绿色荧光蛋白基因的对照腺病毒Adv GFP分别感染球囊损伤动脉段,以磷酸缓冲液(PBS)作为未感染对照组,假手术组作为正常对照组,采用免疫组织化学方法检测外源基因表达水平;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞;Image Pro图像分析系统进行血管定量组织形态学分析。结果病毒感染后5d,免疫组织化学证实Adv rMfn2GFP组Mfn2蛋白表达水平明显;TUNEL染色显示,Adv rMfn2GFP组的VSMCs凋亡率明显高于PBS组和Adv GFP组,假手术组未见TUNEL阳性VSMCs(n=10,P<0.01);感染后21d,Adv rMfn2GFP组的血管内膜面积及内膜中膜面积比明显低于对照组(n=10,P<0.01)。结论高表达Mfn2基因可诱导大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞凋亡。 廖华 曹文静 陈莉莉 陈光慧 郭小梅关键词:线粒体融合素基因-2 血管平滑肌细胞 凋亡 腺病毒科 去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因与血管平滑肌细胞增殖(英文) 被引量:2 2010年 背景:线粒体融合素2基因作用于血管平滑肌细胞Ras蛋白,通过胞外信号调节蛋白激酶1/2通路抑制细胞增殖。线粒体融合素2基因氨基酸序列第442位丝氨酸为蛋白激酶A磷酸化位点,与其磷酸化状态密切相关,可能参与其功能调控。目的:观察大鼠线粒体融合素2基因在去除蛋白激酶A磷酸化位点后对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其相关信号通路。方法:利用已构建的携带绿色荧光蛋白基因、线粒体融合素2基因和去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因的3种重组腺病毒,感染大鼠主动脉血管平滑肌细胞,将其传代培养3~10代后以抽签法随机分为4组:①不加干预的对照组。②感染携带绿色荧光蛋白的对照组(Adv-GFP组)。③感染携带线粒体融合素2基因的实验组(Adv-Mfn2组)。④感染携带去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因的实验组(Adv-Mfn2-PKA(△)组)。激光共聚焦显微镜观察完整的和去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因在细胞中的定位。Westernblot检测p-ERK1/2表达水平及完整的和去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因在血管平滑肌细胞中的表达。MTT法绘制细胞生长曲线。结果与结论:完整的和去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因在血管平滑肌细胞中均表达蛋白特异性条带。两种基因表达产物都主要分布于线粒体外膜。与对照组和Adv-GFP组相比,Adv-Mfn2组吸光度值在第3,4,5,6天都显著降低(P<0.01),Adv-Mfn2-PKA(△)组吸光度值无明显变化。与对照组和Adv-GFP组相比,Adv-Mfn2组p-ERK1/2表达水平显著降低(P<0.01),Adv-Mfn2-PKA(△)组无明显变化。提示去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因定位于线粒体外膜,对血管平滑肌细胞的增殖无拮抗作用,对胞外信号调节蛋白激酶1/2通路无抑制作用。 周炜 曹文静 陈莉莉 郭小梅 陈光慧关键词:血管平滑肌细胞 增殖 磷酸化 成年大鼠心肌细胞分离方法的改良 被引量:14 2009年 背景:目前多采用酶解法分离成年大鼠心肌细胞,但在灌流装置、灌流液体和灌流方法等方面的差异较大,且多以单个细胞的急性分离为目的,仅适于进行电生理研究。目的:建立稳定的改良成年SD大鼠心肌细胞分离方法,使之适于进行原代培养和研究。设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2008-03/09在华中科技大学同济医学院附属同济医院分子心脏病中心完成。