付溥博
- 作品数：16 被引量：54H指数：5
- 供职机构：北京出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目质检公益性行业科研专项项目全球变化研究国家重大科学研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程农业科学更多>>
- 北京港口水产中非O1/O139群霍乱弧菌MLST分型研究
- 目的:分析2008年～2011年北京港口进出口水产中非O1/O139群霍乱弧菌的多位点序列分型(MLST)特征,为霍乱弧菌导致食品安全事件的有效溯源提供理论支持.
方法:选取2008年～2011年北京港口食源性...
- 付溥博张琳曾静张西萌魏咏新魏海燕耿荣
- 关键词：水产品霍乱弧菌多位点序列分型菌株鉴定
- 北京港口水产品中非O1/O139群霍乱弧菌MLST分型研究被引量：2
- 2018年
- 为了分析2008-2011年北京港口进出口水产品中非O1/O139群霍乱弧菌的多位点序列分型(MLST)特征,为霍乱弧菌导致食品安全事件的有效溯源提供理论支持,选取2008-2011年北京港口食源性非O1/O139群霍乱弧菌分离株67株,采用毒力基因PCR检测并用MLST分析。结果:毒力基因PCR检测结果显示,所有菌株均未检出CTX、tox R、hly A 3种基因。菌株的MLST结果显示,菌株可被分为62个ST型,具有明显的多样性。其中原有STs 2个,新发现STs 60个。同ST型菌株均来源于同一国家,本实验数据同pubmlst数据库中数据进行分析,有7个STs可以归为7个克隆组,它们来源于中国和泰国,同组内STs来源于中国、澳洲、法国、泰国和非洲。表明北京港口非O1/O139群霍乱弧菌遗传特征复杂多样,MLST方法可作为可靠的食品污染溯源手段,相同地区的菌株有一定的地域特点,此研究丰富了现有霍乱弧菌MLST数据库,为其溯源提供支持。
- 付溥博张琳曾静张西萌魏咏新魏海燕耿荣
- 关键词：多位点序列分型
- 实时荧光定量RT-PCR法快速定量检测果蔬中星状病毒被引量：3
- 2017年
- 目的:针对不同果蔬表面建立星状病毒富集与RNA提取方法,结合已报道的实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)引物和探针,实现果蔬中星状病毒的高灵敏快速定量检测。方法:利用10倍梯度稀释的星状病毒c RNA分子检测Ct值及其对应的初始浓度,构建标准曲线,为星状病毒的定量检测提供参考。将ISO/TS 15216-2:2013针对果蔬中诺如病毒和甲肝病毒RNA的提取方法用于星状病毒的检测,利用人工感染的大白菜和草莓样品,分析病毒回收率、灵敏度及检测重复性。最终通过60份果蔬样品的检测验证该方法的实用性。结果:所建立的实时荧光定量RT-PCR方法扩增效率达95.9%,检测低限为5.6拷贝/反应。人工感染的大白菜样品中病毒回收率在0.94%~9.63%之间,而人工感染草莓样品中病毒回收率最高达1.03%。对同一感染浓度的样品在不同时间的检测结果变异系数均小于2%。最终检出1份来自北京农贸市场的草莓样品为星状病毒阳性,检测阳性率达1.67%。结论:建立的果蔬中星状病毒荧光RT-PCR定量检测方法快速、高效、灵敏,在食源性病毒的日常筛查和风险评估工作中具有重要的应用价值。
- 马丹魏海燕徐蕾蕊魏咏新汪琦张西萌付溥博刘莉赵晓娟曾静
- 关键词：星状病毒实时荧光定量RT-PCR果蔬
- MS2噬菌体在贝类食源性病毒检测中过程质控应用被引量：5
- 2016年
