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鸡传染性支气管炎病毒HH06株膜蛋白多克隆抗体制备及生物学功能研究被引量：4: 2014年; 文章通过RT-PCR方法扩增传染性支气管炎病毒(IBV)HH06株M全长基因,经抗原性和亲水性分析,将M部分序列成功亚克隆于pET-30a(+)和PVAX1载体中。将阳性重组质粒pET30a-M转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞,诱导表达获得20 ku重组M蛋白。Western blot检测表明,重组蛋白能够与IBV参考阳性血清反应。以纯化重组M蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,其ELISA效价达到1:218;Western blot结果证实,其具有良好的反应性和特异性。间接免疫荧光试验表明,抗M蛋白多克隆抗体可检测到PVAX-M1转染BHK-21细胞表达的M蛋白,与IBV HH06毒株具有很好的特异性反应。病毒感染抑制试验表明,多抗血清对IBV Beaudette株的抑制率可达到25.9%。为IBV检测及M蛋白功能的研究奠定基础。; 李广兴杜威威韩溪潘龙王新白妍洪琴马玲任晓峰杨贵君; 关键词：膜蛋白多克隆抗体间接免疫荧光试验免疫印迹试验

猪繁殖与呼吸综合征病毒HH08株NSP2蛋白多克隆抗体的制备及其生物学功能的研究被引量：4: 2013年; 利用RT-PCR和SOE PCR技术扩增得到猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HH08株NSP2全长基因,经抗原性和亲水性分析,将NSP2部分序列成功亚克隆于pET-30a(+)和PVAX1载体中。将阳性重组质粒pET30a-NSP2转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞,经诱导表达获得107ku的重组NSP2蛋白。Western-blot检测表明,重组蛋白能够与PRRSV参考阳性血清反应。以纯化的重组NSP2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,其ELISA效价达到1∶1015以上;Western-blot试验表明,其具有良好的反应性和特异性。间接免疫荧光试验显示,用抗NSP2多克隆抗体可以检测到PVAX-NSP2转染BHK-21细胞所表达的NSP2蛋白,且与经典型和高致病型PRRSV毒株均有很好的特异性反应。病毒感染抑制试验表明,多抗血清对PRRSV经典和高致病性毒株的抑制率可达到68%和53%。上述研究结果为PRRSV检测及NSP2蛋白功能的深入研究奠定了基础。; 马玲李广兴洪琴任玉东任晓峰; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2 多克隆抗体间接免疫荧光试验

猪PRRSV HH08株单克隆抗体制备及抗原捕捉ELISA方法建立: 猪繁殖与呼吸障碍综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respirat...; 马玲; 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征单克隆抗体免疫检测实时荧光定量; 文献传递

鸡堆型艾美尔球虫3-1E抗原表位的生物信息学预测被引量：4: 2015年; 应用生物信息学分析和预测鸡堆型艾美尔球虫3-1E蛋白二级结构和抗原表位,为确定和筛选优势表位,研制安全、高效表位疫苗奠定基础。以克隆获得的鸡堆型艾美尔球虫3-1E蛋白氨基酸一级结构为基础,采用DNAStar软件和生物信息学在线分析程序Prot Param、SOSUI、IEDB、SYFPEITHI等预测3-1E蛋白理化性质和二级结构,并分析其序列跨膜区、可溶性、亲水性、可及性、柔韧性参数以及抗原指数,预测B细胞表位和T细胞表位的可能区域。3-1E蛋白由170个氨基酸组成,分子式C818H1257N213O272S3,分子质量18.5234 ku,理论等电点为4.25,半衰期为10 h;无跨膜区均为膜外区,是一种可溶性蛋白。其二级结构中α螺旋占31.76%,β转角为12.35%。B细胞表位预测区域:44-49、65-67、86-87、111-116;分值较高的T细胞表位区域:52-60、94-102、97-105、154-162、157-165。运用生物信息学方法确定3-1E存在多个抗原表位,对进一步研究3-1E的抗原性和研发优势表位疫苗具有重要意义。; 李广兴丛培君潘龙马玲冯俪黄艺华任玉东黄小丹; 关键词：抗原表位生物信息学

鸡IL-18堆型艾美耳球虫3-1E-α-tubulin增强型核酸疫苗构建及免疫保护效果研究: (目的)为了探讨鸡球虫融合基因真核表达质粒对鸡抗球虫的免疫保护作用及鸡IL-18在鸡球虫病核酸疫苗中的免疫佐剂作用,（方法）本研究应用重叠扩增PCR（SOE PCR）技术成功地将堆型艾美耳球虫（Ea）3-1E基因和α-t...; 黄小丹李广兴张恒马玲张瑞莉马德星; 关键词：免疫保护

鸡IL-18堆型艾美耳球虫3-1E-α-tubulin增强型核酸疫苗构建及免疫保护效果研究: (目的)为了探讨鸡球虫融合基因真核表达质粒对鸡抗球虫的免疫保护作用及鸡IL-18在鸡球虫病核酸疫苗中的免疫佐剂作用,(方法)本研究应用重叠扩增PCR(SOE PCR)技术成功地将堆型艾美耳球虫(Ea)3-1E基因和α-t...; 黄小丹李广兴张恒马玲张瑞莉马德星; 关键词：免疫保护; 文献传递

鸡IL-18堆型艾美耳球虫3-1E-α-tubulin增强型核酸疫苗构建及免疫保护效果研究: 目的:为了探讨鸡球虫融合基因真核表达质粒对鸡抗球虫的免疫保护作用及鸡IL-18在鸡球虫病核酸疫苗中的免疫佐剂作用. 方法:本研究应用重叠扩增PCR(SOE PCR)技术成功地将堆型艾美耳球虫(Ea)3-1E基因...; 黄小丹李广兴张恒马玲张瑞莉马德星; 关键词：鸡球虫病真核表达质粒免疫保护; 文献传递

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马玲