材料:8~10周龄雄性SD大鼠30只,由同济医学院实验动物中心提供,Ⅱ型胶原酶、蛋白酶和不含脂肪酸的牛血清白蛋白分别为美国Worthington公司、美国Sigma公司和德国Merck公司产品。方法:SD大鼠麻醉后,快速取出心脏,采用改良的Langendorff灌流装置行主动脉逆行灌注,无钙Krebs-Henseleit缓冲液(KH液)非循环灌流4min,0.6g/LWorthington2型胶原酶联合0.03g/L蛋白酶消化约15min,剪下心室组织于消化液和10g/L牛血清白蛋白的混合液中,剪碎后于37℃振摇孵育10min,200μm尼龙网过滤,500g离心1min,梯度复钙,自然沉降。主要观察指标:心肌细胞的形态、活力和产量。结果:复钙后的杆状存活心肌细胞得率为(73±5.6)%(n=30),其中90%以上的杆状心肌无明显搏动,横纹清晰。每只大鼠心脏的平均存活心肌细胞产量为(4.2±0.4)×106。结论:经过改良的Langendorff逆行主动脉灌流酶解法分离成年大鼠心肌细胞,可稳定获得高比例的存活心肌细胞并用于原代培养和细胞/分子生物学研究。 廖华 糜涛 涂志业 陈莉莉 郭小梅关键词:心肌细胞 细胞分离 细胞培养 EPO对缺血/再灌注损伤大鼠心肌细胞Mfn2蛋白表达及心肌细胞凋亡的影响 被引量:6 2009年 目的观察重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)对缺血/再灌注损伤大鼠心肌细胞Mitofusin2(Mfn2)蛋白表达的影响及其抗心肌细胞凋亡的作用。方法选取成年SD大鼠35只,随机分为正常组(Normal),假手术组(Sham),缺血再灌注组(I/R),缺血再灌注EPO治疗组(I/R+EPO)。各组分别于再灌注3h和24h后,剪取心脏缺血/再灌注损伤区域,用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测Mfn2蛋白的表达。结果再灌注3h和24h后,与正常组和假手术组相比,I/R组Mfn2蛋白的表达和心肌细胞凋亡均显著增加;与I/R组相比,I/R+EPO组Mfn2蛋白的表达和心肌细胞凋亡均显著降低。结论EPO可以下调缺血再灌注损伤后心肌细胞Mfn2蛋白的表达,抑制心肌细胞的凋亡。 杨世明 孙瑜 涂志业 糜涛 陈莉莉 郭小梅关键词:心肌细胞 凋亡 线粒体融合素2突变体对血管平滑肌细胞凋亡的影响 被引量:4 2010年 目的研究大鼠线粒体融合素2(mitofusin 2,Mfn2)基因蛋白激酶A(PKA)磷酸化位点的2种突变体对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡及其相关的信号通路的影响。方法构建4种重组腺病毒,分别携带磷酸化位点突变为丙氨酸(重组1组)、Mfn2基因(重组2组)、突变为天冬酰胺(重组3组)和半乳糖苷酶基因(对照组),感染培养的VSMCs,另设未感染腺病毒的空白组。流式细胞术比较各组细胞的凋亡率,JC-1染色法检测线粒体膜电位变化,Western blot分析各组Mfn2蛋白的表达以及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和活性半胱天冬酶9(caspase-9)表达。结果与空白组和对照组比较,重组1组、重组2组和重组3组Mfn蛋白显著增加(P<0.01);重组1组和重组2组细胞凋亡率显著增强(P<0.01);线粒体膜电位显著降低(P<0.01);p-Akt表达水平显著降低(P<0.01),活性caspase-9表达水平显著增高(P<0.01);且重组1组作用较重组2组更明显(P<0.01);而重组3组上述指标无显著差异(P>0.05)。结论 Mfn2突变为丙氨酸的位点PKA通过Akt信号及线粒体途径诱导VSMCs凋亡的作用较Mfn2更明显,表明PKA磷酸化位点是调控Mfn2诱导VSMCs凋亡的重要功能位点。 周炜 曹文静 陈莉莉 郭小梅 陈光慧关键词:线粒体 点突变 细胞凋亡 蛋白激酶类 调脂胶囊与吉非贝齐对大鼠血脂代谢紊乱的调节作用 被引量:1 2001年 目的 :研究调脂胶囊对实验性血脂代谢紊乱SD大鼠血脂的调节作用。方法 :用调脂胶囊给实验性血脂代谢紊乱SD大鼠连续灌胃 3周 ,取空腹鼠血清 ,采用酶学法测定鼠血清TC、TG、LDL C、HDL3 C含量。结果 :调脂胶囊大、中、小剂量均极显著降低血脂代谢紊乱大鼠血清TC和LDL C值 (P <0 .0 1) ,其作用均显著优于大剂量吉非贝齐。