丁文超
- 作品数：11 被引量：64H指数：4
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- 用于鳗利斯顿氏菌的LAMP-LFD检测的引物和探针
- 本发明公开了鳗利斯顿氏菌的LAMP-LFD检测方法，包括鳗利斯顿氏菌empA基因克隆和测序步骤，设计三对LAMP的引物FIP、BIP、LF、LB、F3、B3和一条探针Van-HP步骤，其中Van-FIP为5’端生物素标记...
- 陈炯李明云史雨红陆新江李登峰史西志丁文超
- 文献传递
- 环介导恒温扩增技术快速检测溶藻弧菌被引量：18
- 2009年
- 溶藻弧菌是中国南部水产养殖业中弧菌病的最主要病原菌,其快速检测具有重要意义。根据溶藻弧菌外膜蛋白OmpK基因序列,设计一套引物,通过条件优化,成功建立了针对致病性溶藻弧菌的环介导恒温扩增检测技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。应用LAMP技术,在65℃温育1h的条件下扩增溶藻弧菌基因组DNA,琼脂糖凝胶电泳得到特异性梯度条带。该研究建立的LAMP法特异性检出致病性溶藻弧菌,其检测下限比PCR法低一个数量级,相当于n(cell)=38/mL的菌液浓度,灵敏度更高。综合分析表明,LAMP技术是快速、简易、实地诊断溶藻弧菌的理想工具。
- 丁文超胡健饶史雨红李明云陈炯
- 关键词：溶藻弧菌
- 鳗利斯顿氏菌的LAMP-LFD检测方法
- 本发明公开了鳗利斯顿氏菌的LAMP-LFD检测方法，包括鳗利斯顿氏菌empA基因克隆和测序步骤，设计三对LAMP的引物FIP、BIP、LF、LB、F3、B3和一条探针Van-HP步骤，其中Van-FIP为5’端生物素标记...
- 陈炯李明云史雨红陆新江李登峰史西志丁文超
- 象山港养殖大黄鱼寄生新贝尼登虫成虫形态学和28S rDNA,ITS1分子鉴定被引量：1
- 2012年
- 贝尼登类单殖吸虫是象山港海水养殖鱼类中一类危害严重的寄生虫。应用PCR扩增及DNA序列分析的分子生物学手段,并结合对成虫的形态学分析,对象山港养殖大黄鱼体表寄生的贝尼登类单殖吸虫(记作XSp)进行了种类鉴定,结果表明XSp从形态特征上属于新贝尼登虫属,与梅氏新贝尼登虫高度相似。扩增得到XSp的28SrDNA和ITS1序列长度分别为393和427bp,与梅氏新贝尼登虫和鱾新贝尼登虫的5个28SrDNA序列、2个ITS1序列的比对分析显示相似性除1个为97.4%外其余均大于99%,提示XSp与这几个鱾新贝尼登虫和梅氏新贝尼登虫为种内关系,而XSp与贝尼登虫的3个28SrDNA和1个ITS1序列相似性分别为84.3%～89.5%和60.2%。系统进化树显示该吸虫与梅氏新贝尼登虫和鱾新贝尼登虫形成一个紧密的簇,而与贝尼登虫亲缘关系较远。根据普通生物学和序列特征分析,将XSp定种为梅氏新贝尼登虫,并且支持Whittington和Horton(1996)提出的梅氏新贝尼登虫和鱾新贝尼登虫为同种异名的分类观点。
- 苗亮李明云蒋进丁文超陈炯史雨红
- 关键词：RDNAITS1
- 溶藻弧菌外膜蛋白OmpK基因表达和间接ELISA检测方法的初步建立被引量：10
- 2010年
- 溶藻弧菌是中国南部水产养殖业中弧菌病的最主要病原菌,数量居海洋类弧菌之首,其快速检测具有重要意义。以溶藻弧菌国内标准株ATCC17749基因组DNA为模板,PCR扩增出外膜蛋白OmpK基因,将其克隆入表达载体pET-28a中,获得重组质粒pET-28a-OmpK,限制性内切酶结合琼脂糖凝胶电泳分析和序列测定结果表明,该序列开放读码框正确且与已发表的OmpK结构编码序列完全一致。将重组质粒pET-28a-OmpK转化大肠杆菌BL21pLysE,高效表达重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠所得的高免血清能外膜蛋白OmpK特异性结合,表明体外表达的重组蛋白OmpK具有良好的免疫原性和反应原性。利用该抗溶藻弧菌外膜蛋白OmpK的抗血清建立了间接ELISA检测方法,检测灵敏度为104CFU/mL,能特异性检测出溶藻弧菌,与其他菌株无交叉反应。
- 李明云丁文超陈炯史雨红
- 关键词：溶藻弧菌原核表达
- 传染性脾肾坏死病毒的LAMP-LFD检测方法
- 本发明公开了传染性脾肾坏死病毒的LAMP-LFD检测方法，包括DPOL基因纯化克隆和测序步骤，设计三对LAMP的引物BIP、FIP、B3、F3、LF、LB和一条探针FITC-Probe步骤，其中FIP为5’端BIPO生物...
