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顾文源: 作品数：46 被引量：90H指数：6; 供职机构：河北省动物疫病预防控制中心更多>>; 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目河北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>

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河北部分地区致犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定与耐药性及系统进化发育分析被引量：4: 2018年; 随着养牛业规模的不断扩大,牛场引进犊牛数量的增多,犊牛腹泻的发病率和死亡率有着明显的上升趋势。许多病原微生物均可导致犊牛腹泻,其中大肠杆菌是主要致病菌,占90%以上,大肠杆菌引起犊牛的肠道疾病,初期症状为腹泻、脱水,严重时甚至会引起死亡,牛场内一旦发生该病,将严重影响犊牛生长、发育、产能,对养牛业的发展和经济效益造成严重的损失。; 王梦佳顾文源刘媛张薇刘莹李妍路广计李清艳左玉柱范京惠; 关键词：犊牛腹泻大肠杆菌进化发育耐药性病原微生物

一种死宰牛肉的鉴定方法: 本发明通过对血红蛋白残留和过氧化物酶活性进行双标检测，同时测定待测样本中过氧化物酶的浓度C1以及血红蛋白的浓度C2，通过公式R＝C2/C1</S...; 王增利韩庆安张若曦马贵达艾连峰顾文源李翀仇国明马宏伟董维亚吴秀楼康志勇赵彦岭林建涵张建虹张哲吴萌霍惠玲王建昌

河北省塞内卡病毒A VP2基因克隆和序列分析: 2022年; 为了解河北省塞内卡病毒A(SVA)VP2基因的变异及分子进化情况,试验设计了一对VP2基因扩增引物,通过RT-PCR方法扩增和克隆测序,利用MEGA 7.0软件对测序获得的VP2基因序列和GenBank上的参考序列进行遗传进化分析,运用MegAlign 5.0软件进行核苷酸和氨基酸同源性分析。结果表明:成功扩增并测序得到VP2基因序列,将该序列上传至GenBank,获得基因登录号为MZ031967,命名为SVA HB-BD株。该毒株与中国毒株核苷酸序列相似性为95.9%~99.6%;与原型毒株SVV-001(DQ64125-7核苷酸)相似性较低,为94.6%;与其他美国毒株(MN812946、MN812947、KC667560、MH704432、MN812938、MN812937、KU954086、NC011349)核苷酸相似性为93.0%~94.6%。SVA HB-BD株与2015—2016年分离毒株亲缘关系较近,处于同一分支,而与2017—2018年分离毒株亲缘关系较远。SVA HB-BD株与广东省分离毒株氨基酸序列相似性较高,并且在VP2蛋白中和表位位点高度保守。说明HB-BD株与中国毒株具有相同起源,并且在不断演变。; 王晶郭禹赵云环顾文源刘涛翟刚张帅王丙雷左玉柱范京惠; 关键词：VP2基因 PCR扩增遗传进化

CSFV、PRV和PRRSV多重PCR检测方法的建立及其应用被引量：9: 2019年; 由猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的繁殖障碍性疫病在中国的不断暴发,增加了猪的发病率和死亡率。为了建立同时检测这3种病毒的多重PCR方法,本研究根据GenBank中这3种病毒的参考基因序列设计引物,并对反应中的影响因素进行优化,建立了同时检测CSFV、PRV和PRRSV的多重PCR方法。该方法扩增的基因片段大小分别为570(CSFV),232 (PRRSV)和173bp(PRV)。敏感性和特异性试验结果显示,该方法对3种病毒的核酸最低检出量分别为23.88(CSFV),13.10(PRRSV)和14.60pg(PRV),对大肠杆菌(Ec.oli)、沙门菌(Salmonella)、猪乙型脑炎病毒(JEV)及猪圆环病毒2型(PCV2)的检测结果均为阴性。对2015年5月至2016年1月收集的168份临床样本检测结果显示,CSFV阳性率为24.4%,PRRSV阳性率为21.4%,提示河北省该段时间内引起猪繁殖障碍性疫病的主要病原为CSFV和PRRSV。经多重PCR检测为PRRSV、PRV或CSFV阳性的临床样本,再次使用商品化的试剂盒进行检测,符合率为100.0%。这些结果表明,本试验建立的多重PCR方法省时、高效,可用于PRRSV、PRV和CSFV感染的临床诊断。; 顾文源范京惠邸晶美罗尚星刘宝京左玉柱; 关键词：伪狂犬病病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒

奶牛的异常表现与健康状况评估: 2017年; 牛群的健康是保证其高产稳产的基础，奶牛的任何异常行为都表明其可能存在不同科度的健康隐患。本文根据奶牛养殖方面的经验及参考大量文献，把奶牛外部表现、体况、饮水产奶及消化代对情况等方面的异常表现与健康的关系进行总结，以供奶牛养殖者参考，希望对其有所帮助。; 邵丽玮王晓芳安永福薛振卫顾文源刘荣昌; 关键词：奶牛

A型塞内卡病毒VP2蛋白抗原区的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立: 2023年; 为建立高效的A型塞内卡病毒(SVA)的血清学检测方法,本研究经PCR扩增SVA VP2基因的优势抗原区域(VP2-1基因)后构建重组质粒p ET-32a-VP2-1,将其转化大肠杆菌感受态细胞并经IPTG诱导表达重组VP2蛋白(rVP2),表达产物经镍柱亲和层析法纯化后利用western blot鉴定,结果显示,在42 ku处出现特异性条带,表明r VP2可以与SVA阳性血清特异性反应。以r VP2为包被抗原,经反应条件的优化,建立了基于SVA VP2抗原区的间接ELISA抗体检测方法。本研究建立的间接ELISA检测方法的最适抗原包被浓度为2μg/mL,5%脱脂乳的PBST作为封闭液37℃孵育1 h,待检血清的最适稀释度为1∶500,兔抗猪Ig G-HRP稀释度为1∶10000,最佳显色时间为10 min。当检测样品的S/P值<0.201时,样品检测结果为阴性;当检测样品的S/P值≥0.201时,结果为阳性。利用该方法检测SVA,猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)等阳性血清,结果显示,除SVA检测为阳性外,其他病毒均为阴性,特异性较强。将SVA阳性血清2倍倍比稀释(1∶50,1∶100,1∶200,1∶400,1∶800,1∶1600)后经该间接ELISA方法检测,评估其敏感性,结果显示,SVA阳性小鼠血清在1∶800稀释后检测结果仍为阳性,敏感性较高。将同一批次和不同批次纯化的r VP2包被ELISA板,按照该ELISA方法检测8份猪SVA阳性血清,评估该方法的重复性。结果显示,批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,该方法重复性好。利用本实验建立的间接ELISA方法与血清中和试验同时对266份临床血清样品检测,结果显示,本研究建立方法检测的样品阳性率为19.1%,中和试验检测的样品阳性率为19.55%,两种方法检测结果符合率为97.7%。本研究首次基于SVA r VP2建立的间接ELISA方法操作简单、特异性强、敏感性高、重复性好,为SVA的检测和其感染的防控提供了可靠的技术支持。; 翟刚顾文源王晶刘莹赵云环刘涛刘涛张帅左玉柱; 关键词：VP2 间接ELISA

一种死宰牛肉的鉴定方法: 本发明通过对血红蛋白残留和过氧化物酶活性进行双标检测，同时测定待测样本中过氧化物酶的浓度C1以及血红蛋白的浓度C2，通过公式R＝C2/C1</S...; 王增利韩庆安张若曦马贵达艾连峰顾文源李翀仇国明马宏伟董维亚吴秀楼康志勇赵彦岭林建涵张建虹张哲吴萌霍惠玲王建昌; 文献传递

含牛轮状病毒VP6的嵌合型HBcAg颗粒抗原的制备及其免疫原性分析: 2021年; 本研究将编码牛轮状病毒VP6蛋白的部分基因插入到HBcAg的免疫显性区的基因中,构建了pET32a-HBcAg-VP6原核表达载体,并将其转化至大肠杆菌BL21中进行表达。重组蛋白经纯化和Western blot鉴定后,通过透射电镜观察重组蛋白HBc-VP6是否形成病毒样颗粒。以重组蛋白HBc-VP6皮下注射BALB/c小鼠,对免疫原性进行初步评价。结果显示:重组蛋白HBc-VP6在BL21中主要以沉淀的形式表达,经纯化、复性后的重组蛋白HBc-VP6能够自我折叠装配成病毒样颗粒结构,能够与BRV阳性血清发生特异性反应。重组蛋白HBc-VP6能够刺激小鼠产生抗BRV特异性抗体,同时可以产生相关的Th1型和Th2型细胞因子,试验结果证实,本研究成功制备了含VP6和HBcAg的重组蛋白HBc-VP6,并在小鼠模型中初步评价了其免疫原性,为今后牛轮状病毒疫苗的研制提供了新的思路。; 邢亚茹张增贤顾文源郭禹彭志豪左玉柱范京惠; 关键词：牛轮状病毒乙肝病毒核心抗原 VP6基因