结论 郭小梅 詹少卿 陈莉莉关键词:吉非贝齐 血脂代谢紊乱 脂蛋白 OxLDL诱导人血管内皮细胞及平滑肌细胞DNA加合物生成 被引量:2 2010年 目的探讨oxLDL参与动脉粥样硬化发生的可能机制。方法培养人血管内皮细胞及平滑肌细胞,以50μg/L oxLDL刺激24、48h后,收获细胞用于后续实验:①免疫组化染色检测DNA加合物εdA水平;②免疫组化方法检测细胞内4-HNE修饰蛋白;③western blot法检测细胞内4-HNE修饰蛋白水平。结果oxLDL刺激EC及SMC中DNA加合物εdA水平及4-HNE修饰蛋白水平均较未刺激细胞组明显升高。结果 oxLDL诱导的氧化应激、脂质过氧化反应及其继发的DNA损伤可能为oxLDL参与动脉粥样硬化发生的重要机制。 杨世明 王颖 陈莉莉关键词:氧化低密度脂蛋白 脂质过氧化作用 不同剂量重组人促红细胞生成素对心肌梗死大鼠血流动力学和梗死面积的影响 2009年 目的探讨不同剂量重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rHu—EPO)对心肌梗死大鼠血流动力学和左室梗死面积的影响。方法选取成年SD大鼠64只,随机分为假手术组、心肌梗死对照组、大剂量治疗组和小剂量治疗组。各组分别于术后24h和2周检测血流动力学指标和左室梗死面积。结果术后24h:与假手术组相比,心肌梗死对照组LVSP、LVEDP和±dp/dtmax显著恶化;与心肌梗死对照组相比,大、小剂量治疗组±dp/dtmax有显著改善。术后2周:与暇手术组相比,心肌梗死对照组LVSP、LVEDP和±dp/dtmax显著恶化;与心肌梗死对照组相比,大、小剂量治疗组±dp/dtmax有显著改善,梗死面积显著缩小;与大剂量治疗组相比,小剂量治疗组±dp/dtmax有显著改善。结论心肌梗死后即刻给予大剂量rHu—EPO,并术后减量维持治疗1周可明显缩小梗死面积,保护心功能,小剂量维持治疗的改善心功能效果更好。 涂志业 陈莉莉 孙瑜 曹文静 郭小梅关键词:重组人促红细胞生成素 心肌梗死 血流动力学 梗死面积 重组人促红细胞生成素对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡与线粒体融合基因2表达的影响 被引量:2 2011年 目的探讨不同剂量重组人促红细胞生成素(rHu-EPO)对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和线粒体融合基因2(Mfn2蛋白)表达的影响。方法将64只成年SD大鼠随机分为模型组、大剂量治疗组(负荷量rHu-EPO5 000 U.kg-1+rHu-EPO 1500 U.kg-1术后第2,4,6天腹腔注射)、小剂量治疗组(负荷量rHu-EPO 5000 U.kg-1+rHu-EPO 750 U.kg-1术后第2,4,6天腹腔注射)和假手术组,每组16只。分别于术后24 h和2周采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学法检测Mfn2蛋白表达。结果术后24 h假手术组、模型组、大剂量治疗组、小剂量治疗组心肌细胞凋亡指数分别为0,(60.99±5.28),(36.97±2.68),(38.10±3.41);Mfn2蛋白免疫组化染色平均吸光度分别为(0.080 6±0.013 4),(0.295 2±0.024 9),(0.125 3±0.020 9),(0.120 2±0.0197)。术后2周假手术组、模型组、大剂量治疗组、小剂量治疗组凋亡指数分别为0,(50.08±8.00),(26.54±2.97),(24.16±3.74),Mfn2蛋白免疫组化染色平均吸光度分别为(0.095 3±0.007 3),(0.247 3±0.019 1),(0.146 1±0.012 6),(0.154 2±0.010 6)。与假手术组比较,模型组凋亡指数和Mfn2蛋白表达显著增加(均P<0.05);与模型组比较,大、小剂量治疗组凋亡指数和Mfn2蛋白表达显著减少(均P<0.05);大剂量治疗组与小剂量治疗组凋亡指数和Mfn2蛋白表达差异无统计学意义。结论心肌梗死后即刻给予负荷剂量rHu-EPO并术后减量维持治疗1周可显著降低Mfn2蛋白表达,减少心肌细胞凋亡;rHu-EPO大、小剂量维持给药对Mfn2蛋白表达的调控作用和抗凋亡作用均差异无统计学意义。 孙瑜 涂志业 糜涛 王颖 赵金平 曹文静 陈莉莉 郭小梅关键词:重组人促红细胞生成素