于澜
- 作品数：52 被引量：79H指数：5
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 双抗体夹心ELISA检测HIV-1 gp41抗原方法的建立被引量：1
- 2006年
- 目的:建立检测HIV-1gp41抗原的双抗体夹心ELISA,并探讨其临床应用的可行性。方法:用饱和硫酸铵(SAS)纯化抗HIV-1gp41-5单克隆抗体(mAb),用HRP标记后建立双抗体夹心ELISA法,对其灵敏度及特异性进行检测,并用该方法对40份HIV-1阳性血清进行了检测。结果:用mAbE12(5μg/mL)为包被抗体,2H6为酶标记抗体(1∶900)建立了双抗体夹心ELISA法,检测gp41-5多肽的灵敏度是100pg/mL。对HIV-1阳性血清中gp41抗原的检出率为67.5%(27/40)。结论:建立了特异性强、灵敏度良好的检测HIV-1gp41抗原的双抗体夹心ELISA法。
- 于澜徐志凯王海涛黎志东张芳琳
- 关键词：HIV-1GP41单克隆抗体双抗体夹心酶联免疫吸附试验
- 汉坦病毒糖蛋白的结构及功能研究进展被引量：2
- 2012年
- 汉坦病毒感染人类可导致肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征,其包膜糖蛋白(GP)是重要的结构蛋白,本文就汉坦病毒糖蛋白的结构和功能的研究进展作一综述。
- 于蒙蒙于澜张芳琳
- 关键词：汉坦病毒糖蛋白核衣壳蛋白
- 汉坦病毒感染C57BL/6小鼠组织中特异性抗原的检测被引量：3
- 2011年
- 目的通过检测汉坦病毒感染C57BL/6小鼠组织中特异性病毒抗原,以建立汉坦病毒感染动物的评价体系。方法将汉坦病毒陈株按照原病毒液、10-1、10-2三个滴度经肌肉注射感染C57BL/6小鼠,在感染后的第3、6、9、12、15天,分别取小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等组织研磨后制成病毒悬液,以ELISA法检测各组织中的病毒特异性抗原。结果 C57BL/6小鼠感染汉坦病毒后短期内在其肝脏和脾脏可以检测到特异性抗原,随着时间的延长,这些抗原逐步消失。结论上述结果为建立汉坦病毒感染动物的评价体系提供了一种参考。
- 程林峰白露李凯李璞媛胡刚于澜吴兴安徐志凯张芳琳
- 关键词：汉坦病毒C57BL/6小鼠抗原
- 汉滩病毒囊膜糖蛋白G1基因重组腺病毒载体的构建及其在Vero E6细胞中的表达
- 本文采用PCR法从含汉滩病毒-76118株M基因的M56质粒扩增糖蛋白G1基因片段,利用穿梭质粒pShuttle,将其克隆入Adeno-XviralDNA,获得重组腺病毒DNA,转染HEK293细胞,包装、扩增后得到汉滩...
- 吴兴安张芳琳于澜史梦远白文涛胡刚刘勇王海涛徐志凯
- 关键词：汉滩病毒囊膜糖蛋白基因重组腺病毒载体
- 文献传递
- 汉滩病毒G1S0.7嵌合基因重组腺病毒的构建及鉴定
- HFRS在我国年发病人数为5-10万人,临床病情严重,病死率较高。由于该病早期诊断比较困难,且目前尚无HFRs特异性治疗药物,因此积极研究开发各类病毒疫苗,通过疫苗降低发病率是当前和长远防治该病的主要措施。由于目前传统疫...