牛胚胎性别鉴定荧光定量PCR方法的优化与应用被引量：1: 2021年; 旨在建立一种可检测牛早期胚胎性别的复合探针体系,减少常规PCR方法电泳所带来的污染,提高鉴定准确率,降低鉴定成本。本研究以SRY为牛胚胎性别鉴定的目标基因,以进口YCD-PCR性别鉴定试剂盒为对照组(n=9543),荧光定量PCR的单引物分别扩增体系(荧光单扩,FSPSA,n=6570)和双引物混合扩增体系(荧光双扩,FDPMA,n=22238)分别做试验组,从性别鉴定效率、无反应率、雌雄胚胎百分率和比值、移植妊娠率、雌性胚胎母犊率、不同细胞取样数下的性别鉴定结果和鉴定成本等方面进行各组间比较。结果表明,荧光单扩组的雌性胚胎百分率和性别鉴定效率极显著高于其他两组(P<0.01),无反应率极显著低于其他两组(P<0.01),雌雄胚胎比值与其他两组差异较大(1.03∶1 vs 1∶1.03和1∶1.02),雌性胚胎母犊率极显著低于荧光双扩组和对照组(P<0.01);荧光双扩组的雌性胚胎百分率、雄性胚胎百分率和雌性胚胎母犊率均与对照组无显著差异(P>0.05),雌雄胚胎比值与对照组相似(1∶1.03和1∶1.02),无反应率极显著低于对照组(P<0.01),性别鉴定效率极显著高于对照组(P<0.01)。取样细胞4~6组和7~10组的性别鉴定效率极显著高于1~3组和SD(separated&died cells)组(P<0.01),而1~3组和SD组之间及4~6组和7~10组之间差异不显著(P>0.05)。移植妊娠率4~6细胞组最高(49.68%),但各取样组间无显著差异(P>0.05)。荧光双扩法与对照组相比,鉴定成本下降了46.76%。结果显示,荧光双扩方法产母犊准确率最高,鉴定成本较低,取样4~6细胞时的移植妊娠率最高,是一种更可行的牛胚胎性别鉴定技术,更有利于产业化推广和应用。; 冯春涛顾文源顾文源赵增元朱宏波倪俊卿褚素乔余文莉李树静; 关键词：PCR 荧光定量PCR 胚胎性别鉴定

2022年~2023年上半年河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异分析: 2023年; 为了解当前河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及流行株的遗传变异情况,本研究利用荧光定量PCR方法对2022年~2023年上半年于河北省不同规模养猪场采集的229份疑似PRRSV感染猪的组织病料样品进行检测,结果显示,PRRSV阳性率为17.9%(41/229)。对鉴定的15株PRRSV ORF5基因进行测序、遗传进化分析、以及潜在的N-糖基化位点分析。结果显示,15株PRRSV ORF5基因序列的同源性为81.8%~99.8%,氨基酸序列的同源性为81.1%~100.0%;15株PRRSV均属于PRRSV-2型,其中的10株属于谱系1(Lineage 1),1株属于Lineage 5,4株属于Lineage 8;属于Lineage 5的HB-HD-2株为一株类RespPRRS MLV疫苗株。部分病毒株的GP5蛋白氨基酸序列毒力相关位点出现R13Q、R151I、R151K突变,属于Lineage 1的10株PRRSV GP5蛋白在诱骗表位出现V27A和V29A突变,在其它中和表位区及高变区也出现了不同程度的变异;糖基化位点分析结果显示,GP5蛋白在aa44~aa46、aa51~aa53位N-糖基化位点相对保守,在aa30~aa32、aa33~aa35、aa34~aa36和aa57~aa59发生了不同程度的突变。以上结果表明,当前河北省PRRSV流行株复杂多样,Lineage 1 PRRSV(NADC30-Like、NADC34-Like)正成为优势病毒株,猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)防控形势仍较为严峻。本研究为掌握当前河北省PRRSV的遗传变异情况,以及PRRS疫苗开发和防控提供了新数据和信息。; 顾文源张帅赵云环李思琪刘濮毓范京惠左玉柱; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传进化分析 GP5蛋白

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