魏钦俊
- 作品数：74 被引量：209H指数：8
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省高等学校大学生实践创新训练计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学轻工技术与工程更多>>
- 医学院校生物技术专业实验教学体系的改革与实践被引量：4
- 2010年
- 论述了医学院校生物技术专业进行实验教学体系改革的思路,提出新形势下生物技术专业的实验教学必须顺应社会需求,合理定位,体现特色,强化实践。结合教学实践,确立了"点、线、面至立体"的递进式实验教学新体系,并对该教学体系的进一步实施和完善进行了深入探讨。
- 姚俊曹新魏钦俊鲁雅洁
- 关键词：医学院校生物技术专业实验教学
- 基于CRISPR/Cas9技术建立敲除OSBPL2基因的HeLa细胞株被引量：2
- 2016年
- 目的 :利用CRISPR/Cas9技术构建OSBPL2基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法 :设计3个单导向RNA(singleguide RNA,sg RNA),分别靶向OSBPL2基因的第2、3和5外显子,以PGK1.1为载体,构建出3个重组真核表达载体。分别转染HeLa细胞后,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,Cruiser TM敲除检测实验和测序共同检验载体靶向效率。选出靶向效率最高的质粒转染HeLa细胞,进行单克隆细胞培养,最后用Western blot鉴定敲除效果。结果:sg RNA正确插入到PGK1.1载体,靶向第2外显子的重组载体转染HeLa细胞并筛选单克隆后,细胞未检测出OSBPL2蛋白的表达。结论:敲除OSBPL2基因的稳定HeLa细胞株构建成功。
- 陈庆鲁雅洁姚俊魏钦俊曹新
- 关键词：HELA细胞株
- 非综合征型耳聋GJB2基因和mtDNA 12SrRNA A1555G位点的突变分析被引量：16
- 2008年
- 目的:分析南京聋校散发性耳聋患者GJB2基因突变率和线粒体DNA(mtDNA)12SrRNA A1555G基因突变率。方法:收集聋校学生135名和健康对照人群162名外周血样本,PCR扩增GJB2和mtDNA 12SrRNA基因,通过限制性内切酶酶切鉴定突变热点,对PCR产物直接测序进行突变确定。结果:对GJB2检测结果显示:散发性耳聋患者样本中发现9种碱基改变(V27I、E114G、I203T V37I、176-191del16、235delC、299-300delAT、T123N和504insGCAA),其中235delC为主要突变方式,携带率为27.41%,其中纯合突变18例,杂合突变19例;162例正常对照中发现了15种碱基改变,其中4种为常见多态。散发聋135例和正常对照162例共计297例样本中未发现有mtDNA 12SrRNA A1555G位点突变存在;结论:GJB2基因突变是引起散发性非综合征耳聋患者听力损失发生的重要原因,不同人种GJB2基因的突变热点存在差异,235delC是GJB2基因在中国人中的主要致病突变位点;GJB2基因在人群中存在较多类型的突变和较多形式的多态性;在散发性耳聋中mtDNA 12SrRNA A1555G位点的突变率明显低于全国平均水平。
- 鲁雅洁程洪波邢光前曹新戴大春陈智斌冀强魏钦俊卜行宽
- 关键词：GJB2基因基因突变
- 乳腺癌组织中p16基因变异及CpG岛甲基化状态的研究被引量：13
- 2005年
- 目的探讨p16基因在乳腺癌中的纯合缺失、突变和甲基化的改变及与乳腺癌发生、发展的关系。方法采用PCR缺失分析、PCR-SSCP及甲基化敏感内切酶-PCR分析方法检测p16基因在39例乳腺癌组织变化状况,并结合临床病理资料进行分析。结果39例乳腺癌组织有6例出现p16基因纯合缺失,3例发生p16基因突变,p16基因变异频率为15.4%,5’CpG岛11例发生甲基化,甲基化率为28.2%。10例良性乳腺病组织中未发现p16基因改变和甲基化。p16基因变异频率、甲基化状态与临床分期和淋巴结转移密切相关。结论p16基因变异、甲基化是乳腺癌中常见的分子改变,它们在乳腺癌的发生、发展过程中扮演着重要的角色。
- 曹新魏钦俊姜玉章
- 关键词：基因P16DNA甲基化
- 一个母系遗传非综合征型耳聋家系线粒体12SrRNAG709A位点的突变分析被引量：2
- 2009年
- 目的通过对一个母系遗传非综合征型耳聋家系进行线粒体DNA（mitochondrialDNA，mtDNA）12SrRNA、tRNASer（UCN）以及核基因GJB2突变分析，研究mtDNA突变与遗传性耳聋的相关性。方法临床听力测试以明确诊断，收集非综合征型遗传性耳聋家系中18例母系成员和53名对照（包括6名父系亲属、7名配偶对照和40名当地无关对照）外周静脉血样本，采用聚合酶链反应和测序技术对mtDNA12SrRNA、浓NAser（UCN）和GJB2基因进行突变分析，并对发现的基因突变进行计算机辅助的二级结构模拟分析。结果测序结果表明，此家系线粒体DNA12SrRNA存在mtDNAG709A点突变，该突变未见报道；无tRNASer（UCN）基因突变；对GJB2突变分析发现4例具有299—300delAT。计算机分析显示12SrRNA的二级结构中第8、9茎环结构发生改变。结论家系中8例耳聋患者都具有线粒体12S水NAG709A位点的突变，该突变在正常人群中具有高度保守性，提示GT09A点突变与母系遗传家系成员的进行性耳聋具有相关性；10例具有G709A突变的母系遗传家系成员未出现耳聋的临床表现，提示G709A点突变可能在其他核修饰基因的协同作用下参与了听力损害的过程。