- 陈炯李明云史雨红丁文超
- 文献传递
- 大黄鱼4个家系的形态差异分析被引量：24
- 2009年
- 采用聚类分析、主成分分析和判别分析3种多元分析方法,结合传统形态学测定和框架测定,对大黄鱼(Pseudosciaena crocea)反交家系、岱衢洋家系、官井洋家系和正交家系进行形态差异比较.可数性状卡方分析表明,4个家系可数性状无显著差异;可量性状和框架数据的聚类分析结果表明,岱衢洋家系、官井洋家系和正交家系之间形态差异较小,而它们同反交家系差异显著;主成分分析提取了3个主成分,结果也表明反交家系与其他家系差异较大,与聚类分析结果相一致;通过对10个贡献率较大的形态变量进行逐步判别分析,建立了4个家系的判别公式,判别准确率P1为83.3%～100%,P2为87.5%～96.8%,综合判别率为92.5%.
- 丁文超李明云管丹冬冯威
- 环介导等温扩增技术与横向流动试纸条法快速检测鳗利斯顿氏菌的研究被引量：8
- 2011年
- 采用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)、横向流动试纸条技术(Lateral flow dipstick,LFD),建立一种鳗利斯顿氏菌快速检测方法。针对鳗利斯顿氏菌金属蛋白酶基因设计一套特异性引物及异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针,结合生物素标记的环介导等温扩增技术扩增反应和横向流动试纸条技术对鳗利斯顿氏菌进行检测;比较LAMP-AGE、LAMP-LFD和PCR-AGE的灵敏度;选取4株鳗利斯顿氏菌和6株非鳗利斯顿氏菌验证LAMP-LFD特异性。试验结果表明,应用LAMP-LFD,能在30 min内完成鳗利斯顿氏菌的检测;LAMP-LFD检测的灵敏度为7.7 cfu/ml,LAMP-AGE和PCR-AGE检测的灵敏度均为77 cfu/ml;4株鳗利斯顿氏菌均呈阳性反应,其他6株非鳗利斯顿氏菌均为阴性。应用LAMP-LFD检测鳗利斯顿氏菌特异性强、灵敏度高、并且操作安全、简便、快捷。
- 董培培李长红丁文超陈炯史雨红黎昊雁李明云
- 关键词：鳗利斯顿氏菌环介导等温扩增技术
- 传染性脾肾坏死病毒的LAMP－LFD检测方法
- 本发明公开了传染性脾肾坏死病毒的LAMP－LFD检测方法，包括DPOL基因纯化克隆和测序步骤，设计三对LAMP的引物BIP、FIP、B3、F3、LF、LB和一条探针FITC－Probe步骤，其中FIP为5’端BIPO生物...
- 陈炯李明云史雨红丁文超
- 文献传递
- 几种水产养殖动物病原快速检测方法的研究
- 溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus, ISKN...
- 丁文超
- 关键词：溶藻弧菌鳗弧菌传染性脾肾坏死病毒对虾白斑症病毒ELISA
- 文献传递