- 目的研究MS2噬菌体作为过程质控品在贝类食源性病毒检测中的应用。方法采用双层琼脂培养法制备MS2噬菌体悬液,计算效价;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检验其稳定性;比较3种RNA提取方法的提取效率,确定M S2噬菌体的最适添加量范围;分析M S2噬菌体添加对贝类食源性病毒检测的影响。结果稳定性研究表明-20℃和-80℃28 d MS2噬菌体(悬液的效价浓度为7.13×1011pfu/m L)时RNA含量无明显变化[t=0.464,P=0.653(-20℃);t=0.602,P=0.561(-80℃)]。MS2噬菌体最适添加量范围为7.13×108~7.13×107pfu/m L。在最适添加范围内,试剂盒方法和Trizol裂解结合磁珠纯化方法回收率均>1%。2种阳性样品均被检出,其Ct值比较接近,M S2噬菌体对贝类食源性病毒检测无影响(t=0.170,P=0.873)。结论M S2噬菌体可作为贝类食源性病毒qRT-PCR检测的过程质控品,是监控假阴性结果的一种简便有效的方法。
- 徐蕾蕊魏海燕马丹汪琦张西萌李丹付溥博刘莉魏咏新曾静
- 关键词：MS2噬菌体贝类
- 用RT-PCR法检测食品中诺沃克样病毒被引量：10
- 2004年
- 使用RTPCR法对贝类样品中的诺沃克样病毒进行了检测。对食品中不同的病毒富集方法进行了研究,评价了CHCl3和Frezon去除RTPCR抑制剂的效果,筛选出最佳的病毒富集方法即2次PEG6000(终浓度12%PEG6000,03mol/LNaCl)沉降病毒,并使用CHCl3除去RTPCR抑制剂。此富集方法的回收率为135%。另外,对不同的RNA提取方法的灵敏度进行了比较,最终确认硅胶膜法为简便、快速、有效的RNA提取方法。并且,使用了Superscript反转录酶进行反转录,提高了检测的灵敏度。选用了289和290混合引物进行食品中NLVs的检测,这一引物组合可同时检测Ⅰ型和Ⅱ型NLVs,扩增出1个319bp的特异性片段。通过以上条件的优化,建立了通过RTPCR检测贝类中NLVs的有效方法。该方法的NLVs最低检出限为10×103RT-PCR50/15g。对32件贝类样品进行了NLVs的检测,其中2份毛蚶中被检出NLVs。
- 陈广全饶红张惠媛付溥博冯骞
- 关键词：RT-PCR法CHC食品贝类RNA提取方法
- 2008～2017年间北京进出口水产品中副溶血性弧菌耐药性分析被引量：4
- 2018年
- 目的了解北京进出口水产品中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的耐药情况。方法对2008~2017年间北京进出口水产品中分离出的320株副溶血性弧菌应用药敏纸片扩散法(K-B法)进行21种常用抗生素药敏测试。结果 89.1%的实验菌株同时对氨苄西林耐药,而对环丙沙星、诺氟沙星、庆大霉素、多粘菌素B、亚胺培南全部敏感;分别有高达94.7%和82.1%的菌株对红霉素和链霉素表现为中介。结论实验菌株存在大量中介耐药和异质性耐药的情况,应进一步加强水产品中副溶血性弧菌耐药性的监测工作,以期指导临床和水产养殖中抗生素的使用。
- 付溥博张西萌马丹徐蕾蕊魏海燕魏咏新曾静
- 关键词：副溶血性弧菌水产品耐药性
- 星状病毒核酸检测标准物质的研制被引量：7
- 2016年