- 魏钦俊鲁雅洁张艳陈智斌邢光前曹新
- 关键词：母系遗传线粒体DNARRNA
- 常染色体显性遗传性听神经病家系候选致病基因突变筛查被引量：3
- 2012年
- 目的:了解DIAPH3基因以及25个已克隆的常染色体显性遗传非综合征型聋(DFNA)基因的已知突变是否与一个中国听神经病家系的发病有关。方法:以一个现存3代9人的常染色体显性遗传性听神经病核心家系为研究对象,对所有家系成员进行DIAPH3基因5′端非翻译区(5′UTR)的PCR扩增,1例听神经病患者进行DIAPH3、GJB2和GJB3基因全部编码区以及对其余23个DFNA基因的50个外显子进行PCR扩增,扩增产物经纯化后直接测序,筛查致病突变。结果:该家系未发现DIAPH3基因5′UTR的已知突变c.-172G>A和新的致聋突变,对GJB2、GJB3基因全部编码区及其余23个DFNA基因已知突变位点的筛查也无阳性发现。结论:结合前期工作,对照该家系成员DIAPH3基因及已克隆的25个DFNA基因的筛查结果,进一步提示该家系听神经病的发生可能是由新基因所致。
- 卢新红陈睿春鲁雅洁魏钦俊陈智斌曹新邢光前
- 关键词：听神经病基因突变常染色体显性遗传
- 在高脂血症小鼠耳蜗组织中Osbpl2蛋白的表达变化对听觉功能的影响
- 为了研究氧化固醇结合蛋白样蛋白2（Oxysterol Binding Protein-like 2, OSBPL2）基因突变致聋伴固醇代谢异常的分子致病机制,本研究在成功构建高脂血症小鼠模型的基础上,采用荧光定量PCR分...
- 姚俊魏钦俊鲁雅洁曹新
- 关键词：高脂血症耳聋
- 文献传递
- OSBPL2基因缺陷型巴马小型猪肥胖相关特征的分析被引量：1
- 2020年
- 目的:分析氧化固醇结合样蛋白2(oxysterol binding protein-like 2,OSBPL2)基因缺陷型巴马小型猪肥胖相关的表型特征和可能机制。方法:将3月龄野生型(wild type,WT)和OSBPL2缺陷型(mutant type,MT)巴马小型猪饲喂高脂饲料(high fat diet,HFD)。喂食9个月后检测体重、皮下脂肪厚度,HE染色观察肝脏脂肪变性,电镜观察肝脏组织亚细胞结构,检测血清甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶等生化指标,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肝脏脂肪合成分化相关基因的变化,Western blot及免疫组织化学法检测脂肪酸结合蛋白4(adipocyte fatty acid binding protein 4,FABP4)及酰基辅酶A氧化酶1(acylcoenzyme A oxidase 1,ACOX1)蛋白表达水平。结果:MT-HFD组体重、皮下脂肪厚度明显高于WT-HFD组(P<0.05);HE染色结果显示,MT-HFD组脂肪细胞显著增大(P<0.001);MT-HFD组肝脏脂肪空泡变性明显多于WT-HFD组。qRT-PCR、Western blot及免疫组织化学染色结果发现,MT-HFD组肝组织中FABP4蛋白含量明显增加,ACOX1蛋白明显减少;电镜结果显示MT-HFD组肝脏线粒体相关内质网膜长度变短。结论:OSBPL2缺陷引起巴马小型猪肥胖相关表型特征,可能与抑制脂肪酸β-氧化、影响能量代谢平衡及促进脂肪分化有关。
- 王天明曾华沙王盈杨海元姚俊鲁雅洁魏钦俊曹新戴一凡
- 关键词：基因敲除肥胖
- 中国汉族非综合征耳聋患者SLC26A5 IVS2-2A>G的突变
- 2009年
- 目的:探讨SLC26A5基因IVS2-2A>G突变与中国汉族非综合征型感音神经性聋的相关性。方法:收集南京市聋校非综合征型感音神经性聋患者120例及同地区听力正常人100例外周血样本,常规方法提取DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增SLC26A5IVS2-2区域,对PCR产物直接测序进行突变性质的鉴定。结果:所有研究对象的基因区域均扩增成功,序列分析在120名散发聋患者及100例听力正常人中均未检测到SLC26A5基因IVS2-2位点任何形式的碱基变异。结论:SLC26A5IVS2-2A>G在中国汉族非综合征耳聋及听力正常人群中携带率较低或无突变,其与遗传聋的相关性需进一步研究评价。
- 刘丽君魏钦俊陈智斌鲁雅洁曹新邢光前
- 关键词：突变
- 斑马鱼胚胎早期发育过程中WFS1基因的时空表达特征分析
- 哺乳动物细胞中WFS1（Wolfram syndrome 1）基因编码一类膜结构的转运蛋白,其主要功能与膜物质运输、蛋白加工和胰岛β细胞的抗凋亡密切相关。WFS1突变可导致在临床上以1型糖尿病、视神经萎缩、双侧重度耳聋和...
- 魏钦俊姚俊鲁雅洁曹新
- 关键词：斑马鱼
- 文献传递