- 张芳琳刘勇王海涛于澜胡刚吴兴安史梦远白文涛徐志凯
- 文献传递
- 抗汉滩病毒中和性鼠／人嵌合抗体基因转化拟南芥的初步研究
- 2008年
- 目的:建立能表达抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的转基因植株,为汉坦病毒基因工程抗体的研究提供实验基础。方法:将构建的含抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的植物抗体表达质粒3G1MH-pCAMB IA2301,用TSS冻融法导入农杆菌GV3101,利用农杆菌介导的抽真空转基因技术转化野生型拟南芥,获得转基因植株。用PCR、Northernblot检测转基因植株。结果:经PCR分析表明,拟南芥的基因组中有抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因整合,并成功获得7株T0代转基因拟南芥。植株提取RNA,经Northernblot分析可见约1 500 bp及800 bp处的目的条带,为编码重、轻链的目的基因。结论:成功地构建了含抗汉滩病毒中和性鼠/人嵌合抗体基因的拟南芥植株,为进一步利用植物表达治疗性抗体奠定了基础。
- 周伟吴兴安罗雯胡刚张芳琳白文涛张亮于澜史梦远徐志凯
- 关键词：汉滩病毒嵌合抗体转基因植物植物抗体
- 联合应用抗原递呈分子HSP70C基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒的构建及鉴定
- 2014年
- 目的构建含有抗原加工递呈分子基因HSP70C的HTNV嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒。方法通过PCR扩增获得HSP70C基因,分别克隆入本室已构建的重组腺病毒转移载体pShuttle-pCAG-GnS0.7及pShuttle-pCAGGcS0.7中,进而构建新的重组腺病毒转移载体pShuttle-pCAG-GnS0.7-HSP70C及pShuttle-pCAG-GcS0.7-HSP70C。进一步通过双酶切将转移载体中的目的嵌合基因再分别克隆入腺病毒载体,得到重组腺病毒载体rAd-pCAG-GnS0.7-HSP70C、rAd-pCAG-GcS0.7-HSP70C,使用Pac I线性化后转染HEK293细胞,包装后获得重组腺病毒,感染HEK293细胞后用免疫荧光法检测表达产物。结果经过酶切、PCR扩增和测序结果显示,各重组腺病毒转移载体及重组腺病毒载体构建正确。免疫荧光实验检测到各重组腺病毒中目的蛋白的表达。结论成功制备了含抗原递呈分子HSP70C基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒,为进一步研究构建的汉滩病毒重组腺病毒的免疫学特性奠定了实验基础。
- 张亮程林峰于澜刘梓谕李璞媛徐志凯张芳琳
- 关键词：汉滩病毒腺病毒热休克蛋白70
- 含汉滩病毒囊膜糖蛋白的重组假病毒免疫小鼠可诱导产生免疫保护作用
- 汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)主要引起肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS),其囊膜糖蛋白(GP)可刺激机体产生中和抗体,对感染动物和人体...
- 于澜张亮张蕾王芳刘梓谕张芳琳徐志凯
- 羊布鲁菌外膜蛋白omp2b的克隆,原核表达及纯化被引量：1
- 2011年
- 研究羊布鲁菌外膜蛋白omp2b基因的克隆,原核表达,以及纯化。根据羊布鲁菌M5株外膜蛋白omp2b蛋白基因序列设计引物,扩增出大小约为1 130 bp的目的基因片断,克隆入融合表达载体pGEX-4T-1,构建重组质粒pGEX-4T-1-omp2b。在大肠埃希菌中将该蛋白表达并用亲和层析法纯化。用Western-blot分析方法鉴定纯化蛋白。结果成功构建了pGEX-4T-1-omp2b原核表达载体并在大肠埃希菌中表达了omp2b基因,纯化后所获得的蛋白与目的蛋白大小一致且与兔抗布鲁菌血清发生特异性反应,说明其为布鲁菌omp2b蛋白。本研究成功构建了pGEX-4T-1-omp2b原核表达载体,并且在大肠埃希菌中进行表达,纯化的omp2b蛋白具有良好的免疫原性。
- 张蕾张亮于澜白文涛应旗康李凯程林峰叶伟吴兴安徐志凯张芳琳
- 关键词：克隆纯化
- 人IFN-β基因启动子荧光表达载体的构建及鉴定
- 2014年
- 目的构建人IFN-β基因启动子萤火虫荧光素酶报告基因载体(pGL3-IFNB1)及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体(pGE3-IFNB1),并在A549细胞中进行表达验证。方法采用PCR方法扩增出IFN-β启动子区片段,克隆入荧光表达载体pGL3 basic和pGE3 basic,并用脂质体瞬时转染A549细胞,6 h后用汉滩病毒(HTNV)感染转染后的细胞,24 h后检测重组载体在细胞内的表达情况。结果重组载体pGL3-IFNB1和pGE3-IFNB1分别经双酶切鉴定及序列测定证实载体构建正确;且在A549细胞内成功表达。经HTNV刺激后表达明显增加。结论成功构建了人IFN-β启动子荧光素酶报告基因载体(pGL3-IFNB1)及增强型绿色荧光蛋白表达载体(pGE3-IFNB1),为进一步研究病毒诱导产生IFN-β机制提供了有用的工具。
- 徐永妮曹梦远惠倩倩叶伟于澜张亮张芳琳
- 关键词：IFN-Β启动子汉滩病毒病毒感染