- 目的：研制用于食品中星状病毒核酸检测的c RNA标准物质。方法：利用基因克隆体外转录方法制备星状病毒c RNA纯品,初步定量后稀释至适宜浓度进行分装,其中一部分分装样品添加RNAsafe处理,剩余部分不做处理,制备2种标准物质样品。采用实时荧光定量实时聚合酶链式反应（real-time-polymerase chain reaction,RTPCR）方法检验2种标准物质样品均匀性和稳定性。样品中RNA浓度（拷贝/μL）通过荧光定量RT-PCR和数字PCR联合定值获得,并进行不确定度分析。结果：均匀性结果显示2种样品组间精密度与组内精密度差异均无统计学意义（P〉0.05）。稳定性检验表明20-25℃10 d、4℃14 d、-20℃3个月及-80℃和液氮6个月2种样品c RNA含量无显著变化。RNAsafe（-）标准物质定值为：（1.652±0.143）×10^8拷贝/μL（-80℃）和（1.652±0.135）×10-8拷贝/μL（液氮）。结论：RNAsafe（-）标准物质样品可作为用于星状病毒核酸检测的标准物质。
- 徐蕾蕊魏海燕林长军马丹汪琦张西萌李丹付溥博刘莉魏永新赵晓娟曾静
- 关键词：星状病毒核酸标准物质
- 食品微生物检测试剂盒评价方法建立与应用被引量：2
- 2015年
- 目的建立实用可行的食品微生物检测试剂盒的评价方法。方法本研究以ISO 16 140为理论基础、GB 4789.10-2010为参比方法 ,从检测特异性、灵敏度、耐变性/统计学分析等方面对3M公司Petrifilm大肠埃希氏菌检测试剂盒(PEC)进行了可替代性评价。结果 PEC法对目标菌检测的特异性为84%,对非目标菌检测的特异性为100%;灵敏度检测中在25份低浓度添加样品里,PEC法的灵敏度有22份可以达到10 CFU/g,3份火腿样品的结果为阴性,国标法所有样品灵敏度均可达到10 CFU/g;耐变性评价中,PEC法在35℃/37℃、18 h/24 h耐变性条件的比较中检测结果差异均无统计学意义(P>0.05);应用2种方法对添加高、中、低3个水平的大肠埃希菌的五大类样品进行测试,线性方程为y=0.942 1x+0.328 4,相关系数为0.798 9,5类样品不同方法测试结果差异均无统计学意义(P>0.05);应用2种方法对30份自然样品进行检测,PEC法检测出4份阳性样品,国标法检测出6份阳性样品,2种方法阳性符合率为93.33%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论以ISO 16140为理论基础可建立一套评价方法 ,此方法可系统的对微生物检测用试剂盒的可替代性进行评价。
- 付溥博张西萌韩笑刘莉马丹魏海燕王紫薇曹嘉悦朱涵俊曾静
- 关键词：食品微生物
- 3D人工皮肤模型用于化学品皮肤刺激性实验的评估被引量：4
- 2014年
- 目的采用"EpiSkin"3D人工皮肤模型,对20种化学品的刺激性进行评价。方法 20种化学品(固体10 mg、液体10μl)局部接触检测模型表面15 min,用MTT方法测定细胞活力。结果以相对细胞活力值为判定刺激性的依据,在20种化学品中,检测模型特异性为70%,灵敏度为90%。结论 "EpiSkin"3D人工皮肤模型能正确分类所测试的化学品,可以尝试用于化学品皮肤刺激性测试。
- 马丹赵晓娟付溥博张西萌魏海燕刘莉曾静
- 关键词：刺激性化学品
- 蔬菜及水果中NLVs和HAV检测的研究被引量：8
- 2007年
- 目的建立蔬菜水果中诺沃克样病毒(NLVs)和甲肝病毒(HAV)的RT-PCR检测方法。方法使用具有较强缓冲力的甘氨酸缓冲液将病毒从试样表面洗脱下来,用PEG6000将病毒沉降后进行RNA提取和RT-PCR检测。结果蔬菜中NLVs和HAV检测的灵敏度可达1.0×103RT-PCRU50/30 g试样和30 TCID50/30 g试样。而草莓样品的NLVs和HAV最低检出限为1.7×103RT-PCRU50/100 g试样和48 TCID50/100 g试样。结论该方法灵敏、可靠。
- 饶红陈广全冯骞付溥博汪琦
- 关键词：聚合酶链反应诺沃克病毒蔬菜水果
